Du sang à risque. Diagnostic sérologique - méthodes d'analyse des infections. Qu'est-ce qui peut affecter le résultat de l'analyse ?

La méthode de diagnostic sérologique implique le recours à 2 axes de recherche : le sérodiagnostic (détection d'anticorps spécifiques dans le sérum sanguin des sujets) et la séroidentification (détermination des propriétés antigéniques de l'agent pathogène isolé afin d'établir son type et son type).

Pour le sérodiagnostic, l'agglutination, la précipitation, la lyse, les réactions RSC et les réactions utilisant des antigènes ou des anticorps marqués sont utilisés. Les composants de ces réactions sont : le sérum sanguin des patients examinés et les préparations antigéniques standard. Le but de la recherche est de déterminer les titres d'anticorps contre les agents pathogènes des maladies infectieuses dans les sérums testés.

La détection de titres élevés d’anticorps spécifiques, surtout s’ils atteignent le niveau des titres dits « diagnostiques », confirme le diagnostic suspecté. Une grande importance est attachée à l'étude des sérums appariés, lorsque les sérums prélevés au tout début de la maladie (3-4ème jour) et les sérums obtenus du 7ème au 10ème jour de la maladie sont titrés simultanément. Une multiplication par 4 des titres d’anticorps a une valeur diagnostique.

Pour la séro-identification, la réaction d'agglutination sur verre est le plus souvent utilisée. Composants de la réaction : culture pure cultivée de l'agent pathogène (antigène) et sérum immunitaire de lapin diagnostique standard (anticorps).

L'avantage de la méthode sérologique- simplicité, accessibilité, haute sensibilité, spécificité, expressivité.

Défauts: le besoin de médicaments et d'équipements standards et coûteux.

Méthode allergologique

Cette méthode consiste à identifier la sensibilisation du corps à un agent infectieux particulier, ce qui revêt une grande importance diagnostique. On sait que l'évolution de certaines maladies infectieuses s'accompagne de la formation d'une hypersensibilité de type retardé. À cet égard, l'administration intradermique de petites doses de l'allergène à ces patients provoque une réaction correspondante de la part du corps, provoquée par une rencontre répétée avec l'allergène. La réaction se déroule de manière retardée et après 48 à 72 heures, une rougeur, un gonflement et parfois un infiltrat (réaction positive) apparaissent au site d'injection de l'allergène. Si l’organisme n’est pas sensibilisé, l’administration intradermique ne provoquera aucune réaction de l’organisme (réaction négative). L'industrie produit des préparations spéciales pour les tests d'allergie cutanée : tuberculine, dysentérine, brucelline, tularine, etc.

La méthode allergologique est particulièrement importante dans les cas où l'identification de l'agent causal d'une maladie infectieuse est difficile ou impossible (par exemple, dans le cas de la lèpre) ou lorsque cela nécessite beaucoup de temps (par exemple, dans le cas de la brucellose). Le test tuberculinique est utilisé dans la pratique non seulement à des fins de diagnostic, mais également pour déterminer le moment de la revaccination des enfants avec le vaccin BCG, ainsi que pour étudier l'immunité collective antituberculeuse.

Avantages de la méthode allergologique - sa simplicité, sa fiabilité, son expressivité.

Défaut - utilisation limitée, car toutes les maladies infectieuses ne développent pas une hypersensibilité de type retardé.

RÉACTIONS SÉROLOGIQUES DANS LE DIAGNOSTIC

MALADIES INFECTIEUSES

Actuellement, les méthodes de recherche immunologiques sont largement utilisées pour le diagnostic en laboratoire des maladies infectieuses et non infectieuses.

Les réactions d'interaction entre antigènes et anticorps sont dites sérologiques (sérum - sérum, logos - enseignement).

L’essence de toutes les réactions sérologiques réside dans la combinaison spécifique d’antigènes et de leurs anticorps correspondants pour former un complexe. Une réaction sérologique est possible s'il existe une correspondance immunologique (homologie) des principaux composants - antigènes et anticorps. La spécificité immunologique repose sur la complémentarité structurelle de l’antigène et de l’anticorps.

Le processus d'interaction entre les antigènes et les anticorps se déroule en deux phases : spécifique et non spécifique. La première phase se développe rapidement. Il s'agit d'une connexion spécifique du centre actif de l'anticorps avec les groupes déterminants de l'antigène (homologue) correspondant. La phase suivante se développe plus lentement, non spécifique - c'est la manifestation externe de la réaction antigène-anticorps (perte de flocons, trouble du milieu, etc.)

Les réactions sérologiques sont utilisées à deux fins :

1) détecter les anticorps dans le sérum testé à l’aide d’antigènes connus (sérodiagnostic) ;

2) identifier un antigène inconnu à l'aide de sérums connus (séro-identification).

La détermination d'un antigène inconnu lors d'études microbiologiques est effectuée afin d'établir le genre, l'espèce et le type d'agents pathogènes isolés du sujet. Dans de tels cas, parmi les deux composants principaux de la réaction (anticorps, antigène), l'inconnu est l'antigène ; la réaction doit être réalisée avec des anticorps connus. Dans ce cas, l'antigène est une culture pure de micro-organismes isolés du matériel à tester. Les sérums de diagnostic immunitaire sont utilisés comme anticorps connus. Ces derniers sont obtenus à partir du sang d'animaux (le plus souvent des lapins), préalablement immunisés avec des antigènes bactériens appropriés. Les sérums immunitaires doivent contenir des niveaux élevés d’anticorps spécifiques.

De plus, les réactions sérologiques peuvent être utilisées pour déterminer divers antigènes non bactériens : pour établir des groupes sanguins, des antigènes tissulaires, des tumeurs, pour sélectionner des couples donneur-receveur pour une transplantation d'organes et de tissus, etc.

Des tests sérologiques peuvent également être utilisés pour détecter les anticorps dans le sérum sanguin. Dans de tels cas, un antigène connu (diagnosticum) est requis. Des suspensions de microbes vivants ou tués, des extraits ou des fractions chimiques isolées de ceux-ci peuvent être utilisés comme antigènes.

De nombreux tests sérologiques actuellement utilisés dans la pratique des soins de santé diffèrent par le phénomène qui révèle la relation entre antigène et anticorps. La manifestation visible de la réaction varie en fonction de la technique utilisée, de l'état physique dans lequel l'antigène ou du sérum immun est utilisé et de l'implication ou non du complément dans la réaction. Par exemple, si un antigène corpusculaire est utilisé, le phénomène d'agglutination se produit - le collage des particules (réaction d'agglutination). Étant donné que les antigènes corpusculaires sont composés de particules relativement grosses, un précipité floculent visible se forme. Si un antigène soluble est utilisé dans la réaction, on observe la formation d'un précipité à grains fins (réaction de précipitation). Si le complément est également introduit dans l'interaction entre les antigènes bactériens et le sérum immunitaire, il se produit une bactériolyse (dissolution des antigènes bactériens) ou une lyse des globules rouges (lorsqu'ils sont utilisés comme antigène). L'utilisation d'immunsérums marqués aux fluorochromes, enzymes ou radio-isotopes dans des réactions sérologiques permet d'établir la liaison spécifique des antigènes aux anticorps par le phénomène correspondant (luminescence, changement de couleur ou activité du marqueur radio-isotopique).

Pour évaluer les réactions sérologiques, des critères tels que la spécificité et la sensibilité sont utilisés. La spécificité est la capacité des antigènes à réagir uniquement avec des anticorps homologues. La sensibilité est la capacité d'interagir spécifiquement avec des quantités minimes d'antigènes et d'anticorps.

Réaction d'agglutination

La réaction d'agglutination (RA) est une interaction spécifique d'antigènes avec des anticorps, exprimée par le collage d'antigènes sous l'influence d'anticorps sériques et leur précipitation en présence d'un électrolyte. C'était la première des réactions sérologiques proposées.

La particularité de la réaction d'agglutination est que des cellules ou d'autres particules corpusculaires sont utilisées comme antigènes dans sa production. La réaction est basée sur la capacité des antigènes corpusculaires à se combiner spécifiquement avec des anticorps homologues de sérums immuns pour former un précipité sous forme de grains, de flocons et de grumeaux. La réaction a lieu uniquement en présence d'électrolytes. Les antigènes utilisés dans la réaction sont appelés agglutinogènes, les anticorps sont appelés agglutinines et le précipité résultant est appelé agglutinat.

Une suspension de cultures vivantes dans une solution isotonique de chlorure de sodium ou de microbes tués avec du formaldéhyde, de l'alcool ou de la chaleur, ainsi que des globules rouges, des leucocytes ou d'autres cellules peuvent être utilisés comme antigène dans la réaction d'agglutination.

La source d'anticorps est un sérum agglutinant connu obtenu en immunisant des animaux avec les antigènes correspondants, ou le sérum du patient examiné.

Il existe différentes manières de réaliser une réaction d’agglutination. Parmi celles-ci, les plus couramment utilisées sont : la réaction indicative sur verre, l'agglutination extensive en éprouvette, l'hémagglutination et les réactions d'hémagglutination indirecte (IRHA).

Informations connexes.

Que sont les tests sérologiques, pourquoi sont-ils réalisés, quelles sont les principales méthodes de diagnostic sérologique ?

Les études sérologiques sont des méthodes d'étude des antigènes ou des anticorps présents dans le matériel biologique des patients, basées sur certaines réactions immunitaires. La détection d'anticorps dirigés contre l'agent infectieux ou d'antigènes dans le matériel biologique permet d'établir la cause de la maladie.

n'ont pas une spécificité et une sensibilité de 100 % dans le diagnostic des maladies infectieuses. Leurs résultats doivent donc être évalués en tenant compte du tableau clinique de la maladie. Ceci explique la nécessité d'utiliser plusieurs tests pour diagnostiquer l'infection, ainsi que l'utilisation de méthodes Western blot, confirmant les résultats des méthodes de dépistage.

« L'immunotransfert (Western blot) est en fait la méthode de vérification (confirmation) finale dans la chaîne des études immunologiques qui nous permet de tirer une conclusion finale en laboratoire. Ce test est particulièrement important pour confirmer ou infirmer une maladie infectieuse (par exemple, coqueluche, borréliose, etc.). La méthode Western blot est généralement nécessaire après la détection d'anticorps IgG positifs du processus infectieux, car C'est dans cette combinaison que se produisent une interprétation de laboratoire plus correcte des résultats et d'autres tactiques de traitement pour le patient. Pour réaliser un Western blot, on utilise des bandelettes spéciales de nitrocellulose sur lesquelles les protéines sont transférées par immunophorèse horizontale puis verticale par ordre de poids moléculaire croissant. Les anticorps du sérum du patient interagissent avec les protéines dans certaines zones de la bandelette, puis une réaction se déroule de manière similaire à un test immuno-enzymatique (ELISA) »,- explique candidate en sciences médicales, directrice médicale du laboratoire SYNEVO Ukraine, Oksana Vladislavovna Nebyltsova.

Matériel biologique utilisé pour la recherche sérologique

• Sérum sanguin
• Salive
• Matière fécale

Dans quelles conditions les tests sérologiques sont-ils utilisés pour diagnostiquer ?

Le but des études sérologiques est d'établir l'efficacité du traitement après la guérison du patient, ainsi que de détecter les rechutes de la maladie. De plus, les méthodes sérologiques peuvent détecter des maladies telles que :

• Amibiase
• Giardiase
• Opisthorchiase
• Trichinose
• Toxocarose
• Cysticercose
• Échinococcose

Principales méthodes utilisées dans le diagnostic sérologique

Réaction d'immunofluorescence (RIF, méthode Koons)

Types de méthode :

Direct : les microbes ou les antigènes tissulaires ou les microbes sont traités avec des sérums spéciaux contenant des anticorps, ainsi que des fluorochromes marqués qui brillent dans les rayons UV. Les bactéries brillent ainsi sous forme d’une bordure verte à la périphérie de la cellule. Observé au microscope à fluorescence.

Indirect : les frottis sont traités avec des anticorps antimicrobiens issus du sérum de lapin. Les anticorps qui ne se sont pas liés aux antigènes microbiens sont ensuite éliminés. De cette manière, les anticorps restant sur les microbes sont détectés. En conséquence, un complexe microbe + anticorps anti-lapin + anticorps anti-microbiens de lapin, marqués au fluorochrome, se forme. Ce complexe est observé au microscope à fluorescence.

Pour évaluer les résultats, il existe une échelle en quatre points, caractérisée par l'intensité de la lueur jaune-verte de la surface des cellules antigéniques :

Très faible lueur cellulaire

Faible lueur de la périphérie cellulaire

+++/++++ éclat lumineux de la cellule

Le titre de la réaction est considéré comme la dilution du sérum avec le résultat de la réaction +++ ou ++++.

Réaction d'hémagglutination indirecte (RSI)

La réaction d'hémagglutination passive ou indirecte est utilisée pour diagnostic des infections causée par des protozoaires, des bactéries et des rickettsies.

La technique comprend plusieurs étapes. Dans un premier temps, les globules rouges sont traités et « lavés » avec une solution isotonique de chlorure de sodium, puis, si nécessaire, avec une solution de tanin 1 : 20 000, puis sensibilisés avec des antigènes solubles. Après traitement avec une solution tamponnée de chlorure de sodium isotonique, l'antigène est prêt à l'emploi. Le sérum est dilué dans des tubes à essai avec une solution isotonique de chlorure de sodium, après quoi un diagnostic érythrocytaire est ajouté à chaque sérum dilué.

Les résultats sont appréciés par la nature du sédiment érythrocytaire :

Faible intensité

Intensité moyenne

Réaction intense

Réaction très intense

Le résultat d'une réaction avec une réaction intense +++ ou une réaction très intense ++++, dans laquelle les globules rouges recouvrent tout le fond du tube, est considéré comme positif.

Test immuno-enzymatique (ELISA)

La méthode a une spécificité et une sensibilité élevées, supérieures à 90 %. Le principal avantage est la possibilité détection d'une infection et suivre la dynamique du processus, qui est indiquée par le niveau d'anticorps.

Le test est utilisé pour diagnostiquer un large éventail d’infections, notamment :

• Infection par le VIH
• Hépatite virale
• Infection à cytomégalovirus
• Infection à l'herpès
• Infection à toxoplasme

Nouvelles recommandations pour une alimentation saine basées sur de nouvelles recherches

L'antigène ou l'anticorps est fixé sur des plaques solides, puis, à l'aide d'un marqueur enzymatique, des complexes antigène-anticorps sont détectés.

ELISA présente un certain nombre d'avantages par rapport aux autres méthodes sérologiques. La réaction est la plus sensible et les tests utilisent des réactifs universels. L'analyse est rapide et permet d'étudier les immunoglobulines de différentes classes. Actuellement, l'ELISA est l'une des principales méthodes de diagnostic en laboratoire.

L'évaluation des résultats ELISA est effectuée automatiquement à l'aide d'appareils spéciaux. Dans certains cas, l'enregistrement visuel des résultats de la réaction est également autorisé. La fiabilité du diagnostic sérologique dépend de l'organisation du contrôle de laboratoire, qui consiste en plusieurs procédures destinées à évaluer la qualité des résultats.

Sérologie(du latin sérum - « sérum », logos - « science ») est une branche de l'immunologie qui étudie les spécificités de l'interaction des anticorps sériques avec les antigènes.

La base du diagnostic est la détection d'anticorps spécifiques formés en réaction à une infection du corps par un antigène spécifique. En fonction des anticorps trouvés dans le sang, une conclusion est tirée sur la nature de l'infection et le nombre de ces anticorps indique le degré d'activité de la maladie infectieuse.

Le matériel prélevé pour la recherche dans le cadre d'un test sanguin sérologique est étudié pour d'autres maladies dangereuses - herpès, infections intestinales, rubéole, toxoplasmose, chlamydia, rougeole, chlamydia. De plus, cette étude permet de confirmer votre groupe sanguin et de déterminer la spécificité des protéines.

Ainsi, des études sérologiques sont réalisées :

• si un diagnostic préliminaire a été posé et que sa confirmation est désormais requise. L'étude repose sur l'ajout de l'antigène correspondant au sérum sanguin. La réponse permet de tirer une conclusion sur la présence ou l'absence de la maladie ;
• si le diagnostic ne peut être posé. Dans le cadre de l'étude, des anticorps sont ajoutés au sang et le type d'antigènes est déterminé, ce qui permet de déterminer une maladie spécifique ;
• si c'est nécessaire.

Ainsi, un test sanguin sérologique permet de poser un diagnostic ou de prescrire le traitement le plus efficace - avec un minimum de temps et de coûts financiers.

Les avantages des études sérologiques comprennent :

• la capacité d'identifier les micro-organismes pathologiques dès les premiers stades de l'infection ;
• surveiller l'évolution de la maladie et le niveau d'efficacité de la thérapie ;
• pas besoin de préparation particulière avant de prendre du biomatériau ;
• efficacité. Le résultat sera disponible en deux à trois heures, ce qui est très important dans des conditions de traitement hospitalier ;
• disponibilité financière du réactif, qui permet de réaliser des prélèvements aussi souvent que nécessaire ;
• aucune contre-indication.

Comment se déroulent les tests sérologiques ?

Le sang est prélevé de la veine ulnaire. Un point important est que le sang n'est pas prélevé avec une seringue, mais par gravité - une aiguille est insérée dans une veine sans seringue et jusqu'à cinq ml de sang sont collectés dans un tube à essai. La procédure est effectuée le matin.

Selon les réactions qui sous-tendent l'étude, on distingue plusieurs types de procédures :

1. réaction de neutralisation. Il est basé sur la propriété des anticorps du sérum immunitaire de réagir comme un agent neutralisant contre les micro-organismes ou les toxines, empêchant ainsi leurs effets négatifs sur l'organisme ;
2. réaction d'agglutination. Peut être direct ou indirect. Dans le premier cas, nous parlons d'étudier le sérum sanguin pour la présence d'anticorps (des microbes tués sont injectés dans le matériau et la réaction est évaluée - s'il y a un précipité sous forme de flocons, la réaction est positive), et la réaction indirecte est basée sur l'introduction dans le matériau d'érythrocytes sur lesquels sont adsorbés des antigènes (un sédiment festonné indique une réaction positive);
3. réaction de précipitation. La solution antigénique est déposée sur l'immunsérum (agit comme un milieu liquide). Un antigène soluble est utilisé. Si le complexe antigène-anticorps précipite, la réaction est considérée comme positive ;
4. réaction impliquant le complément. Domaine d'application : détection des maladies infectieuses. Le complément est activé et les réactions sont examinées ;
5. réaction avec des antigènes et des anticorps marqués. Elle est basée sur le fait que les antigènes tissulaires ou les microbes, traités de manière particulière, commencent à émettre de la lumière sous l'influence des rayons UV. La méthode est largement utilisée non seulement pour le diagnostic des antigènes, mais également pour la détermination des hormones, des enzymes et des médicaments.

Il est nécessaire de se préparer au test : quatre jours à l'avance, le patient doit arrêter de prendre des médicaments pour le cœur ; il doit également éliminer l'alcool sous toutes ses formes, les aliments épicés et gras, les sucreries, limiter les efforts physiques et éviter le stress.

Si ces règles ne sont pas respectées, le risque d'un résultat faussement positif augmente. Avant de prescrire un nouveau test, le médecin doit connaître ce que le patient a fait la veille de l'intervention et donner des recommandations sur la manière de bien se préparer à l'examen.

Analyse sérologique : explication

Une prise de sang sérologique est un test qui permet de déterminer/confirmer le type d'agent infectieux et aide un spécialiste à poser un diagnostic. Il s'agit d'une aide indispensable si le médecin ne peut pas choisir un traitement médicamenteux, car les agents responsables de diverses maladies diffèrent par leur sensibilité différente à l'action de médicaments et d'antibiotiques spécifiques.

Une fois la procédure de collecte du matériel terminée, les assistants de laboratoire passent à l'étape suivante : le déchiffrement des indicateurs. Ainsi, si aucun anticorps n’est détecté dans le sang du patient, nous pouvons conclure qu’il n’y a pas d’infection dans le corps – le résultat du test dans ce cas est positif.

Mais cet état de fait est plutôt une exception à la règle : s'il existe des symptômes de la maladie, des études sérologiques identifient et prouvent la présence d'une pathologie grave dans l'organisme.

Tout d'abord, les agents pathogènes sont détectés dans le corps par analyse, puis la quantité d'anticorps est évaluée, sur la base de laquelle une conclusion est tirée sur la gravité de l'infection.

Tests sérologiques de l'hépatite, du VIH, de la syphilis : caractéristiques

Syphilis . Lorsqu'ils effectuent une analyse de la syphilis, les spécialistes recherchent les protéines responsables de l'entrée de l'agent infectieux dans le corps humain - nous parlons de Treponema pallidum. Dans ce cas, le sérum sanguin agit comme un matériel biologique.

. L'hépatite virale est une maladie infectieuse grave dont le danger réside dans le fait qu'elle peut vivre assez longtemps dans l'organisme sans se manifester. La maladie peut être détectée à un stade précoce, lorsqu'elle est plus traitable, en analysant des marqueurs - des marqueurs apparaissent dans le sang après une maladie ou l'administration d'un vaccin.

Besoin de comprendre que l'identification de l'agent pathogène n'est possible que 1,5 à 2 mois après l'infection. Si une femme enceinte passe le test, un résultat faussement positif est possible.

Nous vous recommandons de consulter le site Web médical https://tabletix.ru/. Sur le site vous trouverez des informations utiles et des avis médicaux.
Si vous présentez un ou plusieurs des symptômes énumérés ci-dessous, vous devriez envisager de passer un test sérologique :

• vomir;
• manque d'appétit ou manque d'appétit ;
• faiblesse corporelle sans cause, surmenage;
• teint jaunâtre;
• changements dans la couleur des selles et de l'urine.

VIH. Si le résultat est positif, cela ne signifie pas que le patient est infecté par le SIDA. Si l'infection est survenue récemment (il n'y a pas plus de deux mois), la présence d'anticorps ne permet pas de déterminer si la maladie s'est développée. Une nouvelle étude est ordonnée.

Test sanguin sérologique- la méthode de recherche la plus importante, dont l'objectif principal est d'identifier rapidement les virus, les infections, les microbes présents dans l'organisme.

Cet «outil» de laboratoire unique permet d'identifier toute maladie résultant de l'immunosuppression, alors ne soyez pas paresseux, mais faites-vous tester régulièrement afin de pouvoir identifier la maladie à temps et vous en débarrasser rapidement.

8 057

Afin d'établir un diagnostic précis, le patient est examiné de manière approfondie. Un test sanguin général n’est pas très informatif ; il n’est pas utilisé pour diagnostiquer une infection sexuellement transmissible.

Types de recherche et biomatériaux pour analyse

Diverses techniques et biomatériaux sont utilisés pour identifier la maladie. Aux premiers stades, la syphilis est déterminée à l'aide d'un test bactérioscopique. Les échantillons sont examinés au microscope. L'appareil permet de détecter des souches pathogènes. Des tests sérologiques sont effectués ultérieurement. Grâce à eux, les antigènes et les anticorps contre la maladie sont détectés dans les échantillons.

Les méthodes de détermination des infections sexuellement transmissibles sont divisées en 2 catégories :

• Direct, identifiant les micro-organismes pathogènes. Ceux-ci incluent: la microscopie à fond noir, l'analyse RIT (infection de lapins avec un biomatériau pour la recherche), la méthode PCR - réaction en chaîne par polymérase (avec son aide, les éléments génétiques de l'agent pathogène sont trouvés).
• Les tests indirects (sérologiques) permettent la détection des anticorps dirigés contre l'agent pathogène. Ils sont produits par le système immunitaire en réponse à une infection.

Les techniques sérologiques sont divisées en 2 catégories : tréponémiques et non tréponémiques.

Non tréponémique, comprenant : test au rouge de toluidine, analyse RSC, test RPR, prise de sang selon la méthode express RMP.

Tréponémique, associant : immunoblot, test RSK, analyse RIT, étude RIF, test RPGA, analyse ELISA.

Le contenu informatif des tests d’infection varie. Le plus souvent, les principaux types de tests de dépistage de la syphilis sont effectués, notamment des méthodes sérologiques. Pour les patients nécessitant un examen, le médecin prescrit des tests individuellement.

Biomatériau pour la recherche

Pour identifier Treponema pallidum, un agent pathogène qui ressemble à une spirale et qui provoque la syphilis, des échantillons sont prélevés :

• sang veineux;
• liquide céphalo-rachidien (sécrétion du canal rachidien);
• contenu des ganglions lymphatiques ;
• tissu ulcéré.

S'il est nécessaire d'effectuer des tests pour détecter la syphilis, le sang est prélevé non seulement de la veine cubitale, mais également du doigt. Le choix du biomatériau et la méthode d'examen sont influencés par la gravité de l'infection et l'équipement du centre de diagnostic.

Recherche directe

Une preuve convaincante de la syphilis est l'identification des agents infectieux au microscope. Ainsi, l'agent pathogène est retrouvé chez 8 sujets sur 10. Un résultat négatif chez les 2 patients restants ne signifie pas qu'ils ne sont pas infectés.

L'étude est réalisée aux stades primaires et secondaires (stades) de la maladie, qui se caractérisent par l'apparition d'éruptions cutanées et de syphilomes (ulcérations) sur les tissus épithéliaux ou les muqueuses. Les agents pathogènes responsables des maladies sexuellement transmissibles se trouvent dans les sécrétions des lésions.

Plus précisément, un test complexe appelé RIF, une réaction d'immunofluorescence, permet de détecter les tréponèmes. L'échantillon destiné à la recherche est prétraité avec des anticorps fluorescents. Les composés qui peuvent briller se collent aux bactéries. En examinant les échantillons au microscope, en cas d'infection, le technicien de laboratoire voit des agents pathogènes étincelants.

Le test est utilisé pour le diagnostic précoce de la maladie. Plus la maladie dure longtemps, plus la sensibilité des méthodes de recherche est faible. De plus, il tombe après le traitement d'éruptions cutanées et d'ulcères avec des antiseptiques et chez les patients ayant suivi un traitement. Parfois, le test produit des résultats faussement négatifs et faussement positifs.

L'analyse RIT est une méthode très précise pour détecter la syphilis. Lorsque vous effectuez un test, vous devez attendre longtemps pour obtenir des résultats. Jusqu'à ce que le lapin infecté présente des signes d'infection. Le test est très rarement utilisé, malgré le fait qu'il soit extrêmement précis.

À l'aide de la réaction en chaîne par polymérase pour la syphilis, les éléments génétiques des agents pathogènes sont déterminés. Le seul inconvénient de la PCR est son coût élevé.

Tests non tréponémiques

De tels tests sanguins aident à identifier les anticorps qui apparaissent en réponse à la cardiolipine, un composé lié à la structure générale des membranes des agents pathogènes.

Réaction de Wasserman (RW ou RW)

Le test le plus connu pour la syphilis est la réaction de Wasserman. Le RV est inclus dans la catégorie des réactions de fixation du complément (CFR). Les nouvelles méthodes RSC présentent des différences significatives par rapport aux méthodes RW traditionnelles. Mais ils sont désignés, comme précédemment, par le concept de « réaction Wassermann ».

Le système immunitaire synthétise des anticorps (marqueurs) en réponse à l'invasion tréponémique. Ils sont détectés par un test sanguin de recherche de la syphilis utilisant la réaction de Wasserman. Un résultat RW positif confirme que le sujet est infecté.

Réaction d'hémolyse – indice d'analyse RT. Avec lui, deux substances interagissent : le sérum hémolytique et les globules rouges de mouton. Le sérum est fabriqué en immunisant un lapin avec des globules rouges de mouton. L'activité du fluide biologique est réduite par le chauffage.

Les indicateurs RV dépendent du fait qu'une hémolyse s'est produite ou non. Dans un échantillon exempt de marqueurs, une hémolyse se produit. Dans ce cas, une réaction aux antigènes est impossible. Le complément est utilisé pour interagir avec les globules rouges de mouton. Lorsqu’il y a des marqueurs dans l’échantillon, le complément réagit avec les antigènes. Dans ce cas, l'hémolyse ne se produit pas.

Les composants pour RW sont mesurés en quantités égales. L'échantillon contenant le sérum, l'antigène et le complément est chauffé. Des érythrocytes d'agneau et du sérum sont ajoutés à l'échantillon. Maintenir à une température de 37 degrés jusqu'à ce qu'une hémolyse se produise dans l'échantillon témoin, qui contient une solution saline au lieu de l'antigène.

Pour réaliser la RT, des antigènes prêts à l'emploi sont utilisés. Les titres et la technologie pour les diluer sont indiqués sur les emballages. Un résultat RW positif est indiqué par des croix. Les résultats des tests prêts sont indiqués comme suit :

• ++++ – maximum positif (hémolyse retardée) ;
• +++ – positif (l'hémolyse est considérablement retardée) ;
• ++ – faiblement positif (l'hémolyse a été partiellement retardée) ;
• + – douteux (l'hémolyse était légèrement retardée).

Avec une RT négative, l’hémolyse a été complètement réalisée dans tous les échantillons. Mais dans certains cas, des données faussement positives sont obtenues. Cela se produit lorsque la cardiolipine pénètre dans les cellules. Les mécanismes de défense ne produisent pas de marqueurs pour la cardiolipine « native ».

Toutefois, des situations exceptionnelles surviennent parfois. Un RW positif est détecté chez les personnes non infectées. Ceci est possible si le patient a souffert d'une maladie grave causée par des virus (pneumonie, paludisme, tuberculose, pathologies hépatiques et sanguines). Un RV positif survient chez les femmes enceintes. Cela est dû au fait que le système immunitaire est excessivement affaibli.

Si l'on soupçonne que le résultat du test de syphilis est faussement positif, le patient est en outre examiné. Le problème est que cette infection ne peut pas être détectée à l’aide d’un seul test de laboratoire clinique. Certaines études donnent de faux indicateurs, qui peuvent être à la fois négatifs et positifs.

Une analyse détaillée de la syphilis permet d'obtenir des données fiables. Grâce à lui, un véritable diagnostic est établi : l'infection est avérée ou exclue. De plus, le test étendu vous permet d'arrêter le développement de l'infection et d'éliminer les traitements inutiles.

RSK et RMP

Lors du test de dépistage de la syphilis, la réaction traditionnelle de Wasserman est extrêmement rarement utilisée. Au lieu de cela, la méthode RSK est utilisée. Le test donne un résultat positif 2 mois après l'infection. Dans la forme secondaire de la maladie, il est positif dans près de 100 % des cas.

La méthode de microprécipitation (MPM) est une étude dont le mécanisme est similaire à la réaction de Wasserman. La technique est facile à mettre en œuvre. Elle est réalisée rapidement. Pour tester la syphilis, dans ce cas, du sang est prélevé d’un doigt. La technique donne un résultat positif 30 jours après l'apparition du syphilome. Des erreurs lors de la recherche ne sont pas exclues. Des données faussement positives sont obtenues dans le contexte de : infections aggravées, pneumonie, crise cardiaque, accident vasculaire cérébral, intoxication.

Les éléments suivants conduisent à des tests erronés :

Après avoir découvert un test douteux pour la syphilis, des études tréponémiques sont réalisées. Ils aident à clarifier le diagnostic.

Test RPR et rouge de toluidine

La méthode à la réaction plasmatique (RPR) est un autre analogue de la réaction de Wasserman. Il est utilisé lorsque cela est nécessaire :

• dépister les individus asymptomatiques ;
• confirmer la syphilis ;
• examiner un don de sang.

Le test au rouge de toluidine, comme le RPR, est réalisé pour évaluer la dynamique du traitement médicamenteux. Leurs indicateurs diminuent lorsque la maladie recule et augmentent lorsque la pathologie récidive.

Les tests non tréponémiques montrent à quel point le patient a récupéré. Recevoir des résultats négatifs pour la syphilis indique que la maladie a complètement reculé. Le premier examen est effectué 3 mois après le traitement.

Études tréponémiques

Des tests très productifs sont réalisés avec des antigènes tréponémiques. Ils sont terminés lorsque :

• un résultat positif a été obtenu avec la méthode RMP ;
• il est nécessaire de reconnaître les données erronées provenant des tests de dépistage ;
• Suspecter le développement de la syphilis ;
• il est nécessaire de diagnostiquer une infection cachée ;
• il est nécessaire de procéder à un diagnostic rétrospectif.

Tests RIF et RIT

Chez de nombreux patients traités, les tests tréponémiques des échantillons donnent des résultats positifs pendant une longue période. Ils ne peuvent pas être utilisés pour juger du degré d’efficacité du traitement. RIT et RIF sont des tests ultra-sensibles. Grâce à eux, des données fiables sont obtenues. Ces analyses demandent beaucoup de travail ; elles nécessitent un temps considérable et un équipement avancé. Elles peuvent être réalisées par des agents de santé qualifiés.

Lors de la réalisation d'un test RIF pour la syphilis, des données positives sont obtenues 2 mois après l'infection. Les paramètres négatifs confirment que le sujet est en bonne santé. Positif - suggère que la personne est infectée.

La RIT est réalisée lorsque la réaction de microprécipitation est positive. Ce test sanguin pour la syphilis permet de réfuter ou de confirmer la présence d'une infection. Le test est ultra-sensible, il indique avec précision si le patient est infecté ou en bonne santé. Mais l’étude fournit des données fiables seulement 3 mois après l’entrée des tréponèmes dans l’organisme.

Méthode d'immunotransfert

Les tests ultra-précis incluent l’immunotransfert. Ce test sanguin est rarement effectué pour la syphilis. Il est utilisé lors de l'examen des nouveau-nés. Il ne convient pas aux tests rapides. Les résultats positifs sont obtenus avec du retard. Ils sont obtenus beaucoup plus tôt par la méthode de microprécipitation.

ELISA et RPGA

Les méthodes de recherche informatives ultra-précises incluent les tests ELISA et RPGA. Avec leur aide, un diagnostic rapide est effectué. Les techniciens de laboratoire effectuent un grand nombre de tests de ce type. Grâce à eux, il est possible d'établir un diagnostic précis.

Le test RPGA pour la syphilis est positif 30 jours après l'entrée de l'agent pathogène dans l'organisme. Il est utilisé pour diagnostiquer la primo-infection lorsque des ulcères et des éruptions cutanées apparaissent.

Grâce à lui, il est possible d'identifier des formes de pathologie avancées, secrètement en cours, ainsi que congénitales. Mais elle est réalisée en conjonction avec des tests non tréponémiques et tréponémiques. Un diagnostic complet garantit la fiabilité des résultats. Le triple test prouve avec précision la présence ou l’absence d’une infection sexuellement transmissible.

La réaction positive persiste pendant une longue période. Pour cette raison, l’étude n’est pas utilisée pour évaluer l’efficacité du traitement.

Le test ELISA est positif 21 jours après l'infection. Le test donne parfois des résultats erronés. Ils apparaissent dans des pathologies systémiques et des processus métaboliques altérés. Leur efficacité est discutable chez un enfant né d’une mère infectée.

Les erreurs obtenues avec les méthodes de recherche sérologique sont devenues la raison de la découverte de méthodes de diagnostic progressives. La chromatographie en phase gazeuse et la spectrométrie de masse ne donnent pas de faux résultats. Le seul obstacle à leur utilisation massive est leur coût élevé.

Algorithme de diagnostic

• Lorsque la syphilis est en phase primaire (jusqu'à 60 jours après l'infection), l'agent pathogène est recherché sur un fond sombre ou des anticorps fluorescents sont utilisés pour le détecter.
• Si la pathologie est sous forme primaire, secondaire ou latente, la RMP et l'ELISA sont utilisées. Un test sanguin RPGA pour la syphilis permet de confirmer les résultats.
• En cas de récidive d'infection secondaire, l'écoulement des ulcérations et des éruptions cutanées est analysé. Les agents pathogènes sont retirés des échantillons et étudiés par microscopie.
• Lorsque la maladie entre en phase tertiaire, 1/3 des patients ont une RMP négative. Parallèlement, les résultats de l'ELISA et du RPGA sont positifs. Cependant, ils n'indiquent pas toujours la période tertiaire, mais confirment que la personne a déjà souffert d'une infection. Un test faiblement positif témoigne d’une guérison complète et non du développement de la phase tertiaire.
• Pour confirmer la syphilis congénitale, des analyses de sang sont effectuées sur la mère et le bébé. Comparez les données des tests RMP. Ils tiennent compte du fait que les tests ELISA et RPGA du bébé sont positifs. Le diagnostic est confirmé par la technique de l'immunotransfert.

La syphilis, comme toute pathologie systémique, touche l’ensemble de l’organisme. Par conséquent, le test est effectué pendant la grossesse, avant un avortement. Les patients subissent RMP, ELISA, RPGA.

Comment se faire tester

Un vénéréologue envoie des patients pour analyse. Les laboratoires privés effectuent des tests anonymes pour la syphilis à la demande du client. Vous n'avez pas besoin de l'avis d'un médecin pour passer le test.

Règles de conduite de l'étude :

• Le sang est prélevé au laboratoire le matin à jeun (manger après l'intervention). Avant le test, vous êtes autorisé à boire uniquement de l’eau.
• 2 jours avant l'examen, il est interdit de manger des aliments gras et de boire de l'alcool.
• Le sang est prélevé d'un doigt ou d'une veine.
• Combien de temps dure l'étude ? Généralement pas plus d'une journée. L'interprétation des tests de dépistage de la syphilis est obtenue auprès des techniciens de laboratoire ou du médecin traitant.
• Quelle est la durée de validité du test ? Après 3 mois, les résultats des tests deviennent invalides. Ils sont à nouveau loués.

Si la transcription de l'analyse montre que le test est positif, vous devez consulter un vénéréologue, qui vous prescrira un examen supplémentaire pour confirmer avec précision le diagnostic et sélectionner le schéma thérapeutique nécessaire.

Test du contenu de la colonne vertébrale

Le diagnostic de neurosyphilis est posé après examen du liquide céphalo-rachidien. Cette analyse est effectuée :

• les personnes présentant une forme latente d'infection ;
• pour les symptômes de maladies du système nerveux ;
• neurosyphilis asymptomatique et avancée;
• patients guéris avec des réactions sérologiques positives.

Un médecin vous oriente vers un test de liquide céphalo-rachidien. Une ponction est réalisée à partir du canal rachidien dans 2 tubes. La piqûre est lubrifiée à l'iode et recouverte d'une serviette stérile. Après l'intervention, le patient reste alité pendant 2 jours.

Dans 1 échantillon, la quantité de protéines, de cellules et de traces de méningite est déterminée. Dans le deuxième échantillon, les anticorps dirigés contre l'agent causal de la syphilis sont calculés. Pour ce faire, ils effectuent les tests suivants : RV, RMP, RIF et RIBT.

Selon le nombre de violations détectées, il existe 4 types de liquide céphalo-rachidien. Chacun indique des dommages spécifiques au système nerveux. Le médecin diagnostique :

De plus, les résultats des tests sont utilisés pour juger du rétablissement du patient.

L'interprétation des tests relève de la tâche du médecin. Lui seul est capable de tirer les bonnes conclusions, de prescrire, si nécessaire, des examens complémentaires et de poser un diagnostic précis. Vous ne devez pas faire d'autodiagnostic en cas de pathologie systémique dangereuse. Une erreur de diagnostic a de graves conséquences.

Réaction de fixation du complément (CFR)

La réaction de fixation du complément (FFR) s'effectue en deux phases : dans la première phase, l'antigène est combiné avec le sérum à tester, dans lequel la présence d'anticorps est supposée, le complément est ajouté et incubé dans un thermostat pendant 30 minutes.

Deuxième phase : ajouter un système hémolytique (globules rouges de mouton + sérum hémolytique). Après 30 minutes d'incubation au thermostat, le résultat est pris en compte.

Avec un RSC positif, les anticorps sériques, se combinant à l'antigène, forment un complexe immunitaire qui fixe le complément et l'hémolyse ne se produira pas. Si la réaction est négative (il n’y a pas d’anticorps dans le sérum testé), le complément restera libre et une hémolyse se produira.

Le RSC est utilisé pour le diagnostic sérologique de la syphilis, de la gonorrhée, du typhus et d'autres maladies.

Les réactions immunitaires utilisant des antigènes et des anticorps marqués reposent sur le fait que l’un des ingrédients impliqués dans la réaction (antigènes ou anticorps) est associé à une sorte de marqueur pouvant être facilement détecté. Les fluorochromes (RIF), les enzymes (ELISA), les radio-isotopes (RIA) et les composés denses aux électrons (IEM) sont utilisés comme marqueurs.

Le test immuno-enzymatique (ELISA), comme d'autres tests immunitaires, est utilisé : 1) pour détecter un antigène inconnu à l'aide d'anticorps connus ou 2) pour détecter des anticorps dans le sérum sanguin à l'aide d'un antigène connu. La particularité de la réaction est qu'un ingrédient réactionnel connu est combiné avec une enzyme (par exemple la peroxydase). La présence de l'enzyme est déterminée à l'aide d'un substrat qui se colore lorsque l'enzyme agit. Le plus largement utilisé est l’ELISA en phase solide.

1) Détection d'antigène. La première étape est l'adsorption d'anticorps spécifiques sur la phase solide, qui est utilisée comme surface en polystyrène ou en polychlorure de vinyle des puits des panneaux en plastique. La deuxième étape est l’ajout du matériel de test, dans lequel la présence d’antigène est supposée. L'antigène se lie aux anticorps. Après cela, les puits sont lavés. La troisième étape est l'ajout d'un sérum spécifique contenant des anticorps contre un antigène donné, marqué par une enzyme. Les anticorps marqués sont attachés aux antigènes et l’excès est éliminé par lavage. Ainsi, si le matériel de test contient des antigènes, un complexe anticorps-antigène-anticorps marqué avec une enzyme se forme à la surface de la phase solide. Pour détecter l'enzyme, un substrat est ajouté. Pour la peroxydase, le substrat est de l'orthophénylènediamine mélangée à H 2 O 2 dans une solution tampon. Sous l'action de l'enzyme, il se forme des produits de couleur brune.

2) Détection des anticorps. La première étape est l’adsorption d’antigènes spécifiques sur les parois des puits. Généralement, dans les systèmes de tests commerciaux, les antigènes sont déjà adsorbés à la surface des puits. La deuxième étape est l’ajout du sérum test. En présence d’anticorps, un complexe antigène-anticorps se forme. La troisième étape - après le lavage, des anticorps antiglobulines (anticorps contre les globulines humaines), marqués avec une enzyme, sont ajoutés aux puits. Les résultats de la réaction sont évalués comme décrit ci-dessus.

Des échantillons manifestement positifs et manifestement négatifs, disponibles dans les systèmes commerciaux, sont utilisés comme contrôles.

L'ELISA est utilisé pour diagnostiquer de nombreuses maladies infectieuses, notamment l'infection par le VIH et l'hépatite virale.

L'immunotransfert est un type d'ELISA (une combinaison d'électrophorèse et d'ELISA). Les biopolymères, tels que les antigènes du virus de l'immunodéficience humaine, sont séparés par électrophorèse sur gel. Ensuite, les molécules séparées sont transférées à la surface de la nitrocellulose dans le même ordre dans lequel elles se trouvaient dans le gel. Le processus de transfert est appelé transfert et l'impression résultante est un transfert. Cette empreinte est affectée par le sérum testé. On ajoute ensuite du sérum anti-globuline humaine marqué à la peroxydase, puis le substrat qui devient brun sous l'action de l'enzyme. Des stries brunes se forment aux endroits où les anticorps se sont combinés avec les antigènes. La méthode vous permet de détecter des anticorps dirigés contre des antigènes viraux individuels.

Dosage radio-immunologique (RIA). La méthode vous permet de déterminer la quantité d'antigène dans l'échantillon testé. Tout d'abord, un matériau contenant vraisemblablement un antigène est ajouté au sérum immun, puis un antigène connu marqué avec un radio-isotope, par exemple I 125, est ajouté. En conséquence, l’antigène détectable (non marqué) et marqué connu se lie à une quantité limitée d’anticorps. Étant donné que l'antigène marqué est ajouté à une certaine dose, il est possible de déterminer quelle partie est liée aux anticorps et quelle partie est restée libre en raison de la compétition avec l'antigène non marqué et a été éliminée. La quantité d'antigène marqué lié aux anticorps est déterminée à l'aide d'un compteur. Elle est inversement proportionnelle à la quantité d’antigène détectée.

Microscopie immunoélectronique (IEM). Un antigène, par exemple un virus de la grippe, est attaché à un antisérum spécifique marqué avec une substance dense aux électrons. Des protéines contenant des métaux (ferritine, hémocyanine) ou de l'or colloïdal sont utilisés comme marqueurs. Au cours de la microscopie, des photographies sont prises au microscope électronique dans lesquelles des virions de la grippe sont visibles avec des points sombres qui leur sont attachés - des molécules d'anticorps marqués.

L'immunité acquise, sa différence avec l'héréditaire (spécifique, innée). Types d'immunité acquise.

Tâche. Valéry, l'enfant de trois ans de la famille, est tombé malade de la diphtérie. Les autres membres de la famille ne sont pas tombés malades, la mère a souffert de diphtérie dans son enfance et le père a été vacciné avec l'anatoxine diphtérique. La sœur aînée Natasha, âgée de cinq ans, n'a pas été vaccinée contre l'anatoxine diphtérique à un moment donné en raison de contre-indications médicales, elle a donc dû subir une prophylaxie d'urgence à l'aide d'un sérum antitoxique antidiphtérique. Le frère cadet, Vitaly, âgé de trois mois, n'est pas tombé malade, bien qu'il n'ait été vacciné de rien. Il y a un chat et un chien dans la maison, ils ne sont pas malades. Pour chaque membre de la famille et pour les animaux, nommez le type d’immunité qui les a empêchés de tomber malade.

Qu'est-ce qu'un antigène ? Quelles substances peuvent être des antigènes ? Antigènes et haptènes à part entière, en quoi diffèrent-ils les uns des autres ? Structure de l'antigène. Quel est le nom de la partie de la molécule d’antigène qui détermine sa spécificité ? Nommez les antigènes que vous connaissez. Que sont les autoantigènes ? Structure antigénique d'une cellule microbienne. Antigènes flagellaires et somatiques ; localisation, lettre de désignation, nature chimique, relation avec la température, méthode de préparation, application pratique. Anatoxine, ses propriétés, application, production. Quel tissu constitue le système immunitaire du corps ? Indiquez les organes centraux et périphériques du système immunitaire humain. Décrire le processus de formation des réponses immunitaires humorales et cellulaires. Préciser les cellules qui capturent et digèrent l'antigène ; les cellules qui interagissent dans la formation de l'immunité humorale, l'immunité cellulaire ; des cellules qui se transforment et deviennent des plasmocytes qui produisent des anticorps ; les cellules qui stimulent ce processus ; des cellules qui suppriment la réponse immunitaire ; cellules qui tuent les cellules tumorales et les cellules infectées par un virus. Que sont les anticorps ? Comment obtenir du sérum immunitaire ? Comment obtenir un sérum qui neutraliserait la toxine tétanique ? Contre quels antigènes se forment les antitoxines, les agglutinines et les hémolysines ? Quels anticorps se forment lorsque l’anatoxine diphtérique est introduite dans l’organisme ? une bactérie diphtérique ? Nature chimique et structure des anticorps. Quel est le site actif des immunoglobulines ? Énumérez les classes d’immunoglobulines et leurs propriétés. Indiquez la classe d'immunoglobulines pouvant pénétrer dans le placenta. À quelle classe appartiennent les immunoglobulines sécrétoires ? Dynamique de l'accumulation d'anticorps. En quoi une réponse immunitaire secondaire diffère-t-elle d’une réponse primaire ? Comment les connaissances sur la dynamique de la réponse immunitaire sont-elles utilisées en médecine pratique ? Que sont les réactions immunitaires, quel est leur mécanisme, les phases de la réaction. Dans quelles 2 directions les réactions immunitaires sont-elles utilisées ? Énumérez les réactions immunitaires.

Tâche. Remplacez les mots manquants par « anatoxine » ou « antitoxine » : _________ est un antigène, _________ est un anticorps, __________ crée une immunité active lorsqu'il est introduit dans l'organisme, __________ crée une immunité passive lorsqu'il est introduit dans l'organisme, __________ est obtenu en immunisant des animaux, ___________ est obtenu à partir d'une toxine lorsqu'elle est exposée au formol et à la chaleur, ___________ neutralise les toxines, __________ provoque la formation d'anticorps dans le corps.

Réaction d'agglutination : qu'est-ce que l'agglutination, qu'est-ce qu'un antigène, qu'est-ce qu'un anticorps ; méthodes de réglage, quels contrôles sont définis et pourquoi ; à quoi devraient ressembler les contrôles. Sérums agglutinants, ce qu'ils contiennent, comment ils sont obtenus, à quoi servent-ils ; Quel est le titre du sérum agglutinant ? Réaction d'hémagglutination indirecte (passive) : qu'est-ce qui sert d'antigène dans cette réaction, comment il est obtenu, le mécanisme de la réaction. Qu'est-ce qu'un diagnostic érythrocytaire ? Qu'est-ce qu'un diagnostic d'anticorps érythrocytaires ? Réactions de précipitation : qu'est-ce que la précipitation, qu'est-ce qui sert d'antigène ; Comment obtenir du sérum précipitant ? Quel est le titre du sérum précipitant ? Méthodes de réglage, application pratique.

Réaction de fixation du complément (CFR) : principe du CFR ; ce qui se forme lorsque le sérum immunitaire interagit avec un antigène spécifique ; qu'arrive-t-il au complément s'il est présent lors de cette interaction ? Quel est le sort du complément s’il n’y a pas d’affinité spécifique entre l’antigène et les anticorps ? Si le résultat final de la RSC est une hémolyse, cela signifie-t-il un résultat positif ou négatif ? Méthodologie de mise en place du RSC. Pourquoi le sérum de test doit-il être inactivé ? Sérum hémolytique : que contient-il, comment est-il obtenu, quel est le titre et comment est-il déterminé ? Complément : nature chimique, rapport à la haute température, où le trouve-t-on ? Comment le complément peut-il être détruit ? Qu'est-ce qui est utilisé pratiquement comme complément ?

Tâche. Une tache de sang a été découverte sur les vêtements d'un homme accusé de meurtre. Quelle réaction peut être utilisée pour déterminer s’il s’agit de sang humain ? que seront les antigènes dans cette réaction et que seront les anticorps ; Quel médicament de diagnostic doit être disponible en laboratoire pour cette réaction, comment est-il préparé ?

Tâche. Comment utiliser la réaction de précipitation pour déterminer si un échantillon de viande livré pour analyse est de la viande de bovin ou de cheval ; quels médicaments de diagnostic sont nécessaires ?

Réaction de précipitation en gel d'agar, méthodes de formulation, application pratique.

Que révèle une prise de sang sérologique ?

Que révèle une prise de sang sérologique ? Les mesures diagnostiques constituent l’étape la plus importante du traitement de toute maladie. Le succès du traitement dépend non seulement des médicaments prescrits, mais aussi en grande partie de l'exactitude du diagnostic.

De plus, le diagnostic permet de prévenir les complications et les maladies concomitantes. Grâce à un test sérologique du sang du patient, la présence d'anticorps et d'antigènes est détectée. L'étude permet de détecter de nombreuses maladies, de déterminer leur phase et de suivre l'évolution du traitement.

Qu'est-ce que la sérologie ?

La sérologie est la branche de l'immunologie qui étudie les réactions des antigènes aux anticorps. Cette branche de la médecine s'occupe de l'étude du plasma sanguin et de ses caractéristiques immunologiques.

Aujourd'hui, un test sanguin sérologique pour la recherche d'anticorps constitue un moyen fiable de détecter le virus de l'immunodéficience humaine, l'hépatite, la brucellose, les MST et d'autres maladies potentiellement mortelles. Voyons dans quels cas il est prescrit.

Indications pour l'utilisation

Un test sanguin sérologique est nécessaire pour identifier l'agent causal de la maladie s'il est difficile de poser un diagnostic.

Pour réaliser cette réaction, des antigènes d'agents pathogènes sont introduits dans le plasma, puis le processus en cours est étudié par un assistant de laboratoire. Ou bien ils effectuent la réaction inverse : des anticorps sont injectés dans le sang infecté pour déterminer l’identité spécifique de l’agent pathogène.

Champ d'application

Cette recherche est utilisée dans diverses branches de la médecine. Cette réaction identifie des cellules et des anticorps spécifiques produits par l’organisme pour combattre les infections et les virus.

De plus, le groupe sanguin d’une personne est déterminé à l’aide de la méthode sérologique.

Un test sanguin sérologique similaire est utilisé en gynécologie pour diagnostiquer les maladies sexuellement transmissibles. Cette méthode est également utilisée pour les examens complets des femmes enceintes (détection de la toxoplasmose, du VIH, de la syphilis, etc.). La réussite de ce test est obligatoire lors de l'inscription dans une clinique prénatale.

Chez l'enfant, une réaction sérologique permet de confirmer le diagnostic de maladies dites « infantiles » (varicelle, rougeole, rubéole, etc.) si les symptômes n'ont pas de manifestations prononcées et qu'il est impossible d'identifier la maladie par l'analyse des indications cliniques. .

Détection des maladies sexuellement transmissibles

Pour les vénéréologues, ce test est véritablement irremplaçable et permet de poser un diagnostic très précis.

Avec un tableau clinique flou, un test sanguin sérologique pour la syphilis, la giardiase, l'uréeplasmose, la chlamydia, l'herpès et d'autres maladies peuvent détecter rapidement la présence d'anticorps.

Maladies virales et infectieuses

L'analyse sérologique est activement utilisée par les gastro-entérologues, les hépatologues et les spécialistes des maladies infectieuses pour diagnostiquer l'hépatite virale.

Le décryptage d'une prise de sang sérologique permet de déterminer le stade de la maladie et de répondre à la question de savoir dans quelle mesure une hospitalisation est actuellement nécessaire. Comment bien se préparer ?

Préparation à l'examen

Des tests sanguins sérologiques sont effectués dans les cliniques publiques et commerciales. La préférence doit être donnée à un laboratoire doté d'équipements modernes et de personnel qualifié.

Les échantillons biologiques à tester peuvent être de la salive et des selles, mais dans la plupart des cas, le sang veineux du patient est utilisé. Le sang destiné à un test sérologique est prélevé dans la veine cubitale en laboratoire. Avant de passer le test, vous devriez consulter votre médecin pour vous préparer à cette procédure.

Pour préparer un test sérologique, vous devez suivre quelques règles simples.

Le sang est donné dans un état calme avant les repas, c'est-à-dire à jeun. Avant cela, vous ne devez pas subir d'autres tests, tels que des radiographies, des échographies, etc.

Il est nécessaire d’éviter de prendre des antibactériens et certains autres médicaments plusieurs semaines avant de donner du sang. Certaines recommandations dans ce cas dépendent de la maladie pour laquelle le test est effectué. Par exemple, un test d’hépatite consiste à éliminer les aliments gras et l’alcool 48 heures avant l’intervention.

Réaction de fluorescence

Parmi les types de réactions sérologiques, il existe une réaction de fluorescence. Cette technique utilise un réactif qui illumine les anticorps présents dans le sérum sanguin.

La mise en place d'une réaction sérologique directe consiste à marquer des anticorps spécifiques avec une substance fluorescente. Cette réaction est la plus rapide et s’effectue en une seule étape.

Une autre option pour effectuer une telle analyse est appelée indirecte ou RNIF. Elle s'effectue en deux étapes. Dans la première étape, les anticorps ne sont pas marqués avec des étiquettes fluorescentes, et dans la seconde, des anticorps correctement marqués sont utilisés pour identifier les antigènes et les anticorps. La lueur ne se produit qu’après la liaison à un anticorps spécifique.

Que révèle une prise de sang sérologique ? Le résultat de l'ensemble de la procédure est évalué par un appareil spécial qui analyse la force du rayonnement et révèle la forme et la taille de l'objet étudié. Les agents responsables des maladies infectieuses sont détectés avec un résultat dont la fiabilité est de %, en fonction du type et du stade de la pathologie.

Test immunosorbant lié

Ces types de tests sérologiques utilisent des réactifs uniques et stables. Les substances marquées semblent adhérer aux anticorps souhaités. En conséquence, nous obtenons un résultat qualitatif ou quantitatif.

Si aucun marqueur prononcé n’est trouvé, le résultat sera considéré comme négatif. Si la présence d'anticorps dans des échantillons biologiques est détectée lors d'une étude qualitative, alors le résultat du test est considéré comme positif. En quantifiant les cellules, l'analyse donne un résultat plus précis.

En analysant les indicateurs d'analyse (par exemple la somme des cellules identifiées), le spécialiste détermine si la maladie est au stade initial, au stade aigu, ou si la forme chronique de la pathologie s'est aggravée. Afin de poser un diagnostic, le médecin prend en compte non seulement les données d'une étude sérologique, mais également le tableau clinique de la maladie.

Caractéristiques de ce test

La réalisation de cette analyse n'est pas toujours en mesure de garantir à 100 % qu'une certaine maladie a été détectée. Il arrive que les résultats soient ambigus et que d'autres procédures soient nécessaires.

Par exemple, lors d'un test de dépistage de la brucellose, l'autorétention du sérum sanguin sans antigène est contrôlée. Cela augmente considérablement la fiabilité des tests. Un test de dépistage de la brucellose peut être positif ou négatif et peut également susciter des doutes.

Si vous recevez des résultats douteux qui n'ont pas d'interprétation univoque, il est recommandé de refaire le test. De plus, la brucellose peut être détectée par des hémocultures, un examen de la moelle osseuse et du liquide céphalo-rachidien.

Avantages d'un test sanguin sérologique

Les techniques de diagnostic utilisant des réactions sérologiques sont largement utilisées dans la pratique médicale moderne. Ceci est particulièrement souvent fait lors de la détermination de pathologies virales et infectieuses.

Les mêmes tests sont utilisés lors du dépistage géographique et de l’examen médical pour prévenir la propagation épidémiologique de l’infection.

Les avantages de la méthode incluent :

• Haut niveau de confiance.
• Réaction et résultats rapides. Les résultats du RSC sont connus sous 24 heures. Dans une situation particulière, en milieu hospitalier, l'analyse sera prête en quelques heures.
• Surveiller l'évolution de la maladie et l'efficacité de la thérapie.
• Faible coût et accessibilité pour les patients.

Inconvénients de la méthode

Cependant, les études sérologiques ont aussi leurs inconvénients.

Il s'agit notamment du fait que lors d'une analyse, la période d'incubation de la maladie doit être prise en compte afin d'obtenir une image plus fiable.

Par exemple, la détermination de l'herpès simplex de type 1 ou 2 n'est possible que 14 jours après l'infection. Une analyse de la présence du virus de l'immunodéficience est réalisée 30 jours, 90 jours et six mois après le contact avec une personne infectée.

Bien entendu, la fiabilité des résultats peut également être influencée par le facteur humain : négligence des règles de préparation au prélèvement sanguin ou erreur commise par le laborantin lors de la réalisation de la réaction.

Selon les statistiques, un résultat erroné peut être obtenu dans 5 % des cas. Un médecin expérimenté, lors de l'examen d'un patient, après avoir étudié le tableau clinique, peut dans la plupart des cas calculer l'erreur commise.

Quels tests sanguins sont effectués pour la syphilis : RW, RPGA, ELISA, VDRL, RPR, RIBT, interprétation des résultats des tests

La syphilis est une maladie infectieuse causée par le spirochète Treponema pallidum, sujette à une évolution chronique progressive, avec une périodisation claire des symptômes cliniques.

La prédominance de la transmission sexuelle sur la transmission par contact et transplacentaire place cette maladie parmi les maladies sexuellement transmissibles (MST, IST). En plus de ces modes de transmission de l'infection, la voie artificielle joue un rôle particulier (du latin « artificio » - créé artificiellement).

Il est typique des établissements médicaux, principalement mis en œuvre en milieu hospitalier. L'infection survient lors de transfusions sanguines, de diverses opérations chirurgicales et de méthodes de diagnostic invasives.

Malgré la quarantaine des dons de sang, le problème de l'identification de la syphilis chez les donneurs à différents stades de la maladie reste d'actualité.

Par conséquent, les mesures de diagnostic de la syphilis nécessitent une standardisation, l'introduction de nouvelles méthodes d'identification sensibles et informatives, ainsi que la minimisation des erreurs et de l'interprétation incorrecte des résultats des tests.

Classification des méthodes de diagnostic de laboratoire

Le diagnostic de la syphilis présente certaines caractéristiques et diffère du diagnostic d'autres infections bactériennes. La structure complexe et les propriétés antigéniques de Treponema pallidum provoquent des erreurs dans l'interprétation des résultats des réactions sérologiques.

Il existe 3 groupes principaux de patients à qui on propose un test sanguin pour la syphilis :

1. 1 Dépistage et examen médical des groupes de population (y compris grossesse, inscription à la clinique prénatale, emploi et enregistrement d'un dossier médical, etc.).
2. 2 Dépistage dans les groupes à risque (rapports sexuels non protégés avec une personne infectée par la syphilis, personnes après contact sexuel forcé, personnes infectées par le VIH, etc.).
3. 3 Personnes présentant des symptômes de la maladie ou personnes suspectées d'avoir une infection syphilitique.

Toutes les méthodes de laboratoire sont classiquement divisées en méthodes directes et indirectes.

Méthodes directes

1. 1 Identification de Treponema pallidum en fond sombre (microscopie en fond noir).
2. 2 Infection d'animaux de laboratoire (élevage sur animaux de laboratoire).
3. 3 PCR (réaction en chaîne par polymérase).
4. 4 Sonde ADN ou hybridation d'acide nucléique.

Méthodes indirectes

Les réactions sérologiques sont des méthodes de diagnostic en laboratoire basées sur la détection d'anticorps (en abrégé AT) dirigés contre les antigènes de Treponema pallidum (en abrégé AG). Ils sont primordiaux pour confirmer le diagnostic.

1. 1 Tests non tréponémiques :
   • Réaction de Wasserman (WRS) ;
   • Réaction de microprécipitation (MR, RMP) et ses analogues, qui sont donnés ci-dessous ;
   • Test rapide à la réaction plasmatique (RPR, RPR) ;
   • Test sérique de toluidine rouge (TRUST) ;
   • Test non tréponémique du Laboratoire de Recherche sur les Maladies Vénériennes - VDRL.
2. 2 tests tréponémiques :
   • Méthode d'immobilisation de Treponema pallidum - RIBT/RIT ;
   • Solution d'immunofluorescence - RIF, FTA (dilutions sériques RIF-10, RIF-200, RIF-abs) ;
   • R-tion d'hémagglutination passive (RPGA, TRPGA, TPHA) ;
   • Dosage immunoenzymatique (ELISA, EIA);
   • Immunoblot.

Figure 1 - Algorithme de sérodiagnostic de la syphilis

Méthodes histomorphologiques

Ces méthodes se résument à identifier les caractéristiques de l'histomorphologie des manifestations syphilitiques. L'attention est portée aux subtilités de la structure du chancre. Cependant, le diagnostic différentiel de l’infection par l’histologie est très difficile. L'histomorphologie est utilisée avec d'autres tests de laboratoire et cliniques.

Microscopie à fond sombre de Treponema pallidum

Cette méthode est basée sur la détection directe du tréponème pallidum dans le matériau de test à l'aide d'un microscope et de dispositifs spéciaux (le plus souvent des écoulements provenant d'érosions et d'ulcères, moins souvent du liquide céphalo-rachidien et d'autres substrats).

Par scarification, grattage, pressage, l'exsudat est obtenu à partir des érosions et des défauts ulcéreux, puis la préparation préparée est examinée au microscope.

Généralement, le tréponème pallidum est détecté dans une préparation obtenue à partir de chancre, de foyers de syphilis secondaire fraîche et récurrente secondaire, ainsi que de points ponctués de ganglions lymphatiques et de placenta.

Basée sur le phénomène de petites particules brillant dans un champ sombre lorsqu'elles sont frappées par un faisceau lumineux (phénomène de Tyndall), la méthode permet parfaitement de différencier l'agent causal de la syphilis des autres tréponèmes en fonction des différences morphologiques et des différences dans les modes de déplacement du bactérie.

Pour la microscopie, un condenseur spécial à fond noir de résolution optique appropriée est utilisé. Le médicament est obtenu par la méthode des gouttes écrasées (une goutte de matériau est appliquée sur une lame de verre propre et sans graisse et recouverte d'une lamelle très fine).

L'huile d'immersion est versée sur le verre de protection. En tournant le tube et en tournant la loupe, l'éclairage souhaité est réglé.

Dans le champ sombre du microscope, des cellules sanguines, des cellules épithéliales et l'agent causal de la syphilis sont détectés. Treponema pallidum ressemble à une spirale, très fine, émettant une couleur argentée, aux mouvements fluides.

Figure 2 - Microscopie à fond noir comme moyen de visualiser Treponema pallidum dans le matériau étudié. Source de l'illustration - CDC

Treponema pallidum doit être distingué des autres tréponèmes, dont Tr. refringens, que l'on retrouve dans l'oropharynx et sur la membrane muqueuse des organes génitaux. Cette bactérie effectue des mouvements chaotiques, présente des boucles larges et asymétriques, plutôt rugueuses. De plus, Treponema pallidum se distingue du Tr. Microdentium, Tr. Buccalis et Tr. Vincenti.

La visualisation des bactéries en fond sombre est parfois complétée par une réaction de fluorescence. À cette fin, des anticorps antitréponémiques marqués avec un colorant fluorescent sont ajoutés au matériel natif. Dans ce cas, il se forme un complexe appelé antigène-anticorps (en abrégé AG-AT), qui fait l'objet d'une étude au microscope à fluorescence.

Méthode de réaction en chaîne par polymérase (PCR)

La PCR, développée en 1991 pour détecter la molécule d'acide désoxyribonucléique (ADN) de Treponema pallidum, est très sensible et spécifique, permettant la détection de fragments d'ADN de l'agent pathogène.

Cette analyse est basée sur la copie de courtes sections d’ADN du spirochète pâle, qui répond aux paramètres spécifiés et est présent dans l’échantillon. Tout cela est réalisé dans des conditions artificielles (in vitro). La réaction est effectuée dans un appareil - un thermocycleur, qui assure la périodisation des cycles de température. Le refroidissement se produit suivi d'un chauffage des tubes à essai avec une erreur de 0,1˚C.

La matrice d'ADN est chauffée pendant 2 minutes à une température de 92 à 98 °C (la température maximale est utilisée si la polymérase est thermostable). Lorsqu’ils sont chauffés, les brins d’ADN se séparent en raison de la rupture des liaisons hydrogène entre eux. Lors de l'étape d'hybridation, la température de réaction est réduite pour lier l'amorce à la matrice simple brin.

Le recuit prend environ 30 secondes, pendant lesquelles des centaines de nucléotides sont synthétisées. Les molécules nouvellement synthétisées sont copiées par la polymérase, ce qui permet de multiplier des fragments spécifiques d'acide désoxyribonucléique. La détection ultérieure des fragments est effectuée par électrophorèse sur gel d'agar.

Le diagnostic PCR de la syphilis est encore de nature expérimentale, mais est justifié lors de la détection d'une infection congénitale, dans des cas de diagnostic complexes ou lorsque la teneur en Treponema pallidum est minime dans le matériel de test.

Hybridation d'ADN

L'hybridation de l'ADN est réalisée in vitro et repose sur la jonction complète ou partielle de deux molécules d'ADN simple brin en une seule molécule. En cas de correspondance complète de fragments complémentaires, la fusion se fait facilement. Si la correspondance complémentaire est partielle, la jonction des brins d’ADN se produit lentement. En fonction du temps de fusion des chaînes, le degré de complémentarité peut être évalué.

Lorsque l’ADN est chauffé dans une solution tampon, les liaisons hydrogène sont rompues par des bases azotées complémentaires, provoquant la divergence des chaînes d’ADN. Ensuite, un médicament est obtenu à partir de deux acides désoxyribonucléiques dénaturés. Une fois refroidies, les régions simple brin se renaturent. Un soi-disant hybride d’ADN se forme.

La méthode permet d'estimer et d'analyser le taux d'hybridation, en tenant compte des caractéristiques (similitudes et différences) de l'ADN entre espèces ou au sein d'une espèce.

L'utilisation d'une sonde ADN implique l'hybridation d'un fragment d'ADN marqué avec une région d'ADN spécifique pour identifier des séquences nucléotidiques complémentaires. Un groupe d'atomes insaturés (chromophores) ou d'isotopes radioactifs sont utilisés pour marquer la sonde.

La sonde ADN est utilisée pour la détection hétérogène et homogène des acides nucléiques. Le rôle de la sonde est d'identifier les zones où la fusion cible-sonde s'est produite. La détection dans un système homogène présente l'avantage de permettre de suivre l'hybridation des molécules d'ADN en temps réel.

L'essence de la méthode est la dénaturation et la renaturation de l'ADN (réunification des chaînes d'ADN). Le processus de renaturation de l'acide nucléique et de la sonde ADN se termine par la formation d'un « hybride ».

Des séquences d'acide nucléique spécifiques s'hybrident avec la sonde ADN et sont ainsi détectées et permettent d'estimer la quantité d'ADN dans le matériel étudié.

Infection des animaux de laboratoire

La haute sensibilité des lapins à Treponema pallidum (environ 99,9 %) permet de les utiliser dans le diagnostic de l'infection syphilitique.

L'infection des lapins est réalisée dans des centres de recherche et constitue la « référence » pour évaluer la sensibilité d'autres méthodes.

Revenons aux tests tréponémiques et non tréponémiques, puisqu'ils sont les plus souvent utilisés. Considérons leurs avantages et inconvénients, ainsi que les erreurs d'interprétation des résultats.

Tests non tréponémiques

Il s'agit de tests permettant de déterminer les anticorps IgG et IgM dirigés contre un antigène cardiolipine standardisé. Leur inconvénient majeur est leur spécificité relativement faible.

Leur faible coût et leur facilité de mise en œuvre permettent de classer ces tests parmi les tests de diagnostic nécessaires à l'établissement d'un diagnostic préliminaire et au dépistage auprès de la population.

Il s'agit de tests non tréponémiques qui sont effectués lors de la demande d'un dossier médical, de la candidature à un emploi ou de l'inscription dans une clinique prénatale.

1. 1 Sensibilité minimale au stade de la syphilis primaire – 70 % ;
2. 2 Sensibilité minimale au stade de la syphilis tardive – 30 % ;
3. 3 Possibilité de résultats faussement négatifs et faussement positifs ;
4. 4 Intensité de travail de l'exécution du RSK.

1. 1 Coût de production des tests relativement faible ;
2. 2 Recevez une réponse rapide ;
3. 3 Possibilité de leur utilisation pour le dépistage.

L’obtention d’échantillons faussement positifs ou faiblement positifs est possible dans les cas suivants :

1. 1 Violation de la technologie d'exécution lors du blocage du complexe AG-AT.
2. 2 Le patient souffre de maladies auto-immunes (polyarthrite rhumatoïde, rhumatismes, sclérodermie, lupus érythémateux disséminé, sarcoïdose, etc.).
3. 3 Tumeurs malignes.
4. 4 Infections virales et bactériennes.
5. 5 Maladies endocriniennes (thyroïdite auto-immune, diabète sucré).
6. 6 Grossesse.
7. 7 Boire de l'alcool.
8. 8 Manger des aliments gras.
9. 9 Âge sénile.

Comme vous pouvez le voir dans la liste, il existe de nombreuses raisons pour lesquelles un résultat incorrect est obtenu. Il faut donc s’en méfier beaucoup. Considérons deux autres exemples avec RSC. Il s'agit d'une réaction de microprécipitation et de VDLR (sa modification).

Réaction de fixation du complément (RSK, Wasserman, RW)

Il s'agit d'un test basé sur la capacité du complément à se lier aux complexes AG-AT. Le complexe formé est identifié grâce au système hémolytique. L'antigène cardiolipine augmente considérablement la sensibilité du test.

La réaction de Kolmer est également sensible, qui consiste à la réaliser dans différentes conditions de température. Ainsi, la première phase de la réaction de Kolmer se déroule à une température de 20 °C pendant une demi-heure, la deuxième phase à une température de 4 à 8 °C pendant 20 heures. Pendant ce temps, la fixation du complément se produit.

Lors de l’exécution du RSC, il est possible d’obtenir des résultats spectaculairement positifs. La raison en est probablement un titre élevé d’anticorps dans le sérum non dilué. Dans ce cas, les échantillons sont administrés à des doses décroissantes.

Pour différencier les stades de la syphilis et évaluer l'efficacité du traitement antisyphilitique, la quantité d'AT dans le sérum est déterminée.

La positivité de l'échantillon est appréciée par croisements, et la dilution du sérum est également indiquée dans les réactions de Wasserman, Kolmer et Kann.

Réaction de microprécipitation

Étant donné que la complexité de la réalisation des tests ci-dessus est élevée, une méthode accélérée de sérodiagnostic de la syphilis, la méthode dite express - réaction de microprécipitation (en abrégé MR, RMP), a été développée pour couvrir l'étendue de l'examen clinique de différents groupes de population. .

Elle est réalisée avec de l'antigène cardiolipine et des substances auxiliaires. Son avantage est la collecte de sang périphérique pour la recherche. Cela accélère considérablement à la fois la technique elle-même et le travail des techniciens de laboratoire.

Figure 2 - Réaction de microprécipitation (schéma)

Pour réaliser l’IRM, il faut du plasma ou du sérum inactivé du sang du patient (ils contiennent des anticorps). Ensuite, le plasma est placé dans des puits marqués. Ensuite, une goutte d’antigène cardiolipine est ajoutée au matériel de test, mélangée et secouée. En conséquence, des flocons caractéristiques apparaissent dans le sérum de la personne infectée, d’intensité variable.

Il s'agit d'un échantillon de qualité. Pour l'évaluation quantitative, 10 dilutions de sérum sont utilisées, placées dans 10 puits avec un étiquetage approprié. Avec l'IRM qualitative, la réponse est indiquée sous forme de croix (plus) ou moins ; avec l'IRM quantitative, le titre d'anticorps est indiqué (1 :2, 1 :4, etc.).

La présence de flocons est considérée comme une réponse positive ou faiblement positive. L'apparition de floculats est possible même en l'absence de maladie, c'est pourquoi l'évaluation finale du résultat obtenu est réalisée après une étude de contrôle ou d'autres réactions (RIBT, RIF, ELISA, RPGA).

La méthode recommandée par l'Organisation mondiale de la santé pour mettre en scène une réaction avec un antigène lipoïde (AG) est à juste titre considérée comme la meilleure parmi les autres tests non tréponémiques standard. Développé aux USA, Géorgie dans le laboratoire des maladies sexuellement transmissibles (Venereal Diseases Research Laboratories).

L'abréviation de l'institution a servi de nom à l'échantillon - VDRL. VDRL est une modification de MR. Le sérum d'un patient atteint de syphilis est inactivé et placé sur une lame de verre. L'antigène utilisé est constitué de cardiolipine, de cholestérol et de lécithine en pourcentages variables. La réponse est enregistrée presque immédiatement.

Une floculation distincte se produit en présence d'anticorps dans le sérum. Le sérum devient réactif après 4 semaines d'infection. Pour évaluer la quantité d'anticorps, le sérum est pré-dilué de manière exponentielle.

1. 1 sensibilité relativement élevée;
2. 2 spécificité relativement élevée;
3. 3 facilité de mise en œuvre ;
4. 4 faible coût des réactifs ;
5. 5 obtenir une réponse rapide.

Un inconvénient du VDRL est son taux de faux positifs relativement élevé.

Leurs causes sont les mêmes maladies énumérées ci-dessus.

Les tests tréponémiques sont réalisés avec des antigènes spécifiques de Treponema pallidum. Ils sont nécessaires et obligatoires pour établir un diagnostic définitif. Il s'agit de la réaction d'immunofluorescence (RIF), de la réaction d'hémagglutination indirecte (IPHA), du test immuno-enzymatique (ELISA), etc.

Après un résultat positif d'un test non tréponémique (RPR, MP, VDRL), des tests tréponémiques doivent toujours être effectués (généralement une combinaison - RPHA, ELISA, RIF).

Les tests tréponémiques sont plus complexes à réaliser que les tests rapides et nécessitent plus d’argent.

Cette réaction (en abrégé RIF) est utilisée pour diagnostiquer la syphilis, y compris les formes latentes, et pour revérifier les échantillons positifs et faussement positifs.

Le RIF est basé sur la lueur des anticorps marqués lorsqu’ils sont combinés à un complexe antigène-anticorps sous une lampe à quartz. La méthode a commencé à être utilisée dans les années 60 et s'est distinguée par sa facilité de mise en œuvre et sa haute spécificité (légèrement inférieure au RIBT).

Il comporte plusieurs modifications : RIF-10, RIF-200 et RIF-abs.

Le RIF est plus sensible lorsqu'il est dilué 10 fois, et le reste est plus spécifique. Le RIF se déroule en deux phases. Le sérum sanguin du patient est ajouté à l'AG. Un complexe AG-AT est formé, qui est étudié dans la phase suivante. Ensuite, le complexe marqué au fluorochrome est identifié par microscopie. Si aucune lueur n'est observée, cela indique l'absence d'anticorps spécifiques dans le sérum sanguin.

Le RIF-200 est la plus précieuse de toutes les dilutions. La méthode est destinée au diagnostic de diverses formes de syphilis, en particulier la syphilis latente, et au recontrôle des échantillons positifs.

La réaction d'immobilisation de Treponema pallidum (en abrégé RIBT, RIT) fait partie des tests sérologiques complexes qui nécessitent des efforts et des coûts financiers importants. Le RIBT est de moins en moins utilisé, mais sa pertinence reste dans le diagnostic de la syphilis latente.

Elle est d'une grande importance pour reconnaître les résultats faussement positifs chez les femmes enceintes et repose sur l'immobilisation des bactéries en présence d'immobilisines - anticorps tardifs.

Le résultat est évalué en fonction du pourcentage (%) de tréponèmes immobilisés à l'aide d'un tableau spécial :

1. 1 De 0 à 20 - test négatif.
2. 2 De 21 à 50 - test faiblement positif.
3. 3 Sur 50 réactions positives supplémentaires.

Des résultats faussement positifs sont également possibles lors de l’utilisation de RIBT. Ainsi, une réponse incorrecte est possible en cas d'infection par des trépanématases tropicales, ainsi qu'en cas de tuberculose, de cirrhose du foie, de sarcoïdose et de patients âgés.

Ce test sanguin pour la syphilis est appelé test d'hémagglutination passive (en abrégé test sanguin pour RPHA, THRHA).

L'antigène du RPHA est préparé à partir d'hématies de mouton recouvertes de fragments de Treponema pallidum (obtenus à partir de lapins infectés (voir Figure 4)). L'analyse utilise le sang veineux (plasma ou sérum inactivé) du patient.

Lorsqu'un antigène est ajouté au sérum d'un patient atteint de syphilis, un complexe AG-AT se forme, ce qui conduit à l'agglutination des globules rouges. l'agglutination est déterminée subjectivement par un technicien de laboratoire.

Figure 3 - Schéma du RPHA (réaction d'hémagglutination passive)

L'échantillon est évalué comme positif lorsque des agglutinats de couleur rose uniforme apparaissent. La coloration rouge du précipité indique une précipitation des globules rouges. La RPHA est très sensible et très spécifique.

Réaction de microhémagglutination

Il s'agit d'une version simplifiée du RPGA. Diffère du test décrit ci-dessus en ce sens qu'il nécessite moins d'antigène, de diluant et de sérum pour effectuer la réaction. 4 heures après l'incubation du sérum, l'échantillon peut être évalué. Utilisé pour le dépistage et les examens de masse de la syphilis.

Test immunosorbant lié

Le test immuno-enzymatique (ELISA en abrégé) est basé sur une réaction antigène-anticorps spécifique. Du matériel biologique (sérum sanguin du patient, liquide céphalo-rachidien) est introduit dans des puits à la surface solide desquels sont fixés les antigènes du tréponème pallidum. Le matériel de test est incubé, puis les anticorps qui ne se sont pas liés aux antigènes sont éliminés par lavage (voir Figure 5).

L'identification du complexe résultant est réalisée au stade de la fermentation à l'aide d'immunsérum marqué avec l'enzyme. Lors d’une réaction chimique, l’enzyme colore les complexes résultants. L’intensité de la coloration dépend de la quantité d’anticorps spécifiques dans le sang du patient et est enregistrée par un spectrophotomètre.

Figure 4 - Schéma de l'ELISA (dosage immuno-enzymatique)

La sensibilité de l'ELISA est supérieure à 95 %. La méthode est utilisée en mode automatisé pour étudier des groupes de population électifs : donneurs, femmes enceintes et autres, afin de clarifier le diagnostic des tests non tréponémiques positifs et faussement positifs.

Immunoblot

L'immunotransfert est une méthode très sensible, une modification du simple ELISA. La réaction est basée sur l'électrophorèse avec séparation des antigènes de Treponema pallidum.

Les immunodéterminants séparés sont transférés sur papier nitrocellulose et développés par ELISA. Ensuite, le sérum est incubé et les anticorps non liés sont éliminés. Le matériel résultant est traité avec des immunoglobulines (IgM ou IgG) marquées avec une enzyme.

Évaluation clinique des résultats du diagnostic de laboratoire de la syphilis

Dans le tableau 1 ci-dessous, nous avons fourni les résultats de tests possibles et leur interprétation. Comme vous pouvez le constater dans le tableau, une évaluation complète des tests est primordiale lors du déchiffrement.

Tableau 1 - Interprétation des résultats des réactions sérologiques (analyses sanguines pour la syphilis). Pour voir, cliquez sur le tableau

La réactivité des tests est également évaluée à l’aide de « croisements » :

1. 1 La réponse maximale (test fortement positif) est indiquée par 4 croix.
2. 2 Un test positif est indiqué par 3 croix.
3. 3 Une réaction faiblement positive est indiquée par deux croix.
4. 4 Une croix indique un résultat douteux et négatif.
5. 5 Une réponse négative est signalée par un signe moins.

Le problème de l'optimisation du diagnostic de laboratoire de la syphilis n'a pas perdu de sa pertinence à ce jour. Les méthodes de diagnostic modernes, malgré le désir des scientifiques d'amener le diagnostic aux niveaux de sensibilité et de spécificité les plus élevés possibles, nécessitent des tests de contrôle et une approche individuelle.

Une caractéristique de l'infection syphilitique est le phénomène de sérorésistance, qui n'a jamais reçu d'explication scientifique. Le diagnostic est posé après un examen complet du patient utilisant des méthodes épidémiologiques, cliniques et de laboratoire.

Dans le contexte du développement économique et technique de la médecine, des progrès sont également observés dans le développement de nouveaux critères de diagnostic de la syphilis. Tout cela vous permettra de traiter les patients rapidement, avec succès et avec précision.

Recherche sérologique (tests)— les méthodes de recherche en laboratoire basées sur la détection d'anticorps ou d'antigènes dans le matériel biologique du patient. Le plus souvent, le sang est utilisé pour l'analyse, moins souvent - l'urine, la salive, les écoulements purulents ou les échantillons de tissus prélevés lors d'une biopsie.

Champ d'application

• Détermination du groupe sanguin.
• Identification de protéines tumorales spécifiques - marqueurs tumoraux (par exemple, si un cancer des ovaires, de la prostate, de la vessie, de l'estomac, etc. est suspecté).
• Diagnostic des infections virales, bactériennes, fongiques, protozoaires (VIH, syphilis, toxoplasmose, chlamydia, rubéole, herpès, helminthiases, encéphalite à tiques, etc.).
• Détermination des hormones, enzymes et médicaments contenus dans le biomatériau étudié en concentrations mineures (inférieures à 10−10 g/l).

L'essence de la méthode réside dans les tests sérologiques

Les tests sérologiques diffèrent par la technique utilisée, mais ils résultent tous de l’interaction d’antigènes (composés étrangers) avec les anticorps correspondants. L'étude comprend deux phases successives. La première phase est caractérisée par l'interaction entre antigènes et anticorps avec formation de complexes immuns (réaction positive). Dans un deuxième temps, apparaissent des signes extérieurs confirmant la présence de ces mêmes complexes (selon le type de réaction, il peut s'agir d'un trouble de la solution à tester, d'un changement de sa couleur, d'une perte de flocons, etc.). L’absence de phénomène physique visible est considérée comme un résultat de test négatif.

Préparation aux tests sérologiques

Cela dépend du type de recherche. Un médecin spécialiste doit vous expliquer les détails de la réalisation d'un test spécifique lorsque vous vous inscrivez à la procédure.

Vous pouvez passer le test sérologique nécessaire à la clinique Spectra. Nous commandons des analyses aux meilleurs laboratoires de la capitale fonctionnant selon les normes européennes, ce qui garantit des résultats rapides et fiables. Nos médecins vous aideront à déchiffrer la conclusion et vous donneront des recommandations pour des diagnostics plus approfondis.