L'hépatite est isolée dans groupe séparé maladies inflammatoires foie. Ils peuvent avoir différentes étiologies et formes. Au premier soupçon de telles maladies, le médecin prescrit des tests appropriés. Mais comme les pathologies sont de nature différente, les méthodes de détection du virus diffèrent également.
Les virus de l'hépatite les plus fréquemment enregistrés sont A, B, C, D, E, F, G, qui sont causés par des facteurs quantitatifs. infection virale. De plus, des indicateurs de la maladie peuvent être observés lorsque fièvre jaune, oreillons, maladie d'Epstein-Barr, herpès, rubéole, cytomégalovirus, fièvre de Lassa, SIDA.
Inhibition de l'hémagglutination
Cette méthode pendant longtemps considérée comme la méthode de référence. C’est simple, sensible et reproductible. Il s’agit d’une méthode adaptée aux études de séropositivité. Cependant, cette méthode n'identifie pas le sérotype et réactions croisées avec d’autres flavivirus, limitez son utilisation. En général, il est assez rare de disposer de deux sérums séquentiels et le diagnostic est souvent rétrospectif.
Réaction de fixation du complément
Le principe de cette technique est le même pour tous les virus. L’intérêt de cette méthode est donc relatif.Dosage immunoenzymatique pour l'hépatite
La méthode de séronutralisation la plus couramment utilisée consiste à réduire les plaques de lyse provoquées par le virus. Selon les auteurs, l'inhibition du pourcentage d'intervalles de lyse est fixée à 50 % ou 90 %. Une inhibition de 90 % équivaut généralement à une infection primaire, tandis qu'une inhibition de 50 à 70 % est davantage associée à une fièvre secondaire. De plus, il permet de déterminer le sérotype du virus lors de la primo-infection. Cette méthode sensible et spécifique a important pour évaluer l’efficacité du vaccin.
Causes bactériennes le développement de pathologies est observé en présence de syphilis, de leptospirose, de maladies toxiques - dans l'alcoolisme, l'intoxication médicamenteuse et chimique. Il existe également des hépatites causées par maladie des radiations et les pathologies auto-immunes. Chacun de ces types de pathologie nécessite une approche individuelle du traitement.
Par conséquent, si le patient a symptômes cliniques de la maladie, une prise de sang est prescrite pour les marqueurs divers types maladies.
Cependant, cette méthode est coûteuse, longue, difficile à mettre en œuvre et nécessite un contrôle de la culture cellulaire. Ils ont donc une place prédominante dans la routine, même s’ils ne permettent pas de poser un diagnostic fiable et ne fournissent pas toutes les données nécessaires à la surveillance épidémiologique du virus. Deux principes ont été développés : méthodes indirectes et immunocapture.
Tableau 1 Principaux kits commerciaux utilisés pour le diagnostic sérologique de la dengue. Malheureusement, ce n’est pas le cas dans d’autres régions du monde, notamment dans les régions d’outre-mer. Leur présence ne permet pas d’établir une infection persistante, mais l’infection récente date de moins de trois mois. De ce fait, il est recommandé de confirmer le diagnostic par l’analyse du sérum de convalescence.
Pour déterminer avec précision le type d'hépatite (virale, non virale, aiguë, chronique ou diffuse), les patients doivent donner du sang pour obtenir des anticorps. Mais une telle procédure obligatoire nécessite une préparation préalable de haute qualité.
Par conséquent, avant de procéder à l’analyse, vous devez considérer les points suivants :
- Le don de sang doit être effectué à jeun, car ses caractéristiques varient considérablement au cours de la journée.
- Le dernier repas doit être pris au moins huit heures avant le test. Boire du café, des jus de fruits, du thé et autres boissons similaires n'est pas autorisé, seule l'eau potable est autorisée.
- Pendant deux jours avant le test, vous ne devez pas manger d'aliments gras ou gras. nourriture frit, boire de l'alcool.
- Il est interdit de fumer plusieurs heures avant l'intervention.
- n'abandonne pas après les radiographies, les échographies, les massages, la physiothérapie.
- La veille de l'intervention, l'utilisation de médicaments est complètement arrêtée, le stress physique et émotionnel est réduit.
- S'il n'est pas possible d'annuler médicaments, la liste de ces fonds doit être indiquée séparément avant l'analyse.
Face à la difficulté d'obtenir deux sérums consécutifs, les laboratoires s'appuient sur un seul résultat positif pour suspecter Infection aiguë. Ces informations sont utiles pour les études cliniques et physiopathologiques. Eliza modifiée a été développée pour détecter d’autres classes d’immunoglobulines. Ce prélèvement, plus aisé chez l'enfant ou en milieu défavorisé, peut être intéressant pour l'étude de la séropositivité. Enfin, la méthode Eliza a été adaptée pour déterminer le sérotype responsable de l'infection.
Les périodes où il est nécessaire de donner du sang pour confirmer le type d'hépatite varient. Ainsi, les marqueurs du virus du groupe A peuvent être identifiés dès les premiers symptômes de la pathologie, puisque la concentration quantitative maximale d'anticorps dirigés contre celui-ci est observée dans les trente jours.
Le virus de l'hépatite C est détecté au plus tôt un mois et demi après l'infection suspectée.
Méthodes de diagnostic direct
Cependant, cette méthode est moins fiable en cas de dengue secondaire.
Détection des antigènes viraux
Usage des anticorps monoclonaux a permis d’améliorer la spécificité en réduisant les réactions croisées entre différents flavivirus. Plusieurs études ont été menées pour évaluer leur sensibilité et leur spécificité selon divers critères analyse : comparaison avec méthodes traditionnelles diagnostic, sérotype responsable de l'infection, délai entre l'apparition signes cliniques et l'échantillon, le statut immunitaire du patient ou la gravité de la maladie.Vous pouvez donner du sang contre le virus à l’hôpital ou appeler un médecin à domicile. Dans tous les cas, pendant l'intervention, le médecin doit respecter les mesures stériles nécessaires, c'est-à-dire utiliser du matériel et des instruments jetables.
La séquence de don de sang pour analyse :
- Le bras au niveau de l'avant-bras est bandé avec un garrot médical. De ce fait, le mouvement du sang dans le vaisseau s'arrête et la section de la veine dans la région du coude devient convexe. Le médecin insérera l'aiguille à cet endroit.
- La zone du coude, remplie de sang, peut être bien désinfectée avec un coton-tige imbibé d'alcool.
- Une aiguille est reliée à la seringue et insérée dans la veine. Immédiatement après, le garrot est retiré.
- Une fois la quantité de liquide requise sélectionnée, l'aiguille est retirée du récipient et un coton-tige imbibé d'alcool est appliqué sur la plaie. Pour arrêter rapidement le saignement et éviter la formation d'un hématome, il est pressé fermement, puis le bras est plié et appuyé contre le corps.
En effet, selon étude multicentrique Guzman et al. Les kits Pan-E et Platilia ont une sensibilité de 52 et 66 %, respectivement. Une standardisation et une évaluation future sont donc nécessaires pour déterminer la place exacte de cette méthode dans le diagnostic biologique de la dengue. En raison de sa rapidité et de sa facilité de mise en œuvre, il peut être utilisé pour le dépistage d’urgence des patients hospitalisés au lit pour une suspicion de dengue sévère. L'étude de Wang et Sekaran a révélé que le kit, qui peut également être utilisé sur du sang total, avait une sensibilité de 88,6 % et une spécificité de 98,7 % du sérum.
Indicateurs normaux et interprétation
Pour déterminer le virus de l'hépatite A, une méthode immunochimiluminescente est utilisée pour identifier les marqueurs du virus Ig G. La norme est inférieure à 1 S/CO. Si les résultats sont plus élevés, cela peut indiquer la présence d’un virus ou d’une maladie antérieure.
Le marqueur de l'hépatite B est déterminé par la présence d'anticorps Lg M. Chacune de leurs valeurs quantitatives constitue la base pour confirmer le diagnostic de l'hépatite B.
Cela peut aussi avoir grande importance pour le diagnostic de la dengue dans les zones non endémiques. Résultat positif vous permet de faire plus diagnostic précoce qu'avec la sérologie et une meilleure prise en charge médicale. Cependant résultat négatif devrait conduire à la poursuite du diagnostic par des techniques de biologie moléculaire, le risque de « faux négatifs » n’étant pas négligeable.
Il existe quatre méthodes : l'inoculation intracérébrale de souris nouveau-nées, la culture sur des lignées cellulaires de mammifères, l'inoculation intra-utérine de moustiques et culture de cellules moustiques, les deux derniers étant les plus sensibles. Ces cellules sont inoculées avec du sérum, du plasma, des fluides biologiques ou des extraits tissulaires. La culture virale peut être affectée par une virémie trop faible, selon le délai entre le prélèvement et l'apparition des signes cliniques : idéalement ce délai doit être inférieur à cinq jours et le plus tôt possible.
Le virus de l'hépatite C est diagnostiqué par ELISA. Normalement, les anticorps anti-VHC devraient être absents. S'ils sont détectés, un nouveau test est nécessaire. Si recherche supplémentaire a donné un résultat positif, la présence du virus de l'hépatite C est confirmée.
Marqueurs hépatite D-G sont également installés via dosage immunoenzymatique. En cas de présence d'anticorps dirigés contre les virus et leurs recombinants, le diagnostic est confirmé après deux prélèvements positifs.
Comme tous les virus, l’étape d’extraction est aujourd’hui disponible sous forme de kits commerciaux et automatisés. La technique a été adaptée en une seule étape et dans un seul tube, la rendant plus rapide avec moins de risques de contamination et tout en conservant une sensibilité équivalente voire améliorée. Il est également destiné à être utilisé à partir de sang total ou de cellules du sang périphérique.
Initialement, ces protocoles utilisaient plusieurs étapes et une paire d’amorces de type tube, quatre tubes par échantillon. Les manipulations ont ensuite été simplifiées pour n'avoir qu'une seule étape et un tube par échantillon. Ceci est conçu pour traiter de nombreux échantillons simultanément et réduire considérablement le risque de contamination croisée sans limiter la sensibilité des méthodes. La plupart des études utilisaient directement des amorces ou des sondes spécifiques aux quatre sérotypes.
Définition des radiations toxiques, auto-immunes, c'est-à-dire non hépatite virale quelque peu différent.
Dans de tels cas, des méthodes indirectes de confirmation du diagnostic sont utilisées :
- Test de fibrinogène. La norme de cette protéine est comprise entre 1,8 et 3,5 g/l. Un nombre faible indique une hépatite et des lésions des tissus hépatiques.
- Tests pour AST et ALT. La norme pour l'AST est de 0 à 75 U/l, pour l'ALT d'environ 50 U/l. Une augmentation quantitative des indicateurs indique la présence d'une maladie.
- Test de bilirubine. La plage normale est de 5 à 21 µmol/l. Un nombre plus grand indique le développement d'une pathologie.
- Protéine de lactosérum totale. La norme pour les adultes est de 66 à 83 g/l ; si la valeur numérique est inférieure, cela indique une diminution de l'albumine, c'est-à-dire la présence d'une maladie.
Pour confirmer l'hépatite auto-immune, un examen microscopique d'une biopsie hépatique est effectué. Cette analyse nous permet d'identifier quantitativement lésions spécifiques organe. Pour ce faire, un morceau de tissu hépatique est prélevé à l'aide d'une aiguille spéciale. Le matériau est ensuite traité avec des réactifs spéciaux et examiné au microscope. En outre, l'hépatite auto-immune est confirmée si l'analyse indique que le niveau de gammaglobuline G est 1,5 fois plus élevé et lorsque les anticorps anti-muscle lisse, anti-nucléaire et anti-mitochondrial à titre élevé ont un rapport supérieur à 1:80.
Les manipulations sont alors simplex, duplex ou quadriplex. D’autres ont choisi d’utiliser des amorces consensuelles. Ils dépendent sans doute de la méthode de sélection des échantillons à tester. De nombreux travaux utilisent la sérologie pour faire ce choix. En conséquence, les études qui offrent la sensibilité la plus faible sont celles qui s’appuient sur la sérologie pour l’échantillonnage. Une seule étude testant plus de 70 patients et plus d’une douzaine d’échantillons par sérotype montre une sensibilité supérieure à 85 % pour tous les sérotypes.
De plus, avec ce diagnostic, le patient présente des signes d'inflammation des tissus hépatiques et d'insuffisance hépatique.
Seul un spécialiste expérimenté peut connaître toutes les subtilités du déchiffrement de l'analyse, puisque, par exemple, une augmentation quantitative distincte protéines totales n'est pas nécessairement une confirmation d'une maladie du foie, et une diminution de l'albumine peut indiquer une pathologie rénale.
En général, les résultats de sensibilité rapportés dans diverses publications sont inégaux et le nombre d'échantillons testés est faible, avec souvent un déséquilibre entre les quatre sérotypes. Le paramètre déterminant est le délai entre l’apparition des signes cliniques et le prélèvement. La virémie a tendance à être plus élevée et plus durable lors des primo-infections.
Seuls deux laboratoires ont obtenu la note maximale. Les résultats ont souligné que le diagnostic moléculaire de la dengue doit être amélioré dans 28 laboratoires. Seules cinq méthodes répondaient à tous les critères de sensibilité et de spécificité, tandis que quatre autres obtenaient des résultats acceptables. Les résultats obtenus varient d'un laboratoire à l'autre.
Tests supplémentaires
Une prise de sang à elle seule ne permet pas toujours d'établir correctement un diagnostic et de savoir raison exacte maladies. Dans certains cas, un test à la bromsulfaléine est effectué. Cette étude permet d'analyser le fonctionnement du foie.
La bromsulfaléine est introduite dans le sang, puis dans le foie, puis dans la bile et est excrétée. naturellement. De plus, si une pathologie est suspectée, un examen échographique foie. Cela permettra de déterminer la taille de l'organe (agrandi ou non), l'hétérogénéité de ses tissus (présence de fibrose, d'hypertrophie, etc.) et l'imprécision des contours. De tels changements sont précisément caractéristiques de l'hépatite.
Il existe aujourd’hui plusieurs kits disponibles sur le marché et leurs résultats restent décevants. Des lignes directrices d’évaluation ont récemment été publiées tests diagnostiques la fièvre de la dengue. La dengue en Martinique est une épidémie endémique avec des pics saisonniers et lors des épidémies il y a un afflux massif de malades vers situations d'urgence. Nous utilisons un algorithme de diagnostic basé sur la date d’apparition de la fièvre.
Les tests sérologiques ne sont utiles que pour le diagnostic stade avancé infections. Les méthodes de biologie moléculaire constituent donc l’outil de choix pour diagnostiquer la dengue au cours de phase aigüe. Cependant, leur sensibilité et leur spécificité ne sont pas encore optimales et doivent être standardisées. Les progrès réalisés dans le développement d’un vaccin quadrivalent suggèrent un meilleur contrôle de la dengue et les résultats d’essais d’efficacité à grande échelle sont actuellement en attente.
De nos jours, cette méthode est souvent utilisée pour identifier un virus. diagnostic moléculaire, comme la polymérase réaction en chaîne(PCR). Son avantage est haute sensibilité, ce qui signifie une grande précision.
Ce test est basé sur la copie répétée d’une partie spécifique de l’ADN ou de l’ARN par l’action d’une enzyme. En conséquence, des segments dupliqués de la chaîne génétique se forment, grâce auxquels même une petite quantité de l'agent pathogène peut être détectée.
Les études PCR permettent d'identifier le virus et de diagnostiquer diagnostic précis en seulement quelques heures. Cette méthode identifie l’agent pathogène, tandis que d’autres tests déterminent uniquement la réaction du corps au virus. Mais cette méthode a aussi ses inconvénients. Toutes les études doivent être réalisées uniquement dans des conditions stériles. La moindre contamination peut affecter les résultats.
De plus, seul un médecin possédant une vaste expérience dans le domaine de la génétique peut effectuer de tels tests et décodages.
Compte tenu de tous les facteurs ci-dessus, on ne peut pas dire que la méthode PRC soit toujours précise. Il peut montrer mauvais résultatà la fois dans le sens positif et négatif.
Pour un traitement de haute qualité des types d'hépatite virale, des immunomodulateurs et antiviraux. Mais comme ces médicaments ont un effet assez fort sur l'organisme, avant de les prescrire, le médecin doit être absolument sûr que la cause de la pathologie est une infection virale. Ils peuvent donc être attribués examens complémentaires et la recherche.
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Comparaison des résultats des diagnostics moléculaires et ELISA du CHC
En raison du contenu informatif insuffisant des tests cliniques et de laboratoire, si l'hCG est suspectée et utilisée dès la première étape de l'examen des patients atteints de maladies rhumatismales, elle revêt une importance particulière. étude virologique sérum sanguin par dosage immunoenzymatique et PCR.
Comme le soulignent certains auteurs, avec le test immuno-enzymatique disponible, des résultats faussement positifs sont possibles, ce qui est le plus souvent une conséquence de la présence dans l'échantillon analysé d'anticorps dirigés contre la superoxyde dismutase, avec lesquels le c100-3 est synthétisé dans cellules de levure recombinantes, qui sont utilisées comme anigène dans les systèmes de tests immuno-enzymatiques pour identifier le VHC. Les résultats des tests sont également affectés par l'hypergammaglobulinémie due à des maladies systémiques tissu conjonctif, vaccinations récentes (notamment contre la rougeole), cryoglobulinémie, car le VHC peut former un cryoprécipité. Signalé résultats faussement positifs après décongélation répétée des échantillons ou après un stockage de longue durée à des températures instables. Les anticorps contre le VHC se forment en moyenne 8 à 20 semaines après l'infection ou 15 semaines après le début de l'hépatite chez certains patients, il faut environ un an pour que les anticorps se forment. L'absence d'anticorps anti-VHC n'exclut pas le diagnostic de VHC. De plus, 20 % des patients atteints d'un VHC chronique peuvent être séronégatifs, car ils contiennent de faibles titres d'anticorps anti-VHC en raison d'un déficit immunitaire ou d'un traitement immunosuppresseur.
Nous avons effectué une PCR du tissu hépatique dans des coupes en paraffine dans 44 cas, dont 23 (52,3 %) un résultat négatif a été enregistré, dans 20 (45,5 %) - positif, dans un cas (2,3 %) un résultat PCR négatif a été enregistré dans les tissus avec une PCR positive dans le sang du patient, ce que nous avons interprété comme période au début hépatite virale C sur fond de PR.
Sur 136 études PCR sanguines, le test s'est révélé positif chez 74 patients (54,4 %) et négatif dans 62 (45,6 %) cas. Dans trois cas (2,2 %), un test sanguin PCR positif chez des patients atteints de PR a été combiné avec des données ELISA négatives, ce qui a été considéré comme des résultats faussement négatifs du test immunoenzymatique. Deux (0,6 %) tests PCR négatifs ont été accompagnés d'une conclusion ELISA positive lorsque arthrite réactive, ce qui nous a permis d'interpréter le résultat comme un faux positif, tableau 3.
L'ELISA pour le virus de l'hépatite C a été réalisée dans le groupe d'étude chez 332 patients. Le test était positif dans 176 cas (53%) et négatif dans 139 (41,9%), dans 17 cas les résultats du test étaient équivoques (5,1%), Tableau 2.
Tableau 2 - Fréquence d'obtention de conclusions faussement positives et faussement négatives pour le virus de l'hépatite C par ELISA lorsque diverses maladies
Nosologie
Faux positifs
Nosologie
Faux négatifs
activité
Comme le montre le tableau 2, le plus grand nombre de conclusions faussement positives (0,9 %) pour les diagnostics ELISA ont été obtenues dans le groupe de patients atteints de LED C et de RA C, ce qui, à notre avis, est dû à la présence d'un un grand nombre de personnes en circulation complexes immuns et imperfection de la technique ELISA de 1ère et 2ème génération pour les patients atteints de pathologie auto-immune.
Les données obtenues indiquent que lors du diagnostic du CHC dans le contexte de maladies rhumatismales, on ne peut pas se fier aux résultats d'un seul test. Tout cela a servi de préalable à la comparaison des résultats de diverses façons diagnostic en laboratoire du virus de l'hépatite C.
Nous avons sélectionné 33 patients qui n'avaient pas d'interprétation et d'orientation sans ambiguïté dans les conclusions concernant la présence du virus de l'hépatite C dans les diagnostics ELISA, PCR et immunohistochimiques (Tableau 3).
Grâce à une technique PCR adaptée dans les tissus, une étude de biopsie a été réalisée dans les cas où le diagnostic biologique et sérologique de l'HCC ne permettait pas de juger de manière fiable la présence du virus de l'hépatite C et où le diagnostic clinique ne pouvait être établi de manière définitive.
D'une manière générale, des modifications du diagnostic final prenant en compte les résultats du diagnostic moléculaire de la pièce de biopsie ont été réalisées chez 15 patients sur 169 patients ponctués, soit 8,9 %.
Tableau 3 – Proportion de résultats de tests VHC contestables
Le surdiagnostic des CHC utilisant les systèmes de tests ELISA est particulièrement alarmant. dans ce cas nous avons affaire soit au plus stade précoce CHC et sa prolifération extrahépatique, ou avec surdiagnostic pur de cette maladie. Les différences de conclusions existantes sont dues au fait que la PCR ne nécessite pas la précipitation de complexes immuns, comme avec les tests ELISA, il n'y a donc pratiquement pas de réactions faussement positives. Comme l'ont noté certains auteurs de 100 patients atteints d'ARN Anticorps anti-VHC la classe Ig M contre le VHC a été détectée dans 66 % des cas, tandis que sur 171 sérums avec des données PCR négatives, des anticorps de classe Ig M contre le VHC ont été détectés dans 45 cas, ce qui indique soit des résultats faussement positifs, soit une virémie fluctuante, soit une réplication virale extrahépatique. . Dans notre étude, 4 patients (2 - LED C, 1 - RA C, 1 - CHC) ont eu des tests positifs pour l'ARN du VHC dans le sang, mais des tests négatifs dans le tissu hépatique, ce qui peut également être une confirmation d'une réplication extrahépatique du virus. , ou phase précoce cours de CHC.
La sensibilité et la spécificité des tests de détection du VHC dans le sang et les tissus sont présentées dans le tableau 4, d'où il résulte que les méthodes de diagnostic moléculaire sont très sensibles et spécifiques.
Tableau 4 - Sensibilité et spécificité des tests de détection du VHC dans le sang et les tissus
Sensibilité (%)
Spécificité (%)
PCR dans le sang
PCR dans les tissus
Immunohistochimie
Considérant grand nombre divers auto-anticorps, les méthodes de diagnostic moléculaire de l'hépatite virale à l'aide de tests sanguins sont plus justifiées que le test immuno-enzymatique chez les personnes atteintes de CTD, et la vérification des protéines non structurelles du VHC dans les tissus n'est possible qu'en utilisant des méthodes de diagnostic moléculaire (PCR dans les tissus et immunohistochimie ).
Conclusion
Destruction focale du cartilage et le tissu osseux- le principal mécanisme d'atteinte articulaire dans la PR. En maintenant les changements inflammatoires qui se produisent pendant maladies rhumatismales, un rôle important appartient aux neutrophiles et aux lymphocytes. Il a été démontré que la présence d'une réactivité non spécifique des neutrophiles reflète leur importance pathogénétique et leur résistance sélective au VHC. Image clinique Dans un certain nombre de cas, le CHC se caractérise non seulement par des lésions du tissu hépatique, mais également par diverses manifestations extrahépatiques, qui peuvent être provoquées par des mécanismes du complexe immunitaire. Une compréhension plus complète de la pathogenèse des manifestations systémiques dans les maladies chroniques infection virale aidera à établir le fait de la réplication extrahépatique des virus de l'hépatite, ce qui est confirmé par la détection des antigènes du VHC dans les lymphocytes à l'aide de méthodes hautement spécifiques de PCR et d'immunohistochimie.
Les méthodes de diagnostic moléculaire ont établi le tropisme du VHC en plus du foie pour tissu rénal, et les deux organes sont touchés simultanément. Protéines non structurales Le VHC a également été détecté dans Tissu pulmonaire(épithélium bronchique), lymphocytes du sang périphérique et des voies portes, épithélium des voies biliaires. Dans des situations cliniquement ambiguës avec haut niveau enzymes hépatospécifiques, une étude morphologique de la biopsie hépatique est indiquée pour vérifier le VHC dans les tissus. L'examen immunohistochimique d'une biopsie pour une hépatite cryptogénique permet de diagnostiquer infection virale foie, y compris le CHC, qui se produit sans la présence d'ARN - VHC dans le sang. En revanche, la PBP permet d'exclure le diagnostic d'HCC. Dans le groupe de patients atteints de CTD, la méthode ELISA est principalement acceptable pour le dépistage des sujets pour la présence du VHC, et la préférence doit être donnée aux méthodes de diagnostic moléculaire.
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