Test de Coombs
Test de Coombs– un test à l'antiglobuline visant à identifier dans le sang Rh négatif des anticorps anti-érythrocytaires incomplets dirigés contre le facteur Rh - une protéine spécifique située à la surface des érythrocytes du sang Rh positif. Il existe deux types de ce test : direct - détection d'anticorps à la surface des globules rouges, indirect - détection d'anticorps dans le sérum sanguin. Des tests directs sont effectués dans le cadre du diagnostic et du suivi du traitement des maladies du sang : anémie hémolytique, maladie hémolytique du nouveau-né et autres. Un test indirect est effectué pour évaluer la compatibilité du sang du donneur et du receveur lors de la transfusion, ainsi que pour déterminer la présence et le risque de conflit Rh lors de la planification et de la gestion de la grossesse. Le matériel pour le test de Coombs est le sang veineux ; l'étude est réalisée selon des méthodes basées sur la réaction d'agglutination. Normalement, les deux tests donnent un résultat négatif. L'analyse est terminée en un jour.
Le test de Coombs est un test clinique sur du sang Rh négatif visant à détecter les anticorps dirigés contre le facteur Rh. Le test est utilisé pour identifier le risque de développer un conflit Rh et des réactions hémolytiques. Chez chaque personne, la surface des globules rouges contient un certain ensemble d'antigènes ou d'agglutinogènes - des composés de natures diverses, dont la présence ou l'absence est utilisée pour déterminer le groupe sanguin et le facteur Rh. Il existe de nombreux types d'antigènes ; dans la pratique médicale, les agglutinogènes A et B, qui déterminent le groupe sanguin, et l'agglutinogène D, le facteur Rh, sont de la plus grande importance pratique. Avec un facteur Rh positif, les antigènes D sont détectés sur la membrane externe des érythrocytes, mais avec un facteur négatif, ils ne le sont pas.
Le test de Coombs, également appelé test à l'antiglobuline, vise à détecter dans le sang les anticorps anti-érythrocytaires incomplets dirigés contre le système du facteur Rh. Les anticorps contre le facteur Rh sont des immunoglobulines spécifiques qui sont produites dans le sang Rh négatif lorsque des globules rouges contenant des agglutinogènes D y pénètrent. Cela peut se produire lorsque le sang du fœtus et de la femme enceinte est mélangé, lors de transfusions sanguines effectuées sans sang préalable. dactylographie. Le test de Coombs existe en deux versions : directe et indirecte. Lors d'un test de Coombs direct, les anticorps fixés à la surface des globules rouges sont détectés. L'étude est utilisée pour déterminer la cause de la réaction hémolytique. Le test indirect de Coombs vise à détecter les anticorps anti-érythrocytaires dans le plasma sanguin. Il est nécessaire de déterminer la compatibilité du sang entre le donneur et le receveur ou entre la mère et le fœtus, et aide à prévenir le développement d'un conflit Rh et l'hémolyse ultérieure des globules rouges.
Le sang pour les deux versions du test de Coombs est prélevé dans une veine. L'analyse est réalisée par agglutination à l'aide de sérum antiglobuline. Les résultats de l'étude sont utilisés en hématologie pour identifier les causes des réactions hémolytiques, en chirurgie et en réanimation lors des transfusions sanguines, en obstétrique et en gynécologie pour le suivi des grossesses chez les femmes ayant du sang Rh négatif.
Les indications
Le test direct de Coombs, qui détecte les anticorps fixés à la surface des globules rouges, est prescrit pour les réactions hémolytiques (destruction des globules rouges) d'origines diverses. L'étude est indiquée pour l'anémie hémolytique auto-immune primaire, l'anémie hémolytique post-transfusionnelle, la maladie hémolytique du nouveau-né, l'hémolyse des globules rouges causée par des maladies auto-immunes, tumorales ou infectieuses, ainsi que la prise de médicaments, par exemple la quinidine, la méthyldopa, la procaïnamide. . Le test indirect de Coombs, qui détermine les anticorps dans le plasma sanguin, est utilisé pour prévenir le développement d'un conflit Rh. Il est indiqué chez les patients en préparation de transfusions sanguines, ainsi que chez les femmes enceintes présentant un facteur Rh négatif, à condition que le futur père de l'enfant ait un facteur Rh positif.
Pour déterminer la compatibilité Rh, le test de Coombs n'est pas prescrit aux patients ayant du sang Rh positif. Dans ces cas, il existe déjà des antigènes à la surface des globules rouges ; la production d'anticorps ne peut être provoquée par une transfusion sanguine ou par l'entrée de sang fœtal dans la circulation sanguine de la femme enceinte. De plus, l'étude n'est pas indiquée chez les femmes enceintes si les deux parents ont un facteur Rh négatif - un trait héréditaire récessif. L'enfant dans de tels couples a toujours du sang Rh négatif ; un conflit immunologique avec la mère est impossible. Dans les pathologies hémolytiques, le test à l'antiglobuline n'est pas utilisé pour contrôler le succès du traitement, car les résultats ne reflètent pas l'activité du processus de destruction des globules rouges.
Une limite du test de Coombs est la pénibilité de la procédure de recherche - pour obtenir des résultats fiables, il est nécessaire de respecter les conditions de température et de temps, les règles de préparation des réactifs et des biomatériaux. Les avantages du test de Coombs incluent sa haute sensibilité. Dans l'anémie hémolytique, les résultats de ce test restent positifs, même si les taux d'hémoglobine, de bilirubine et de réticulocytes sont normaux.
Préparation à l'analyse et à la collecte du matériel
Le matériel utilisé pour réaliser le test de Coombs est du sang veineux. Il n'y a pas d'exigences particulières concernant la durée de la procédure de prélèvement sanguin et la préparation du patient. Comme pour toute étude, il est recommandé de faire une pause après avoir mangé pendant au moins 4 heures et, au cours des 30 dernières minutes, d'arrêter de fumer, de faire de l'exercice et d'éviter le stress émotionnel. Il convient également de discuter à l'avance avec votre médecin de la nécessité d'arrêter de prendre des médicaments - certains médicaments peuvent fausser les résultats du test de Coombs. Le sang est prélevé à l'aide d'une seringue dans la veine cubitale, ou moins souvent dans une veine du dos de la main. En quelques heures, le matériel est livré au laboratoire.
Lors d'un test de Coombs direct, du sérum antiglobuline est ajouté au sérum sanguin du patient. Après un certain temps, le mélange est examiné pour détecter la présence d'agglutinats - ils se forment s'il y a des anticorps sur les globules rouges. Si le résultat est positif, le titre agglutinant est déterminé. Le test indirect de Coombs comprend plusieurs étapes. Tout d’abord, les anticorps présents dans le sérum se fixent sur les globules rouges injectés lors de l’incubation. Ensuite, du sérum antiglobuline est ajouté à l'échantillon, après un certain temps, la présence et le titre des agglutinats sont déterminés. La période d'analyse est de 1 jour.
Résultats normaux
Normalement, le résultat du test de Coombs direct est négatif (-). Cela signifie qu’il n’y a pas d’anticorps associés aux globules rouges dans le sang et qu’ils ne peuvent pas provoquer d’hémolyse. Le résultat normal du test indirect de Coombs est également négatif (-), c'est-à-dire qu'il n'y a pas d'anticorps contre le facteur Rh dans le plasma sanguin. Lors de la préparation d’une transfusion sanguine pour le receveur, cela signifie une compatibilité avec le sang du donneur ; lors du suivi de la grossesse, cela signifie l’absence de sensibilisation Rh de la mère, un faible risque de développer un conflit immunologique. Les facteurs physiologiques, tels que l’alimentation ou l’activité physique, ne peuvent pas affecter le résultat du test. Par conséquent, si le résultat est positif, une consultation médicale est nécessaire.
Valeur diagnostique de l'analyse
Un résultat positif au test de Coombs s'exprime qualitativement, de (+) à (++++), ou quantitativement, par des titres de 1:16 à 1:256. La détermination de la concentration d'anticorps sur les globules rouges et dans le sérum sanguin est effectuée dans les deux types d'échantillons. Si le test direct de Coombs est positif, des anticorps sont détectés sur la membrane externe des globules rouges, ce qui entraîne la destruction de ces cellules sanguines. La cause peut être une transfusion sanguine sans typage préalable - une réaction hémolytique post-transfusionnelle, ainsi qu'une érythroblastose du nouveau-né, une réaction hémolytique due à l'utilisation de médicaments, une anémie hémolytique auto-immune primaire ou secondaire. La destruction secondaire des globules rouges peut être causée par le lupus érythémateux disséminé, le syndrome d'Evans, la macroglobulinémie de Waldenström, l'hémoglobinurie paroxystique froide, la leucémie lymphoïde chronique, le lymphome, la mononucléose infectieuse, la syphilis, la pneumonie à mycoplasmes.
Un résultat positif au test indirect de Coombs indique la présence d'anticorps contre le facteur Rh dans le plasma. En pratique, cela signifie qu'une sensibilisation Rh s'est produite et qu'il existe une possibilité de développer un conflit Rh après la perfusion de sang d'un donneur pendant la grossesse. Pour prévenir les complications de la grossesse, les femmes dont le résultat du test de Coombs est positif sont inscrites sur un registre spécial.
Traitement des anomalies
Le test de Coombs fait référence aux études isosérologiques. Ses résultats permettent d'identifier une réaction hémolytique, ainsi que de déterminer la compatibilité du sang du donneur et du receveur, de la mère et du fœtus, afin de prévenir le développement d'un conflit Rh. Si le résultat du test est positif, vous devez alors demander conseil à votre médecin traitant - obstétricien-gynécologue, hématologue, chirurgien.
Parmi les nombreux antigènes existants dans la pratique médicale, la plus grande importance est accordée à trois types d'agglutinogènes sanguins. L'un d'eux est le type responsable de la manifestation du facteur Rh : s'il est présent sur la membrane érythrocytaire, le groupe sanguin est diagnostiqué comme Rh+, s'il est absent - Rh-. Si des érythrocytes contenant des agglutinogènes Rh+ pénètrent dans le sang Rh négatif, l'organisme déclenche une réponse immunitaire et commence à produire des anticorps contre cet antigène, ce qui provoque des conditions pathologiques.
RÉFÉRENCE! Le facteur Rh est un système complexe à plusieurs composants de plusieurs dizaines d'antigènes. Les plus courants d’entre eux sont les agglutinogènes de type D (85 % des cas), ainsi que E et C.
Le test de Coombs n'est effectué que s'il existe des preuves directes. Liste générale des motifs de prescription du test de Coombs :
- planification et gestion de la grossesse (les parents ont un Rh différent);
- don et préparation à la transfusion sanguine (l'inadéquation du sang selon Rh n'est pas moins destructrice que l'inadéquation selon le système AB0) ;
- intervention chirurgicale planifiée (en cas de reconstitution de la perte de sang par transfusion sanguine);
- diagnostic des maladies hémolytiques.
Des indications plus spécifiques dépendent du type d'étude réalisée.
Test de Coombs direct
Le test direct détecte les anticorps à la surface des globules rouges. Ceci est nécessaire pour diagnostiquer les pathologies hémolytiques:
- auto-immune (les globules rouges et l'hémoglobine sont détruits à la suite d'une attaque par les propres anticorps de l'organisme) ;
- médicinal (le processus pathologique est déclenché par la prise de certains médicaments comme la quinidine ou le procaïnamide) ;
- post-transfusionnelle (si le groupe sanguin ne correspond pas lors de la transfusion), ainsi que sous forme de conflit Rh pendant la grossesse (érythroblastose du nouveau-né).
RÉFÉRENCE! L'anémie hémolytique est une maladie associée à la destruction prématurée des globules rouges suite à une hémolyse, ce qui entraîne une saturation insuffisante du sang en oxygène et une hypoxie du cerveau et/ou des organes internes.
L'hémolyse des éléments sanguins est observée dans les maladies oncologiques, infectieuses et rhumatismales, de sorte que le test direct de Coombs peut être utilisé comme moyen supplémentaire de diagnostic d'un état pathologique. Il convient de rappeler : une valeur de test négative n'exclut pas la possibilité d'une hémolyse, mais constitue un motif pour un examen complémentaire.
Test de Coombs indirect
Les tests indirects sont plus souvent utilisés pour prévenir des situations pathologiques. Il permet la détection des anticorps dans le plasma sanguin, nécessaire à l'évaluation de la compatibilité transfusionnelle et au diagnostic des risques de conflit Rh au cours de la grossesse.
Plus de 80 % des personnes ont un facteur Rh positif (Rh+), respectivement, un peu moins de 20 % ont un facteur Rh négatif. Si une mère Rh- développe un enfant Rh+, son corps commence à produire des anticorps qui attaquent les globules rouges du fœtus, provoquant une hémolyse.
Compte tenu du fait que le pourcentage de mariages « différents rhésus » atteint 12 à 15 %, le risque de maladie hémolytique chez les nouveau-nés devrait être élevé, mais en réalité, seulement dans 1 cas sur 25, les femmes subissent le phénomène de sensibilisation. (pour 200 accouchements réussis il y a 1 exemple de pathologie hémolytique). Cela est dû en partie au fait que le premier enfant Rh-positif ne provoque généralement pas d’agression ouverte de la part du corps de la mère ; L'écrasante majorité des cas surviennent chez le deuxième enfant et les suivants. Le même principe s’applique à la sensibilisation conventionnelle à un allergène particulier.
Il n'y a aucune réaction au premier contact. Le corps commence tout juste à se familiariser avec un nouvel antigène, produisant des anticorps de la classe IgM, qui sont responsables d’une réponse immunitaire rapide, mais pénètrent rarement la barrière placentaire dans le sang de l’enfant. Toutes les réactions pathologiques se manifestent lors d'une seconde « réunion », lorsque le corps commence à produire des anticorps de classe IgG qui pénètrent facilement dans la circulation sanguine fœtale, déclenchant ainsi le processus d'hémolyse.
Test de Coombs indirect pendant la grossesse vous permet de détecter la présence d’anticorps dans le corps de la mère et d’identifier en temps opportun le stade initial de la sensibilisation. Une réponse positive nécessite une inscription avec un test mensuel du titre d'anticorps et une hospitalisation obligatoire 3 à 4 semaines avant la naissance.
RÉFÉRENCE! L'incompatibilité du facteur Rh n'affecte en rien l'état de la mère ; la maladie hémolytique ne se développe que chez l'enfant. Dans les cas graves et en l’absence de réponse rapide, le fœtus peut mourir dans l’utérus ou immédiatement après la naissance.
Préparation de la procédure et sa mise en œuvre
Le sang veineux est utilisé pour le diagnostic. Aucune préparation particulière à long terme n’est requise pour le test de Coombs. Essayez de suivre un ensemble de règles standard avant de prélever du sang dans une veine pour analyse :
- 3 jours à l'avance, renoncez à l'alcool et aux médicaments (si possible) ;
- Planifiez votre dernier repas au plus tard 8 heures avant le prélèvement sanguin pour analyse ;
- arrêter de fumer, de stress physique, mental et émotionnel en 1 heure ;
- Avant la procédure, buvez un verre d’eau plate et propre.
La méthode de recherche est basée sur la réaction d'hémagglutination.
Lors de l'exécution d'un test direct un échantillon de sang est exposé à du sérum d'antiglobuline préalablement préparé avec des indicateurs connus, le mélange est conservé pendant un certain temps et vérifié pour détecter les agglutinats qui se forment lorsque des anticorps sont présents sur les globules rouges. Le taux d'agglutinats est diagnostiqué à l'aide du titre agglutinant.
Échantillon indirect Coombs a une technique similaire, mais une séquence d'actions plus complexe. Des érythrocytes antigéniques (avec facteur Rh) sont introduits dans le sérum sanguin séparé, et seulement après ces manipulations, du sérum antiglobuline est ajouté pour le diagnostic et le titre d'agglutinat.
Résultats de recherche
Normalement à la fois droit et test de Coombs indirect devrait donner un résultat négatif :
- un test direct négatif indique que les anticorps spécifiques contre le facteur Rh associé aux globules rouges sont absents dans le sang et ne peuvent pas provoquer d'hémolyse
- un test indirect négatif montre qu'il n'y a pas non plus d'anticorps libres contre le facteur Rh dans le plasma sanguin ; ce fait indique la compatibilité du sang du donneur avec le sang du receveur (ou le sang de la mère et de l’enfant) selon le facteur Rh.
Un test de Coombs positif indique le fait d'une sensibilisation Rh de l'organisme, qui est la principale cause de conflit Rh en cas de transfusion sanguine ou lors du port d'un enfant avec un statut Rh différent. Dans ce cas, les résultats restent inchangés pendant 3 mois (durée de vie des globules rouges). Si la cause est une anémie hémolytique auto-immune, un test positif peut suivre le patient pendant plusieurs années (dans certains cas, tout au long de sa vie).
RÉFÉRENCE! Le test à l'antiglobuline est très sensible, mais contient peu d'informations. Il n'enregistre pas l'activité du processus hémolytique, ne détermine pas le type d'anticorps et n'est pas en mesure d'identifier la cause de la pathologie. Pour obtenir un tableau plus complet, le médecin traitant doit prescrire des tests complémentaires (microscopie sanguine, analyses générales et biochimiques, tests rhumatismaux, VS, taux de fer et de ferritine).
Le degré de sensibilisation peut être exprimé qualitativement (de « + » à « ++++ ») ou quantitativement sous forme de titre :
- 1:2 - valeur faible, non dangereuse ;
- 1:4 - 1:8 - le début du développement d'une réaction immunologique ; ne présente pas de danger, mais nécessite une surveillance constante ;
- 1:16 -1:1024 - une forte forme de sensibilisation, des mesures immédiates doivent être prises.
La raison d’un test positif peut être :
- transfusion de sang non typé (ou avec une erreur de typage), lorsque les facteurs Rh du donneur et du receveur ne correspondent pas ;
- Conflit Rh pendant la grossesse (si la composition des antigènes sanguins du père et de la mère ne correspond pas) ;
- anémie hémolytique auto-immune - à la fois congénitale (primaire) et secondaire, conséquence de certaines maladies (syndrome d'Evans, pneumonie infectieuse, syphilis, hémoglobinurie froide, lymphome);
- réaction hémolytique médicamenteuse.
Aucun des problèmes ci-dessus ne peut être résolu par le patient sans assistance médicale. Dans tous les cas, une consultation urgente, une inscription ou une hospitalisation en urgence seront nécessaires.
ATTENTION! Dans de rares cas, un test de Coombs faussement positif est possible. La raison en est peut-être des transfusions sanguines fréquentes, ainsi qu'un certain nombre de maladies : polyarthrite rhumatoïde, lupus érythémateux, sarcoïdose. Ce phénomène peut également être observé après ablation de la rate, ainsi que lorsque la réaction est perturbée (agitation fréquente du contenu, présence de contaminants).
Réaction de Coombs
Réaction de Coombs- test à l'antiglobuline pour déterminer les anticorps anti-érythrocytaires incomplets. Le test de Coombs est utilisé pour détecter les anticorps dirigés contre le facteur Rh chez les femmes enceintes et pour déterminer l'anémie hémolytique chez les nouveau-nés présentant une incompatibilité Rh, ce qui entraîne la destruction des globules rouges. Cette méthode a été proposée par le médecin anglais Robert Coombs en 1945 et a donc été appelée plus tard « réaction de Coombs ».
Réaction directe de Coombs
Les anticorps présents à la surface des globules rouges peuvent être statiques ou libres dans le plasma sanguin. Selon l'état des anticorps, une réaction de Coombs directe ou indirecte est réalisée. S’il y a des raisons de croire que des anticorps sont fixés à la surface des globules rouges, un test de Coombs direct est réalisé. Dans ce cas, le test se déroule en une seule étape : du sérum antiglobuline est ajouté. Si des anticorps incomplets sont présents à la surface des globules rouges, une agglutination des globules rouges se produit.
Réaction indirecte
La réaction indirecte de Coombs se déroule en 2 étapes. Premièrement, il est nécessaire de sensibiliser artificiellement les globules rouges. Pour ce faire, les globules rouges et le sérum sanguin testé sont incubés, ce qui provoque la fixation des anticorps à la surface des globules rouges. Après quoi la deuxième étape du test de Coombs est effectuée - l'ajout de sérum antiglobuline.
Remarques
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Voyez ce qu’est la « réaction de Coombs » dans d’autres dictionnaires :
RÉACTION DE COMBES- (Test de Coombs) une méthode de détermination des anticorps résus à la surface des érythrocytes, qui provoquent la précipitation des globulines dans le sérum sanguin. Ce test est utilisé pour diagnostiquer l'anémie hémolytique chez les nourrissons présentant une incompatibilité Rh qui... ... Dictionnaire explicatif de la médecine
Une méthode pour déterminer les anticorps résus à la surface des érythrocytes, qui provoquent la précipitation des globulines dans le sérum sanguin. Ce test est utilisé pour diagnostiquer l'anémie hémolytique chez les nourrissons présentant une incompatibilité Rh qui ont... ... Termes médicaux
- (test à l'antiglobuline) méthode de détection des Abs incomplets naturellement ou artificiellement associés à des cellules (généralement des érythrocytes) à l'aide de l'antiglobuline ki (A.s.). A. s., précipitant les Abs incomplets, inclut les cellules porteuses dans ce processus,... ... Dictionnaire de microbiologie
RÉACTION DE COMBES- (du nom de l'immunologiste britannique R. R. A. Coombs, né en 1921, synonyme - test à l'antiglobuline) - une réaction sérologique basée sur l'agglutination des érythrocytes par des auto- et isoanticorps incomplets en présence de sérum antiglobuline. À… … Dictionnaire encyclopédique de psychologie et de pédagogie
RÉACTION HÉMOLYTIQUE TRANSFUSIONNELLE- Miel La réaction hémolytique transfusionnelle (THR) est une hémolyse des globules rouges du receveur ou du donneur (rarement), qui se produit lors d'une transfusion de sang et de ses composants. Les réactions peuvent être de nature immunitaire ou non immunitaire. Étiologie et pathogenèse Réactions immunitaires... ... Répertoire des maladies
- (R. R. A. Coombs, né en 1921, immunologiste anglais) réaction sérologique basée sur l'agglutination des érythrocytes par des auto-anticorps incomplets et des isoanticorps en présence de sérum antiglobuline ; utilisé en transfusiologie, en médecine légale, et aussi... ... Grand dictionnaire médical
RÉACTION DE COMBES- La réaction de Coombs, réaction sérologique qui permet la détection d'anticorps incomplets fixés à la surface des globules rouges ou contenus dans le plasma sanguin. K.r. est basé sur l'utilisation de sérum antiglobuline obtenu par hyperimmunisation... Dictionnaire encyclopédique vétérinaire
RÉACTION DE COMBES- Utilisé pour la détection d'anticorps monovalents ou dits partiels, notamment pour l'analyse des groupes sanguins des porcs et de certains autres animaux... Termes et définitions utilisés en élevage, génétique et reproduction des animaux de ferme
Voir la réaction de Coombs. (
Normalement, il n’y a pas d’anticorps dirigés contre les globules rouges dans le sang.
Le test de Coombs direct est un test à l'antiglobuline (agglutination dans un gel permettant la détection d'anticorps divalents complets), qui détecte les anticorps de classe IgG et le composant C3 du complément à la surface des globules rouges. En règle générale, les anticorps détectés par le test direct de Coombs ont une large spécificité qui n'est pas associée à un antigène bien établi. Un test de Coombs direct positif indique clairement que le patient souffre d'anémie hémolytique, bien que tous les patients avec un test direct à l'antiglobuline positif ne souffrent pas de cette maladie. Chez environ 10 % des patients, les anticorps ou les composants du complément présents sur la membrane des globules rouges ne peuvent pas être déterminés par un test de Coombs direct (le test est négatif), mais ils souffrent néanmoins d'une anémie hémolytique auto-immune. Pour clarifier la spécificité des anticorps dans de tels cas, des tests avec leur élution sont utilisés. Un test de Coombs direct, positif uniquement au complément, fait généralement référence à des anticorps froids de type IgM. Dans ce cas, les anticorps IgM ne sont pas présents sur les globules rouges à la température basale du corps. Cependant, étant donné que les anticorps IgM fixent activement le complément et que le complément reste sur les globules rouges, dans cette forme d'anémie hémolytique auto-immune (maladie des aggutinines froides), le test de Coombs ne sera positif que pour le complément.
Le test direct de Coombs est positif pour l'anémie hémolytique auto-immune causée par des anticorps chauds, l'anémie auto-immune induite par un médicament (lors de la prise de méthyldopa, jusqu'à 20 % des patients ont une réaction positive), l'anémie hémolytique de type adsorption médicamenteuse, le type d'anémie hémolytique à complexe immun. anémie (le test est positif uniquement pour C3), avec anémie hémolytique auto-immune causée par les anticorps du froid - maladie des agglutinines froides (le test est positif uniquement pour C3). Dans l’hémoglobinurie paroxystique froide, le test direct de Coombs est négatif.
Test de Coombs indirect - un test indirect à l'antiglobuline (détecte les anticorps incomplets) vous permet d'identifier les anticorps atypiques dans le sang, y compris les alloanticorps contre les antigènes érythrocytaires étrangers. Il tire son nom (indirect) du fait qu'il se déroule en 2 étapes. Initialement, le sérum sanguin du patient, contenant des anticorps incomplets, interagit avec l'Ag diagnosticum corpusculaire ajouté sans manifestations visibles. Dans un deuxième temps, le sérum d'antiglobuline ajouté interagit avec les anticorps incomplets adsorbés sur les antigènes, avec apparition d'un précipité visible. La transfusion de globules rouges homologues (allogéniques) ou la grossesse sont les causes les plus fréquentes de formation de ces anticorps anti-globules rouges. La combinaison d’un test de Coombs indirect positif avec un test direct négatif n’apporte rien pour le diagnostic d’anémie hémolytique auto-immune. Un test de Coombs indirect positif entraîne certaines difficultés lors de la sélection du sang à transfusion et de la réalisation d'un test croisé de compatibilité avec le sang conservé, mais n'a aucune autre valeur diagnostique.
Un test à l'antiglobuline, conçu pour détecter les anticorps anti-érythrocytaires incomplets, a été proposé par Coombs, Morant, Reis en 1945 et a ensuite été appelé test de Coombs. L'essence de cette méthode est que le sérum antiglobuline contenant des anticorps dirigés contre les immunoglobulines humaines, lorsqu'il réagit avec des globules rouges sensibilisés par des anticorps incomplets, conduit à leur agglutination.
Selon que les anticorps sont fixés à la surface des globules rouges ou sont à l'état libre dans le plasma sanguin, un test de Coombs direct ou indirect est utilisé.
Un test de Coombs direct est effectué dans les cas où il y a des raisons de supposer que les globules rouges étudiés sont déjà in vivo ont été sensibilisés avec des anticorps appropriés, c'est-à-dire la première phase de la réaction - la fixation des anticorps à la surface des globules rouges - s'est produite dans l'organisme et l'ajout ultérieur de sérum antiglobuline provoque l'agglutination des cellules sensibilisées.
Grâce au test de Coombs indirect, les anticorps incomplets présents dans le sérum testé sont détectés. Dans ce cas, la réaction se déroule en deux étapes. La première étape est l'incubation des érythrocytes à tester avec le sérum à tester, au cours de laquelle les anticorps contenus dans l'échantillon de sérum à tester sont fixés à la surface des érythrocytes. La deuxième étape est l’ajout de sérum antiglobuline.
Jusqu'à présent, le test de Coombs est largement utilisé dans la pratique de laboratoire pour le diagnostic d'affections immunopathologiques, en particulier dans l'anémie hémolytique auto-immune, caractérisée par la destruction des globules rouges due à la liaison de la membrane cellulaire aux anticorps et (ou) aux composants de le système du complément. Il permet de détecter la présence d'Ig G sur la membrane érythrocytaire (généralement Ig G1 et Ig G3), qui peuvent activer le complément, et parfois le complément (C3d). Cependant, dans la période aiguë de la maladie, en raison de la destruction des globules rouges sur lesquels un grand nombre d'anticorps étaient enregistrés, lors d'une crise hémolytique, ainsi qu'avec un nombre insuffisant d'anticorps au cours de l'évolution chronique de la maladie, un test de Coombs direct négatif peut être observé.
Il convient de souligner que le test indirect de Coombs reste la meilleure méthode de sélection individuelle des milieux de transfusion, car il permet la détermination la plus précise de la compatibilité individuelle du donneur et du receveur pour les antigènes érythrocytaires.
Un test direct supplémentaire à l'antiglobuline pour détecter la présence d'auto-anticorps est recommandé lors de l'examen de tous les receveurs d'organes et de tissus pendant la période précédant la transplantation et des receveurs de cellules souches hématopoïétiques également après la transplantation.
Outre l'immunohématologie et la transfusiologie, les tests à l'antiglobuline sont largement utilisés dans le diagnostic de nombreuses pathologies : maladies hématologiques, notamment maladies lymphoprolifératives, maladies systémiques du tissu conjonctif, maladie de Sjögren, hépatite chronique active, etc.
Les tests de Coombs sont activement utilisés en génétique médicale et en médecine légale pour déterminer les antigènes érythrocytaires de surface.
Le test de Coombs est une méthode de recherche assez laborieuse qui nécessite un soin particulier dans sa mise en œuvre. Lors de son utilisation, il existe certaines difficultés liées notamment à l'interprétation de réactions faiblement positives. On sait que de fausses réactions faiblement positives ou négatives lors de la réalisation des tests de Coombs peuvent être la conséquence d'un lavage insuffisamment efficace des globules rouges, de la neutralisation du réactif antiglobuline par des traces de sérum, ainsi que du contact avec une surface non grasse sur laquelle de l'antiglobuline peut être réparé, perdant ainsi son activité. Un autre inconvénient du test de Coombs est l'instabilité du réactif antiglobuline dont la préparation et le stockage présentent certaines caractéristiques, ce qui rend également difficile la quantification de la réaction d'hémagglutination avec le sérum antiglobuline.
De plus, les études menées par A. Holburn, D. Voak et al. , ont montré que la cause des résultats faussement négatifs peut être une agitation excessive lors de la remise en suspension de la suspension de globules rouges. Des résultats erronés lors des tests à l'antiglobuline peuvent également être causés par la présence dans le réactif antiglobuline d'un mélange d'anticorps anti-complémentaires, en particulier contre les composants du complément C3d, C3c, C4c et C4d, qui sont adsorbés à la surface de tester les globules rouges pendant l’incubation et créer l’apparence d’un résultat positif.
Ces inconvénients peuvent être facilement éliminés en lavant soigneusement les échantillons étudiés et en surveillant les conditions de réaction.
Au cours de la dernière décennie, une solution saline isotonique à faible force ionique (LISS) a été utilisée pour réduire le temps nécessaire à la réalisation du test de Coombs indirect et augmenter sa sensibilité.
L'avantage indéniable des tests à l'antiglobuline, selon plusieurs auteurs, est leur haute sensibilité, qui dépasse largement la résolution des méthodes de recherche alternatives utilisées pour détecter les anticorps non agglutinants.
Nous avons comparé la résolution des méthodes d'étude des sérums sanguins pour la présence d'anticorps incomplets utilisant du sérum de polyglucine, de gélatine et d'antiglobuline. Au cours de l’étude, les titres d’anticorps anti-D incomplets ont été surveillés dans 140 échantillons de sérum sanguin provenant de donneurs iso-immuns à l’aide de tests à la gélatine, à la polyglucine et à l’antiglobuline indirecte. La formulation de ces méthodes a été réalisée conformément aux méthodes généralement acceptées.
Il a été constaté qu'en termes de résolution, les méthodes de détection de la sensibilisation des érythrocytes par les anticorps anti-D sont disposées comme suit : la plus sensible est le test de Coombs indirect, puis le test à la gélatine et la moins informative est le test à la polyglucine. Les résultats obtenus dans cette série d'expériences sont tout à fait cohérents avec les données de la littérature, ce qui nous permet de conclure que la sensibilité des tests de Coombs est assez élevée, permettant d'identifier avec un haut degré de fiabilité la présence d'anticorps anti-érythrocytaires dans le corps qui ne provoque pas d’agglutination des globules rouges.
Cependant, lors de la réalisation des tests de Coombs dans la pratique, il existe des cas où des anticorps incomplets ne sont pas détectés, bien que le tableau clinique de la maladie ou une vaccination antérieure indique leur présence possible. Dans de tels cas, on peut supposer que la quantité d'anticorps est insuffisante pour qu'ils soient précipités par les anticorps du sérum antiglobuline.
Cette conclusion a été confirmée par notre propre expérience, dans laquelle, en utilisant la méthode de microélectrophorèse analytique des cellules, la présence d'anticorps anti-D sur les érythrocytes testés, qui n'ont pas été détectés dans le test indirect de Coombs, a été établie. Dans cette série d'expériences, du sérum antiglobuline a été ajouté à des érythrocytes pré-incubés avec des sérums obtenus à partir du sang de donneurs immunisés pendant la période d'anticorpsogenèse en cours, c'est-à-dire pendant une période où aucun anticorps n’y était détecté par les méthodes connues, notamment le test de Coombs.
Dans les études menées, la présence d'anticorps incomplets à la surface des érythrocytes a été mise en évidence par un changement statistiquement significatif dans la mobilité électrophorétique des globules rouges sensibilisés après l'ajout de sérum antiglobuline. Il convient de noter que les anticorps anti-D ont ensuite été déterminés chez tous les donneurs immunisés lors du test de Coombs indirect dans le sérum sanguin.
Gillerand et coll. a également montré que les tests à l'antiglobuline se caractérisent par un certain seuil de sensibilité : un résultat positif n'est constaté que lorsqu'au moins 500 molécules d'Ig G sont enregistrées à la surface d'un globule rouge.
De plus, la littérature fournit la preuve qu'un éventuel résultat négatif du test de Coombs peut être associé à la faible affinité des anticorps sensibilisant les globules rouges, de sorte qu'ils s'éluent facilement de la surface des globules rouges pendant le processus de lavage. .
Compte tenu de ce qui précède, nous pouvons conclure que dans certains cas, un résultat négatif au test de Coombs ne constitue pas encore une preuve de l'absence d'anticorps fixés à la surface des globules rouges.
On sait que les réactions de Coombs sont hautement spécifiques et peuvent détecter la plupart des types d’anticorps incomplets. Cependant, comme le montrent certaines données expérimentales, les tests à l'antiglobuline peuvent également être positifs dans des conditions non immunologiques. E. Muirhead et coll. le deuxième jour après l'administration de phénylhydrazine à des chiens, un test de Coombs positif a été observé. Une apparition aussi rapide d'une réaction positive plaide contre sa nature immunologique et est plutôt associée à une adsorption non spécifique des protéines à la surface des érythrocytes.
M. Williams et coll. ont découvert que l'acide clavulanique peut également provoquer une réaction positive qui, selon les auteurs, est associée à une adsorption non spécifique des protéines plasmatiques à la surface des érythrocytes. Un effet similaire a été observé lors d’un traitement par des antibiotiques céphalosporines.
Les auteurs des études ci-dessus soulignent le caractère non immunologique des résultats positifs des tests de Coombs et insistent sur le fait que ces substances sont capables de provoquer une modification des membranes des globules rouges, grâce à laquelle les globules rouges peuvent adsorber des protéines (en notamment l'albumine) qui sont normalement présents dans le plasma sanguin et ne possèdent pas les propriétés des anticorps. De plus, il est possible que le xénobiotique, adsorbé à la surface cellulaire, serve de lien entre la membrane cellulaire et les protéines plasmatiques.
Pour interpréter correctement les résultats des tests à l'antiglobuline, il convient également de prendre en compte le rapport quantitatif entre les globules rouges jeunes et matures dans le sang périphérique. Il a été constaté que les réticulocytes isolés du corps pendant la période de régénération accrue de l'érythron peuvent être agglutinés par le sérum antiglobuline.
Résultat positif du test direct à l'antiglobuline Elle survient également dans diverses pathologies accompagnées de troubles du système immunitaire, de processus inflammatoires conduisant à une adsorption non spécifique d'anticorps de différentes spécificités sur les membranes des érythrocytes. Ceci suggère que les molécules d'Ig G n'interagissent pas avec des antigènes spécifiques des érythrocytes, mais se fixent uniquement à la surface des cellules étudiées.
Il convient de noter que lors de la réalisation d'un test de Coombs en cas de maladies caractérisées par le développement d'une dysprotéinémie ou l'apparition de paraprotéines, un résultat positif est dû à la présence à la surface des érythrocytes de protéines qui n'ont pas les propriétés de anticorps, ce qui indique également le manque de spécificité des tests d'antiglobuline quant à la nature de la protéine détectée avec leur aide.
Ainsi, comme l'ont montré de nombreuses études, les résultats positifs des tests directs et indirects à l'antiglobuline ne constituent pas une preuve absolue de la présence d'anticorps, puisque des réactions positives peuvent également être observées dans diverses conditions pathologiques non associées à une isosensibilisation ou une autosensibilisation de l'organisme. Par conséquent, seule une comparaison des résultats de plusieurs méthodes immunosérologiques avec le tableau clinique de la maladie permet de juger pleinement du processus pathologique en développement.
Un test indirect positif à l'antiglobuline avec un test direct négatif indique généralement la présence d'alloanticorps libres dans le sérum de test, associés à des transfusions sanguines ou à des grossesses antérieures.
Le test de Coombs est souvent positif lors d'exacerbations d'hémoglobinurie paroxystique nocturne ; un test de Coombs positif aux anti-C3 et anti-C3dg est un marqueur de la maladie des agglutinines froides.
Dans les cas où il existe un risque élevé de développer une maladie hémolytique du nouveau-né, les résultats des tests d'antiglobuline directs et indirects sont d'une grande importance pour établir un diagnostic (le plus souvent pendant la grossesse) et, si nécessaire, un suivi dynamique de l'apparence et des modifications. en titre d’anticorps. Le plus souvent, la maladie hémolytique du nouveau-né est associée à une incompatibilité de la mère et du fœtus avec l'antigène D, moins souvent avec les antigènes du système AB0, et encore moins souvent avec d'autres antigènes (C, c, K, etc.). Anticorps formés au cours de ce processus Les La, étant généralement des anticorps incomplets de la classe Ig G, sont clairement détectés lors du test indirect à l'antiglobuline. Avec cette maladie, le titre et la spécificité correctement établis des anticorps identifiés sont d'une grande importance, car il existe une certaine corrélation entre le niveau d'anticorps anti-érythrocytaires dans le sang d'une femme enceinte et le pronostic possible de la gravité de l'hémolytique. maladie.
Le test indirect de Coombs est également nécessaire dans la pratique clinique pour garantir la sécurité du traitement transfusionnel. Sa mise en œuvre est un élément obligatoire des études immunohématologiques des donneurs et de diverses catégories de receveurs, ainsi que des examens de routine de tous les patients des établissements médicaux pouvant nécessiter une transfusion de sang et de ses composants.
Le test indirect à l’antiglobuline est utilisé dans les cas suivants :
Pour une détermination plus précise de l'affiliation Rh (antigène D) en cas de résultats peu clairs de détermination du facteur Rh par d'autres méthodes (polyglucine, gélatine, etc.) ;
Identifier les antigènes érythrocytaires faibles (systèmes Kell, Duffy, Kidd, Lewis, etc.) et les anticorps dirigés contre ces antigènes ;
Pour la détection et l'identification des anticorps allo-immuns anti-érythrocytaires, y compris les anticorps qui provoquent des réactions hémolytiques post-transfusionnelles ;
Déterminer la présence d'anticorps immunitaires du système AB0 lors de complications hémolytiques transfusionnelles ;
Comme test de compatibilité pour la sélection individuelle du sang transfusé et de ses composants.
Ainsi, le test de Coombs est un test diagnostique important utilisé dans divers domaines de la médecine (hématologie, obstétrique, rhumatologie, transfusiologie, diagnostic clinique et de laboratoire, etc.). La connaissance des particularités de la réalisation du test de Coombs contribuera à augmenter la fiabilité des résultats obtenus et contribuera à l'interprétation correcte des données de laboratoire.
Littérature
1. Anticorps. Méthodes / éd. D. Katie. - M. : Mir, 1991.
2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadzhiev A.B.. // Thérapie transfusionnelle de l'anémie : manuel. manuel pour les médecins. — M. : Prakt. Médecine, 2005. - P. 105-106.
3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfusiologie. - 2006. - N°2. - P. 39-62.
4. Donskov S.I.// Groupes sanguins du système Rhésus : théorie et pratique. - M. : VINITI RAS, 2005. - P. 180-186, 195.
5.Immunosérologie (documents réglementaires) / comp. A.G. Bashlay, S.I. Donskov. - M. : VINITI RAS, 1998.
6.Etude du système sanguin en pratique clinique / éd. G.I. Kozinets, V.A. Makarova. - M. : Triada-X, 1997.
7. Levin V.I.. Sur le mécanisme de l'érythrodière et de l'érythropoïèse au cours de la période d'anémie posthémorragique aiguë : résumé. dis. ...et. Miel. Sci. -Minsk, 1968.
8. Ragimov A.A., Bayramalibeyli I.E.. // Fondamentaux du diagnostic, de la prévention et du traitement de l'anémie. - M. : GOU VUNMC Ministère de la Santé de la Fédération de Russie, 2002. - P. 204-209.
9. Chumakova E.D.. // Problèmes actuels de l'hématologie et de la transfusiologie : actes du VIe Congrès des hématologues et transfusiologues de la République de Biélorussie, Minsk, 24-25 mai 2007 / éd. I.A. Svirnovski, député. Potapneva. - Minsk : Centre Républicain Scientifique et Pratique d'Hématologie et de Transfusiologie, 2007. - P. 50.
10. Coombs R., Mourant A., Race R.. // Lancette. - 1945. - Vol. 2. - P. 15.
11. Freedman J.. // J. Clin. Pathol. - 1979. - Vol. 32. - P. 1014-1018.
12. Holburn A.M.. Contrôle de qualité. Méthodes en hématologie/éd. I. Cavill. - Édimbourg : Churchill Livingstone, 1982. - Vol. 4. - P. 34-50.
13. Khan S.// JAMC. - 2006. - Vol. 175, N 8. - P. 919.
14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (supplément 7). - P. 719-721.
15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (supplément 7). - P. 716-718.
16. Molthan L., Reidenberg MM, Eihman MF.// Nouvel anglais. J.Méd. —1976. - Vol. 277. - P. 123-125.
17. Muirhead E.E., BosquetsM., Brian S.. // J. Lab. Clin. Méd. —1954. - Vol. 44. - P. 902-903.
18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.
19. Voak D., Downie D., MooreB. et coll. //Biotests Bull. - 1986. - Vol. 1. - P. 41-52.
20. Voak D., Haigh T., Downie D. et coll. Machines à laver les cellules pour les tests d'antiglobuline. Tests répétés - une nouvelle méthode démontrant l'inefficacité d'une machine largement utilisée - le Sorvall CW1-AF2 : rapport à la branche technique du DHSS, février 1991.
21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P.. et coll. //Agents antimicrobiens et chimiothérapie. —1985. - P. 125-127.
22. Zarandona J.M., Yazer M.H.. // JAMC. - 2006. - Vol. 174, N 3. - P. 305-307.
Actualités médicales. - 2008. - N°3. - p. 33-36.
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