Ingrédients nécessaires à la mise en place du RSC et à leur obtention. Réaction de fixation du complément (CRF). Mise en place de l'expérience principale du RSK Bordet - Zhangou

Un avantage particulier du RSC est que la nature de l'antigène impliqué (corpusculaire ou soluble) n'a pas d'importance, puisque le complément se lie au fragment Fc de tout anticorps apparenté aux IgG et aux IgM, quelle que soit sa spécificité d'anticorps. De plus, le RSA est très sensible : il permet de détecter une quantité d'anticorps 10 fois inférieure à celle, par exemple, dans une réaction de précipitation. Le RSC a été proposé en 1901 par J. Bordet et O. Zhang. Elle repose sur deux propriétés du complément :

1) la capacité de se lier au complexe « antigène + anticorps » ;

2) lyse des globules rouges permettant d'obtenir du sérum hémolytique.

Le RSK est réalisé en deux étapes et deux systèmes y sont respectivement impliqués : expérimental, ou diagnostique, et indicateur. Le système de diagnostic consiste en un sérum de test (ou de diagnostic), qui est chauffé à 56 °C pendant 30 minutes avant d'effectuer la réaction visant à inactiver le complément et l'antigène qu'il contient.

Un complément standard est ajouté à ce système. Sa source est le lactosérum de cobaye frais ou séché. Le mélange est incubé à 37°C pendant une heure. Si le sérum testé contient des anticorps, ils interagiront avec l’antigène ajouté et les complexes « antigène + anticorps » résultants se lieront au complément ajouté. S'il n'y a pas d'anticorps dans le sérum, la formation du complexe antigène + anticorps n'aura pas lieu et le complément restera libre.

Il n’y a généralement aucune manifestation visible de fixation du complément à ce stade de la réaction. Par conséquent, pour clarifier la question de savoir si la fixation du complément a eu lieu ou non, un deuxième système indicateur (sérum hémolytique inactivé + globules rouges de mouton) est ajouté et le mélange de tous les composants du RSC est à nouveau incubé à 37 °C pendant 30 à 60 minutes. , après quoi les résultats de la réaction sont évalués. À l’aide d’un smartphone (comme celui-ci), vous pouvez calculer le temps de réaction exact. Si le complément est lié dès la première étape, dans le système de diagnostic, c'est-à-dire qu'il y a des anticorps dans le sérum du patient, et que le complément est lié par le complexe « anticorps + antigène », il n'y aura pas de lyse des globules rouges - les globules rouges sont positifs : le liquide est incolore, il y a un sédiment au fond du tube de globules rouges

S'il n'y a pas d'anticorps spécifiques dans le sérum et que la liaison du complément ne se produit pas dans le système de diagnostic, c'est-à-dire que le RSC est négatif, alors le complément non dépensé dans le système de diagnostic se lie au complexe « globules rouges + anticorps » du système indicateur et une hémolyse se produit : dans un tube à essai « sang laqué », il n'y a pas de sédiment de globules rouges. L'intensité du RSC est évaluée à l'aide d'un système à quatre croix en fonction du degré de retard de l'hémolyse et de la présence de sédiments érythrocytaires. La réaction s'accompagne de contrôles appropriés : contrôle sérum (sans antigène) et contrôle antigène (sans sérum), puisque certains sérums et certains antigènes ont un effet anti-complémentaire. Avant d'effectuer le RSC, tous les composants impliqués, à l'exception du sérum ou de l'antigène testé, sont soumis à un titrage minutieux.

Il est particulièrement important d'introduire la dose exacte de complément dans la réaction, car son manque ou son excès peut conduire à de faux résultats. Le titre du complément est la quantité minimale qui, en présence d'une dose efficace de sérum hémolytique, assure la dissolution complète des globules rouges. Pour réaliser l'expérience principale, prendre une dose de complément augmentée de 20 à 25 % par rapport au titre établi. Le titre du sérum hémolytique est sa dilution maximale qui, mélangée à un volume égal de solution de complément à 10 %, hémolyse complètement la dose correspondante de globules rouges en 1 heure à une température de 37 °C.

La réaction d'hémolyse indirecte est utilisée comme méthode accélérée pour détecter des anticorps spécifiques. Les globules rouges sont utilisés comme porteurs d'antigènes. S'il existe des anticorps spécifiques dans le sérum du patient, les globules rouges sensibilisés sont lysés en présence de complément.

Réaction de fixation du complément (CFR) utilisé pour détecter les anticorps dirigés contre un antigène spécifique ou déterminer le type d’antigène à l’aide d’un anticorps connu. Il s’agit d’une réaction sérologique complexe, impliquant deux systèmes et complément. Le premier système est bactériologique (basique), constitué d'un antigène et d'un anticorps (l'un est connu, l'autre non). Le deuxième système est hémolytique (indicateur). Il comprend les globules rouges de mouton (antigène) et le sérum hémolytique correspondant (anticorps). Le RSC est administré en deux étapes : d'abord, l'antigène est combiné avec le sérum sanguin à tester, dans lequel l'anticorps est recherché, puis le complément est ajouté. Si l’antigène et l’anticorps correspondent, un complexe immunitaire se forme qui se lie au complément. En l’absence d’anticorps dans le sérum, le complexe immun ne se forme pas et le complément reste libre. Puisque le processus d’adsorption du complément par le complexe est visuellement invisible, un système hème est ajouté pour identifier ce processus. La réaction est prise en compte comme suit. Si le complément s'est lié dans le premier (bacsystème), alors lorsque l'hèmesystème est ajouté, l'hémolyse des érythrocytes ne se produira pas - la réaction est positive. Si le complément ne se lie pas au premier système en raison du manque d'anticorps, il entrera alors en contact avec le système hème, entraînant une hémolyse des globules rouges - une réaction négative.

Les antigènes pour la RSC sont préparés à partir de microbes tués et détruits, le plus souvent par extraction.

Le RSC est largement utilisé pour le diagnostic de la brucellose, de la morve, de la rickettsiose, de la fièvre aphteuse et bien d'autres.

Réaction de fixation du complément à long terme (LDCR). Il s'agit d'une variante du RSC habituel, mais qui en diffère par le fait que la première phase de la réaction se déroule pendant 16 à 18 heures à froid (4°C). Dans de telles conditions, dans le premier système du complexe antigène-anticorps-complément, des anticorps cryophiles (froids) sont en outre liés, ce qui augmente la sensibilité de la réaction. Cette option est utilisée pour diagnostiquer la brucellose, la campylobactériose, etc.

La réaction de fixation du complément (CFR) a été décrite pour la première fois par Bordet et Zhangou (1901). Contrairement à la PR et à la RP, dans le SCC, la combinaison d'un antigène et d'un anticorps ne se manifeste qu'en présence du troisième composant, le complément.

La réaction de formation complexe, Antigène - antite Lo - complément - invisible. Pour identifier l'interaction spécifiée des composants de la réaction, un système d'indicateurs supplémentaire est utilisé, qui, par sa clarté de manifestation, reflète indirectement le résultat de l'interaction dans le premier système. Ainsi; deux systèmes interviennent dans le RSC : 1) bactériolytique (diagnostic) et 2) hémolytique (indicateur auxiliaire), qui permet de déterminer si la fixation du complément a eu lieu dans le premier système. Auparavant, une suspension de bactéries était utilisée comme antigène et, dans les cas positifs, leur lyse (bactériolyse) se produisait, c'est pourquoi le premier système était appelé bactériolytique. Par conséquent, la RSC repose sur deux phénomènes : la bactériolyse et l’hémolyse.

Le RSC s'effectue en deux étapes. Tout d'abord, un système bactériolytique est préparé - 0,5 ml du sérum inactivé à tester avec l'antigène est mélangé dans des tubes à essai, le complément est ajouté dans une quantité strictement définie (titre). Le mélange antigène - anticorps (sérum) - complément (système bactériolytique) est placé au bain-marie (ou thermostat) à 37-38°C pendant 20-40 minutes. Ensuite, passez à la deuxième étape de la réaction - les composants du deuxième système hémolytique sont ajoutés à tous les tubes à essai et à nouveau placés dans un bain-marie pendant 15 à 20 minutes. Ensuite, le résultat préliminaire est pris en compte (qu'il y ait ou non hémolyse), laissé à température ambiante jusqu'au lendemain, et le décompte final des RSC est effectué. L'absence d'hémolyse (résultat de diagnostic positif) indique que le sérum testé contient des anticorps spécifiques de l'antigène prélevé, que le complexe antigène-anticorps s'est formé dans le premier système et que le complément s'est lié. Les composants du deuxième système sont ajoutés - l'hémolysine et les érythrocytes, qui les uns par rapport aux autres sont également un antigène (érythrocytes) et un anticorps (hémolysine) et interagissent en présence de complément. Si dans le sérum à tester il n'y a pas d'anticorps spécifiques à l'antigène prélevé, le complexe antigène-anticorps ne se forme pas et le complément n'est pas adsorbé dans le premier système bactériolytique et reste libre dans le tube à essai, puis lorsque le deuxième système (hémolytique) est De plus, le complément interagit avec le complexe antigène-anticorps (hémolysine – globules rouges) et une hémolyse (lyse des globules rouges) se produit. Le résultat du diagnostic est négatif. Ainsi, 5 composants interviennent dans le RSC : antigène, anticorps (sérum à tester), complément, hémolysine, suspension d'érythrocytes de mouton. Pour diluer tous les composants, un milieu électrolytique – solution saline NaС1 – est utilisé.

Pour effectuer une RSC dans un laboratoire de diagnostic, les éléments suivants sont requis : des échantillons de sérum d'animaux reçus par le laboratoire pour analyse ; deux sérums reconnus positifs (standard, hyperimmun, donnant un résultat positif - pour contrôle) et deux sérums normaux d'animaux sains - également pour contrôle (tous les sérums à la dilution 1 : 10 sont inactivés pour détruire leur propre complément par chauffage dans un bain-marie à 56-58° (à partir de 30 min) ; antigène dilué selon le titre (indiqué par la biousine sur l'emballage) ; complément (sérum de cobaye) dilué selon le titre établi (lors du titrage) ; hémolysine en titre de travail ; une suspension d'érythrocytes de mouton diluée au 1:40, solution saline, pipettes graduées de différentes capacités, tubes à essai, supports, bain-marie, poires en caoutchouc.

Le test de fixation du complément (FFR) est un test sérologique comparable en sensibilité aux méthodes de précipitation, d'agglutination et de neutralisation. RSK est une méthode qui utilise deux systèmes antigène-anticorps :

le premier est spécifique ;

le second est indicateur (hémolytique).

Pour réaliser une RSC, 5 composants sont nécessaires : l'antigène à diagnostiquer, les anticorps diagnostiques, l'antigène indicateur (globules rouges de mouton), les anticorps indicateurs (hémolysines de lapin), le complément.

L'interaction spécifique de l'antigène et de l'anticorps s'accompagne d'une liaison au complément. Le complexe résultant n’apparaît pas visuellement. Le système hémolytique est utilisé comme indicateur. Le sérum hémolytique sensibilise les globules rouges à l'action du complément, en présence duquel se produit la lyse des globules rouges (hémolose). S'il n'y a pas d'hémolyse, alors le complément est lié au premier système et, par conséquent, l'antigène qu'il contient correspond à l'anticorps - une réponse positive. Si l'anticorps ne correspond pas à l'antigène, le complexe ne se forme pas et le complément, restant libre, se combine avec le deuxième système, provoquant une hémolyse - une réaction négative.

Pour réaliser le RSC, tous les ingrédients de la réaction sont préparés et titrés avant l’expérience principale.

Le sérum (patient ou diagnostic) à la veille de la réaction est chauffé au bain-marie à une température de 56ºC pendant 30 minutes pour inactiver son propre complément. Certains sérums, notamment issus d'animaux immunisés, ont des propriétés anti-complémentaires, c'est-à-dire la capacité de fixer le complément en l'absence d'antigène homologue. L'anti-complémentarité est éliminée en les traitant avec du dioxyde de carbone, en chauffant à une température de 57-58ºC, une fois congelés à une température de -20ºC ou -70ºC et en éliminant le sédiment par centrifugation, en ajoutant du complément au sérum dans un volume de 1 : 10 sérum et le réchauffer après une incubation au froid pendant 18 à 20 heures. Pour éviter l'anticomplémentarité des sérums, ils sont conservés lyophilisés ou congelés à basse température.

L'antigène du CSC peut être constitué de cultures de divers micro-organismes tués, de leurs lysats, de composants de bactéries, d'organes pathologiquement altérés et normaux, de lipides tissulaires, de virus et de matériaux contenant des virus. De nombreux antigènes issus de micro-organismes sont obtenus industriellement. L'anti-complémentarité des antigènes est éliminée par des méthodes telles que la thermolyse (congélation et décongélation multiples), le traitement avec des solvants gras (éther, chloroforme, acétone), des alcools (méthanol, éthanol), etc.

Le sérum de cobaye prélevé immédiatement avant l'expérimentation est utilisé comme complément ; Un complément sec peut également être utilisé. Pour obtenir la solution principale pour un titrage ultérieur, le complément est dilué au 1:10 avec une solution isotonique de chlorure de sodium.

Les globules rouges de mouton sont utilisés sous forme de suspension dans une solution isotonique de chlorure de sodium. Le sang (100-150 ml) est prélevé dans la veine jugulaire, placé dans un pot stérile avec des billes de verre, défibriné par agitation pendant 10-15 minutes et filtré sur 3-4 couches de gaze stérile pour éliminer la fibrine. Les globules rouges sont lavés 3 fois avec une solution isotonique de chlorure de sodium, en l'ajoutant au sédiment de globules rouges au volume sanguin d'origine. Les globules rouges peuvent être conservés pendant 5 à 6 jours à une température de 4 à 6 ºC. La durée de conservation des globules rouges augmente lorsqu'ils sont conservés avec du formaldéhyde.

Le sérum hémolytique pour RSC est obtenu comme suit : Immuniser les lapins en leur injectant dans une veine de l'oreille une suspension à 50 % d'érythrocytes de mouton lavés (1 ml 4 à 6 fois tous les deux jours). 7 jours après la dernière injection, un sérum test est obtenu. Si le titre sérique n'est pas inférieur à 1: 1 200, une saignée est effectuée. Le sérum est chauffé pendant 30 minutes à une température de 56ºC. Pour empêcher la croissance bactérienne, un conservateur (merthiolate 1:10 000 ou 1 acide borique) est ajouté au sérum hémolytique.

Le système hémolytique est constitué d'un mélange à volumes égaux de sérum hémolytique (pris en triple titre) et de 3 suspensions d'érythrocytes de mouton. Pour sensibiliser les érythrocytes aux hémolysines, le mélange est maintenu dans un thermostat à une température de 37ºC pendant 30 minutes.

Titrage du sérum hémolytique. Le sérum est titré en associant 0,5 ml de celui-ci (aux dilutions 1:600, 1:1200, 1:1600, 1:3200, etc.) avec 0,5 ml de 3 suspensions de globules rouges et 0,5 ml de complément frais dans dilution 1:10. Le volume du mélange réactionnel dans les tubes témoins est ajusté à 1,5 ml par ajout d'une solution isotonique de chlorure de sodium. Les résultats de la réaction sont pris en compte après 1 heure d'incubation à une température de 37ºC. Le titre du sérum hémolytique est considéré comme sa dilution la plus élevée provoquant une hémolyse complète. Le sérum est conservé sous forme lyophilisée.

Schéma de titrage du sérum hémolytique

Titrage complémentaire. Avant l'expérience, la solution principale du complément (1:10) est versée dans une rangée de tubes à essai de 0,05 à 0,5 ml et une solution isotonique de chlorure de sodium est ajoutée à chacun, portant le volume de liquide à 1,5 ml. Les tubes sont placés dans un thermostat à une température de 37ºC pendant 45 minutes, puis le système hémolytique y est ajouté et maintenu dans le thermostat pendant 30 minutes, après quoi le titre du complément est déterminé.

Pour l'expérience, prenez une dose de travail de complément (contenue dans un volume de 0,5 ml), qui est 20 à 30 % supérieure au titre.

Schéma de titrage complémentaire

Thermostat à 37ºC pendant 45 minutes

Thermostat à 37ºC pendant 30 minutes

Titrage d'antigènes. Les antigènes utilisés pour le RSC peuvent adsorber une certaine quantité de complément, c'est-à-dire ont des propriétés anti-complémentaires. Par conséquent, avant de réaliser l'expérience, les antigènes sont titrés en présence d'une dose de travail de complément. Dans une moindre mesure, les propriétés anti-complémentaires s'expriment dans des antigènes spécifiques produits industriellement. Leur titre est déterminé non pas avant chaque expérimentation, mais une fois par mois, en tenant compte de la possibilité de sa réduction lors du stockage.

Pour déterminer le titre en antigène, il est versé dans une série de tubes à essai en quantités décroissantes de 0,5 à 0,05 ml, en portant le volume à 1 ml par ajout d'une solution de chlorure de sodium. Ensuite, 0,5 ml d'une dose de travail de complément est ajouté dans chaque tube à essai et placé dans un thermostat pendant 1 heure à une température de 37ºC. Après cela, 1 ml du système hémolytique est ajouté à tous les tubes à essai, maintenus à nouveau au thermostat pendant 1 heure, et les résultats de la réaction sont pris en compte.

Le titre d'antigène est considéré comme la plus petite quantité à laquelle une hémolyse complète se produit. Pour le RSC, une dose efficace d'antigène est utilisée, soit environ 1/2-1/3 de titre. Les antigènes en présence desquels le titre du complément diminue de plus de 30 % ne conviennent pas à la réaction.

Schéma de titrage d'antigène

Thermostat à 37ºC pendant 1 heure

Thermostat à 37ºC pendant 1 heure

Réalisation de l'expérience principale du DSC. Le volume total des ingrédients de la réaction est de 2,5 ml, le volume de la dose de travail de chacun d'eux est de 0,5 ml. Le sérum à la dilution appropriée, l'antigène et le complément sont ajoutés dans le premier tube, le sérum à la dilution appropriée, le complément et la solution isotonique de chlorure de sodium (contrôle sérique) sont ajoutés au deuxième tube, l'antigène, le complément et la solution isotonique de chlorure de sodium (contrôle antigène) ) sont ajoutés au troisième tube. Parallèlement, préparer un système hémolytique en mélangeant 2 ml de sérum hémolytique en triple titre (par rapport à celui précisé dans la notice) et 3% de suspension d'érythrocytes de mouton (par rapport au volume sanguin d'origine). Les tubes sont maintenus dans un thermostat à une température de 37ºC pendant 1 heure, puis 1 ml du système hémolytique est ajouté aux 3 premiers tubes (premier système) (deuxième système). Après avoir soigneusement mélangé les ingrédients, les tubes à essai sont à nouveau placés dans un thermostat pendant 1 heure à une température de 37ºC.

Schéma de réalisation de l'expérience principale du RSK

Thermostat à 37ºC pendant 1 heure

Thermostat à 37ºC pendant 1 heure

Les résultats de la réaction sont pris en compte au préalable - après avoir retiré les tubes à essai du thermostat et enfin - après un séjour de 15 à 18 heures au réfrigérateur ou à température ambiante.

Au final, l'intensité de la réaction est exprimée par des plus : (++++) - une réaction fortement positive, caractérisée par un retard complet de l'hémolyse (le liquide dans le tube à essai est incolore, tous les globules rouges se déposent sur le fond); (+++, ++) – une réaction positive, se manifestant par une augmentation de la couleur du liquide due à l'hémolyse et une diminution du nombre de globules rouges dans le sédiment ; (+) – réaction faiblement positive (le liquide est intensément coloré, il y a une petite quantité de globules rouges au fond du tube). En cas de réaction négative (–), une hémolyse complète est observée, le liquide contenu dans l'éprouvette a une couleur rose intense (sang laqué).

Un certain nombre de modifications du RSC ont été proposées, caractérisées par une sensibilité accrue et un plus petit volume d'ingrédients utilisés. Par exemple, dans les études virologiques, le volume des ingrédients du RSC par temps froid est de 1 ml. Pour le goutte-à-goutte RSC, prendre 1 goutte de sérum + 1 goutte d'antigène + 1 goutte de complément + 2 gouttes de système hémolytique.

La réaction de liaison du complément est la plus largement utilisée dans les diagnostics microbiologiques et sérologiques.

Grâce au RSC, des anticorps fixateurs de complément sont détectés dans le sérum sanguin de patients atteints de syphilis, de morve, de gonorrhée chronique, de rickettsiose, de maladies virales, etc.

Le CSC présente un intérêt particulier pour l’immunologie clinique. La réaction est utilisée pour isoler diverses sous-populations de lymphocytes, pour détecter les antigènes HLA sur les plaquettes, les lymphoblastes transplantables, les fibroblastes, les cellules tumorales et les antigènes spécifiques des plaquettes, ainsi que les anticorps correspondants.

réaction de fixation du complément , RSK, réaction de BordetZhang [du nom du Belge. bactériologistes J. Bordet et O. Gengou, 1901], une réaction sérologique très spécifique et très sensible basée sur la propriété du complexe antigène-anticorps de fixer le complément libre (), utilisée dans le diagnostic de nombreuses bactéries et virus et de certains protozoaires et maladies helminthiques, ainsi que pour étudier les processus accompagnés de changements dans la quantité d'antigène ou d'anticorps. La RSC se déroule en 2 phases : 1) interaction des anticorps, de l'antigène et du complément, à la suite de laquelle le complément libre est lié par le complexe antigène-anticorps résultant (phase spécifique) ; 2) indication de la réaction sensibilisée par les érythrocytes (phase non spécifique). Le RSC utilise 2 systèmes : un système bactériologique spécifique, constitué d'un anticorps (sérum à tester), d'un antigène et d'un complément, ainsi qu'un système « indicateur » non spécifique contenant de l'hémolysine (sérum hémolytique) et une suspension d'érythrocytes de mouton. L'antigène se combine à l'anticorps uniquement en présence de complément. Si le sérum à tester contient des anticorps homologues à l'antigène prélevé, alors le complément présent dans le mélange réactionnel est adsorbé par le complexe antigène × anticorps résultant et perd la capacité de lyser les globules rouges sensibilisés, c'est-à-dire sans complément, l'hémolysine (anticorps hémolytique ) ne détruit pas les globules rouges (la réaction est positive). Dans les cas où il n'existe pas de relation spécifique entre l'antigène et les anticorps du sérum à tester, le complexe ne se forme pas et le complément reste à l'état libre. Dans ce cas, lors de l'ajout d'un système hémolytique, le complément non lié provoque une hémolyse des globules rouges sensibilisés (réaction négative). Il existe différentes options pour la stadification des RSC : la méthode classique de stadification sous forme de macro- et microvariants, la réaction de fixation du complément à long terme (LDST) au froid, la méthode de stadification quantitative basée sur l'hémolyse à 50 % des érythrocytes sensibilisés, etc. Dans la pratique du diagnostic vétérinaire, la méthode RSC classique est plus souvent utilisée comme option macro, dans laquelle 0,5 ou 0,25 ml de chaque composant sont prélevés dans un certain titre de travail. Le complément est titré dans un système bactériologique à l'aide de sérums provenant de la même espèce d'animaux dont le sang doit être examiné. Les sérums de test sont généralement testés à des dilutions de 1:5 et 1:10 avec antigène et 1:5 sans antigène (contrôle). Le temps de fixation du complément dans la phase spécifique est de 20 minutes, le temps de réaction d'hémolyse dans la phase non spécifique est de 20 minutes à t 3738ºC. Pour diagnostiquer un certain nombre de maladies, une méthode plus sensible, la DSCT, est utilisée. Dans ce cas, la première phase de la réaction est réalisée à t 46ºC pendant 1618 heures, ce qui entraîne une adsorption accrue du complément par de petites quantités d'antigènes et d'anticorps. Ensuite, le système hémolytique est ajouté et la réaction se déroule à t 3738ºC pendant 20 minutes. Les résultats de RSK et RDSC sont pris en compte en fonction du degré de retard d'hémolyse, qui est indiqué par des croix ou des moins, correspondant aux pourcentages d'hémolyse érythrocytaire suivants : ++++ de 0 à 10 % ; +++ de 10 à 40% ; ++ de 40 à 70 % ; + de 70 à 90 % ; de 90 à 100%. La législation vétérinaire fournit des instructions spéciales pour la formulation, l'enregistrement et l'évaluation du RSC et du RDSK pour chaque maladie séparément.

Littérature:
Recherche en laboratoire en médecine vétérinaire, M., 1971 ;
Guide d'immunologie, éd. O.E. Viazova et Sh. Khodzhaeva, M., 1973.

Dictionnaire encyclopédique vétérinaire. - M. : "Encyclopédie soviétique". Rédacteur en chef V.P. Chichkov. 1981 .

Voyez ce qu'est "" dans d'autres dictionnaires :

Réaction de fixation du complément- (RSK) sérol. réaction utilisée pour la détermination quantitative des Abs et Ag fixateurs du complément. Le principe du RSC est qu'un complexe immunitaire spécifique adsorbe complètement ou partiellement le C ajouté au système. Dictionnaire de microbiologie

réaction de fixation du complément- Méthode du Laboratoire RSK. [Glossaire anglais-russe des termes de base en vaccinologie et immunisation. Organisation mondiale de la santé, 2009] Sujets vaccinologie, immunisation Synonymes de test de fixation du complément RSC EN Test CFTCF ... Guide du traducteur technique

Réaction de fixation du complément- I La réaction de fixation du complément est une réaction sérologique utilisée pour déterminer un antigène ou un anticorps, basée sur l'évaluation de la consommation (fixation) du complément par des complexes antigène-anticorps, voir Méthodes de recherche immunologique. II... ... Encyclopédie médicale

réaction de fixation du complément- réaction rus (g) de fixation du complément, réaction (g) Bordet Zhangou ; réaction (g) rejet du complément ; alexin fixation réaction (g) eng complément fixation test fra réaction (f) de fixation du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) spa… …

réaction de fixation du complément- (RSK), une réaction sérologique très sensible et spécifique utilisée pour le diagnostic de nombreuses maladies animales infectieuses et invasives. Se compose de deux phases successives. Dans la première phase, l'antigène est mélangé au sérum à tester et... ... Agriculture. Grand dictionnaire encyclopédique

réaction de fixation du complément- (RSK ; synonyme : réaction de Bordet Zhangu, réaction de rejet du complément obsolète, réaction de fixation de l'alexine obsolète) une méthode de recherche sérologique basée sur la capacité du complexe antigène-anticorps résultant à se lier au complément, qui est détectée... ... Grand dictionnaire médical- réaction rus (g) de fixation du complément, réaction (g) Bordet Zhangou ; réaction (g) rejet du complément ; alexin fixation réaction (g) eng complément fixation test fra réaction (f) de fixation du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) spa… … Sécurité et santé au travail. Traduction en anglais, français, allemand, espagnol

Réaction de fixation du complément- voir Réaction de fixation du complément. (

Le diagnostic en laboratoire de presque toutes les maladies infectieuses repose sur l’identification dans le sang du patient d’anticorps produits contre des antigènes pathogènes à l’aide de réactions sérologiques. Ils sont entrés dans la pratique médicale de la fin du XIXe au début du XXe siècle.

Le développement de la science a permis de déterminer la structure antigénique des microbes et les formules chimiques de leurs toxines. Cela a permis de créer non seulement des sérums thérapeutiques, mais également diagnostiques. Ils sont obtenus en injectant des agents pathogènes affaiblis à des animaux de laboratoire. Après plusieurs jours d'incubation, des préparations sont préparées à partir de sang de lapin ou de souris qui servent à identifier les microbes ou leurs toxines à l'aide de tests sérologiques.

La manifestation externe d’une telle réaction dépend des conditions de sa production et de l’état des antigènes dans le sang du patient. Si les particules microbiennes sont insolubles, elles précipitent, lysent, se lient ou s'immobilisent dans le sérum. Si les antigènes sont solubles, alors le phénomène de neutralisation ou de précipitation se produit.

Réaction d'agglutination (RA)

La réaction sérologique d'agglutination est très spécifique. Elle est simple à réaliser et suffisamment visuelle pour déterminer rapidement la présence d’antigènes dans le sérum sanguin du patient. Il est utilisé pour réaliser la réaction de Widal (diagnostic de la fièvre typhoïde et de la fièvre paratyphoïde) et de Weigl (fièvre typhus).

Elle repose sur l’interaction spécifique entre les anticorps humains (ou agglutinines) et les cellules microbiennes (aggluténogènes). Après leur interaction, des particules se forment et précipitent. C'est un signe positif. Des agents microbiens vivants ou tués, des champignons, des protozoaires et des cellules somatiques peuvent être utilisés pour organiser la réaction.

Chimiquement, la réaction se divise en deux étapes :

1. Combinaison spécifique d'anticorps (AT) avec des antigènes (AG).
2. Non spécifique - précipitation de conglomérats AG-AT, c'est-à-dire formation d'un agglutinat.

Réaction d'agglutination indirecte (IAR)

Pour le réaliser, on utilise des érythrocytes de mouton purifiés et des globules rouges humains, prétraités avec des anticorps ou des antigènes (cela dépend de ce que veut exactement le technicien de laboratoire). Dans certains cas, les globules rouges humains sont traités avec des immunoglobulines. Les réactions sérologiques des érythrocytes sont considérées comme réussies si elles se déposent au fond du tube. On peut parler de réaction positive lorsque les alvéoles sont disposées sous la forme d'un parapluie inversé, occupant tout le fond. Une réaction négative est comptée si les globules rouges se déposent en colonne ou sous la forme d'un bouton au centre du fond.

Réaction de précipitation (RP)

Les tests sérologiques de ce type sont utilisés pour détecter des particules d’antigènes extrêmement petites. Il peut s'agir par exemple de protéines (ou de parties de celles-ci), de composés de protéines avec des lipides ou des glucides, de parties de bactéries et de leurs toxines.

Les sérums pour la réaction sont obtenus en infectant artificiellement des animaux, généralement des lapins. Grâce à cette méthode, vous pouvez obtenir absolument n'importe quel sérum précipitant. La production de réactions sérologiques de précipitation a un mécanisme d'action similaire à celui des réactions d'agglutination. Les anticorps contenus dans le sérum se combinent aux antigènes pour former de grosses molécules protéiques qui se déposent au fond du tube ou sur le substrat (gel). Cette méthode est considérée comme très spécifique et peut détecter même des quantités infimes d’une substance.

Utilisé pour diagnostiquer la peste, la tularémie, le charbon, la méningite et d'autres maladies. De plus, il participe à l'examen médico-légal.

en gel

Les réactions sérologiques peuvent être réalisées non seulement en milieu liquide, mais également en gel d'agar. C’est ce qu’on appelle la méthode de précipitation diffuse. Avec son aide, la composition de mélanges antigéniques complexes est étudiée. Cette méthode est basée sur la chimiotaxie des antigènes en anticorps et vice versa. Dans le gel, ils se déplacent les uns vers les autres à des vitesses différentes et, en se rencontrant, forment des lignes de précipitation. Chaque ligne est un ensemble d'AG-AT.

Réaction de neutralisation des exotoxines avec l'antitoxine (RN)

Les sérums antitoxiques sont capables de neutraliser l'effet de l'exotoxine produite par des micro-organismes. Ces réactions sérologiques sont basées sur cela. La microbiologie utilise cette méthode pour titrer les sérums, les toxines et les anatoxines, ainsi que pour déterminer leur activité thérapeutique. La force de neutralisation des toxines est déterminée par des unités conventionnelles - AE.

De plus, grâce à cette réaction, il est possible de déterminer l’espèce ou le type d’exotoxine. Ceci est utilisé pour la diphtérie, le botulisme. L'étude peut être réalisée aussi bien « sur verre » qu'en gel.

Réaction de lyse (RL)

L’immunsérum qui pénètre dans l’organisme du patient a, en plus de sa fonction principale d’immunité passive, également des propriétés lysantes. Il est capable de dissoudre les agents microbiens, les éléments cellulaires étrangers et les virus pénétrant dans l’organisme du patient. Selon la spécificité des anticorps contenus dans le sérum, des bactériolysines, des cytolysines, des spirochétolysines, des hémolysines et autres sont isolées.

Ces anticorps spécifiques sont appelés « complément ». On le trouve dans presque tous les fluides du corps humain, possède une structure protéique complexe et est extrêmement sensible à l'augmentation de la température, aux secousses, aux acides et à la lumière directe du soleil. Mais une fois séché, il peut conserver ses propriétés lysantes jusqu'à six mois.

Il existe les types suivants de réactions sérologiques de ce type :

Bactériolyse ;

Hémolyse.

La bactériolyse est réalisée à l'aide du sérum sanguin du patient et du sérum immun spécifique contenant des microbes vivants. Si une quantité suffisante de complément est présente dans le sang, le chercheur constatera une lyse des bactéries et la réaction sera considérée comme positive.

La deuxième réaction sérologique sanguine consiste à traiter une suspension de globules rouges du patient avec du sérum contenant des hémolysines, qui ne sont activées qu’en présence d’un certain complément. S’il y en a, le laborantin observe la dissolution des globules rouges. Cette réaction est largement utilisée en médecine moderne pour déterminer le titre du complément (c'est-à-dire sa plus petite quantité provoquant la lyse des globules rouges) dans le sérum sanguin et pour effectuer un test de fixation du complément. C'est ainsi que s'effectue une réaction sérologique à la syphilis -

Réaction de fixation du complément (CFR)

Cette réaction est utilisée pour détecter les anticorps dirigés contre un agent infectieux dans le sérum sanguin du patient, ainsi que pour identifier l’agent pathogène par sa structure antigénique.

Jusqu'à présent, nous avons décrit des réactions sérologiques simples. La RSC est considérée comme une réaction complexe, puisque non pas deux, mais trois éléments y interagissent : l'anticorps, l'antigène et le complément. Son essence réside dans le fait que l'interaction entre l'anticorps et l'antigène se produit uniquement en présence de protéines du complément, qui sont adsorbées à la surface du complexe AG-AT résultant.

Les antigènes eux-mêmes, après addition de complément, subissent des changements significatifs, qui indiquent la qualité de la réaction réalisée. Il peut s'agir d'une lyse, d'une hémolyse, d'une immobilisation, d'un effet bactéricide ou bactériostatique.

La réaction elle-même se déroule en deux phases :

1. Formation d'un complexe antigène-anticorps qui n'est pas visuellement perceptible par le chercheur.
2. Modification de l'antigène sous l'influence du complément. Cette phase est le plus souvent observable à l’œil nu. Si la réaction n'est pas visuellement visible, un système d'indicateurs supplémentaire est utilisé pour identifier les changements.

Système d'indicateurs

Cette réaction est basée sur la fixation du complément. Des érythrocytes de mouton purifiés et du sérum hémolytique ne contenant pas de complément sont ajoutés au tube à essai une heure après la mise en place du RSC. S'il reste du complément non lié dans le tube à essai, il rejoindra le complexe AG-AT formé entre les cellules sanguines de mouton et l'hémolysine et provoquera leur dissolution. Cela signifiera que le RSC est négatif. Si les globules rouges restent intacts, la réaction est positive.

Réaction d'hémagglutination (HRA)

Il existe deux réactions d'hémagglutination fondamentalement différentes. L'un d'eux est sérologique, il sert à déterminer les groupes sanguins. Dans ce cas, les globules rouges interagissent avec les anticorps.

Et la deuxième réaction n’est pas sérologique, puisque les globules rouges réagissent avec les hémagglutinines produites par les virus. Puisque chaque agent pathogène n’agit que sur des globules rouges spécifiques (poulet, agneau, singe), cette réaction peut être considérée comme très spécifique.

Vous pouvez savoir si une réaction est positive ou négative grâce à l’emplacement des cellules sanguines au fond du tube à essai. Si leur motif ressemble à un parapluie inversé, cela signifie que le virus recherché est présent dans le sang du patient. Et si tous les globules rouges forment une colonne de pièces de monnaie, alors les agents pathogènes souhaités n’existent pas.

Réaction d'inhibition de l'hémagglutination (HAI)

Il s’agit d’une réaction très spécifique qui permet de déterminer le type, le type de virus ou la présence d’anticorps spécifiques dans le sérum sanguin du patient.

Son essence réside dans le fait que les anticorps ajoutés à un tube à essai avec le matériel à tester empêchent le dépôt d'antigènes sur les globules rouges, arrêtant ainsi l'hémagglutination. Il s'agit d'un signe qualitatif de la présence dans le sang d'antigènes spécifiques du virus recherché.

Réaction d'immunofluorescence (RIF)

La réaction est basée sur la capacité de détecter les complexes AG-AT après leur traitement avec des colorants fluorochromes. Cette méthode est facile à utiliser, ne nécessite pas l’isolement de la culture pure et prend peu de temps. Il est indispensable au diagnostic rapide des maladies infectieuses.

En pratique, ces réactions sérologiques se divisent en deux types : directes et indirectes.

Direct RIF est produit avec un antigène prétraité avec du sérum fluorescent. Et l'indirect est que le médicament est d'abord traité avec un diagnostic conventionnel contenant des antigènes contre les anticorps souhaités, puis un sérum luminescent est à nouveau appliqué, spécifique aux protéines du complexe AG-AT, et les cellules microbiennes deviennent visibles sous microscopie.