Diagnosticum Salmonella vi liquide antigénique. PHA ou réaction d’hémagglutination passive, de quel type de prise de sang s’agit-il ? Sérum précipité de charbon

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Fabricant : Microgen NPO Entreprise unitaire de l'État fédéral

Pays Russie

Unité Mesures : définir

Type d'emballage : boîte en carton

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Description

L'antigène Vi de Salmonella érythrocytaire de Diagnosticum est destiné à la mise en scène d'une réaction d'hémagglutination passive (RPHA) et est une suspension à 0,75 % d'érythrocytes humains formalisés et sensibilisés à l'antigène Vi du groupe sanguin O (I) dans une solution tampon phosphate (pH 7,2 ± 0,2 ; concentration - 0,06 mol/l), conservé dans le formaldéhyde. Complet avec du sérum de diagnostic de Salmonella adsorbé par le récepteur B, une solution sèche de dilution et une plaque à usage unique de 96 puits à fond rond pour les réactions immunologiques. Le principe d'action repose sur le phénomène d'agglutination des érythrocytes lors de l'interaction avec des sérums contenant des anticorps contre l'antigène Vi fixés à la surface des érythrocytes. Conçu pour 8 définitions

Objectif fonctionnel

Détection d'anticorps spécifiques dirigés contre l'antigène B de Salmonella typhus dans des échantillons de sérum humain. Réaction d'agglutination à une dilution d'au moins 1/2 de leur titre, mais d'au moins 1:160. Le niveau conditionnel de sérum sanguin diagnostique de personnes en bonne santé doit être considéré comme des dilutions de sérum ne dépassant pas 1:20. Diagnosticum ne doit pas être agglutiné par les sérums secs adsorbés de diagnostic de Salmonella pour la PR : récepteur O 9 - dans une dilution de 1:40 et plus, récepteur H d - dans une dilution de 1:10 et plus.
Préparer des dilutions en série au double des sérums analysés dans 0,05 ml de la solution de chlorure de sodium à 0,9 % fournie à partir de 1:10 à 1:2560 et 1 rangée de dilutions en série au double du sérum de diagnostic, à partir d'une dilution de 1 : 10, pour doubler le titre indiqué sur l'étiquette du flacon. Les flacons sont agités avant ouverture et pendant l'utilisation pour homogénéiser la suspension. Creusez dans les puits du comprimé ci-joint, ajoutez 0,025 ml de diagnosticum. Configurer les contrôles et incuber dans un thermostat. Le temps d'analyse est de 2 heures.
Les contrôles obligatoires sont : le contrôle du sérum diagnostique de Salmonella adsorbé par le sérum sec et test du récepteur B (à une dilution de 1:10 dans un volume de 0,05 ml) et la vérification de l'absence d'agglutination spontanée du diagnosticum.
Les résultats de la réaction sont enregistrés à l'aide d'un système à quatre croix :
4+ tous les globules rouges sont agglutinés et recouvrent uniformément le fond du puits en forme de « parapluie » ;
3+ presque tous les érythrocytes sont agglutinés, sur leur fond se trouve un anneau discret d'érythrocytes déposés non agglutinés ;
3+, avec un agglutinat uniforme, au fond du puits se trouve un sédiment d'érythrocytes non agglutinés sous la forme d'un petit « anneau » ou « bouton » ;
1+ la majorité des globules rouges sont non agglutinés et déposés sous la forme d'un petit « anneau » aux bords lisses ou d'un « bouton » au centre du fond du trou.
(-) il n'y a aucun signe d'agglutination. Les globules rouges se déposent sous la forme d’un petit « anneau » aux bords lisses ou d’un bouton au centre du puits ou au fond du tube à essai.
Une réaction d'au moins 3+ est considérée comme positive.
Les résultats obtenus dans le RPGA peuvent être considérés comme fiables si le sérum diagnostique de salmonelles adsorbé par le récepteur B sec 1:10 a obtenu un résultat positif dans une dilution d'au moins 14 de leurs titres, et dans 2 puits avec le sérum analysé et avec le diagnostic Le sérum de Salmonella adsorbé sur le récepteur B est sec dans des dilutions de 1:10, il ne doit y avoir ni flocons ni sédiments ; dans des puits avec une solution de chlorure de sodium à 0,9% et un diagnosticum - la réaction est négative.
Le titre en anticorps du sérum analysé est considéré comme la dernière dilution du sérum, qui donne encore une agglutination positive des globules rouges.
Les personnes qui présentent des anticorps contre l'antigène B à une dilution de 1:40 ou plus sont considérées comme suspectées de portage chronique de la bactérie typhoïde. Cependant, le diagnostic ne pouvant être posé uniquement sur la base d'un test sérologique, un examen bactériologique approfondi est nécessaire.

Caractéristiques

Contenu du set :
1. Diagnosticum érythrocytes Salmonella Vi-antigénique, une suspension homogène de couleur brune sans flocons lors de la décantation, deux couches se forment - un sédiment brun dense d'érythrocytes et un surnageant jaunâtre transparent ; 6 ml - 1 flacon ;
2. Sérum diagnostique de Salmonella adsorbé par le récepteur B, masse sèche homogène du blanc avec une teinte brunâtre au beige - sous forme de lyophilisat de 0,1 ml 1 flacon ;
3. Suspension à 1 % d'érythrocytes de mouton formolisés et non sensibilisés - une suspension homogène de couleur brune sans flocons ; lors de la décantation, deux couches se forment - un sédiment brun dense d'érythrocytes et un liquide surnageant jaunâtre transparent ; 1 ml - 1 flacon ;
4. Solution de dilution du sérum et de stadification RPHA - Solution de chlorure de sodium à 0,9% - liquide transparent incolore - 8 ml, 2 flacons ;
5. Une plaque à usage unique pour les réactions immunologiques se compose de 8 rangées de 12 puits chacune à fond rond transparent et incolore - 1 pièce.
Conditions de stockage : dans une pièce sèche et sombre à une température de +4...8°C. Un flacon ouvert contenant du diagnosticum sous forme fermée peut être conservé à une température de 2 à 8°C pendant un mois.
Durée de conservation - 18 mois à compter de la date de production, indiquée sur l'emballage.
Enregistré auprès de Roszdravnazor

Le principe actif du diagnosticum est l’antigène Vi, fixé à la surface des globules rouges. Lors de l'interaction avec des sérums contenant des anticorps dirigés contre l'antigène Vi, on observe le phénomène d'agglutination des érythrocytes.

Formulaire de décharge

Disponible en lot de 1 flacon avec diagnosticum - 3 ml, sérum de diagnostic récepteur adsorbé par Salmonella Vi Dry sous forme de lyophilisat de 0,1 ml 1 flacon ; Solution de chlorure de sodium à 0,9% - 2 flacons de 8 ml ; comprimé à usage unique pour les réactions immunologiques - 1 pc.

Composé

Quantité de réactifs :

Diagnosticum érythrocytaire Salmonella Vi-antigène, qui est une suspension à 0,75 % d'érythrocytes humains formalisés et sensibilisés du groupe sanguin O (I) avec l'antigène Vi dans une solution tampon phosphate (pH - 7,2 ± 0,2 ; concentration - 0,06 mol/l). Conservateur - formaldéhyde. Suspension homogène de couleur brune sans flocons ; lors de la décantation, 2 couches se forment : un sédiment brun dense d'érythrocytes et un liquide surnageant jaunâtre transparent 1 flacon-3 ml.

Sérum de diagnostic de Salmonella adsorbé sur le récepteur B sec - masse homogène allant du blanc avec une teinte brunâtre au beige. 1 flacon - à partir de 0,1 ml.

Solution d'entretien - Solution de chlorure de sodium à 0,9% - Liquide clair et incolore, pH de 6,5 à 7,5. 2 bouteilles de 8 ml chacune.

Plaque à fond rond pour réactions immunologiques à usage unique - composée de 8 rangées comprenant chacune 12 puits à fond rond transparent et incolore. 1 PC.

Le diagnosticum doit être agglutiné dans le RPHA par le sérum diagnostique de Salmonella adsorbé par le récepteur B sec dans une dilution d'au moins 1/2 de leur titre, mais d'au moins 1/160. Diagnosticum ne doit pas être agglutiné par les sérums secs adsorbés de diagnostic de Salmonella pour la PR : récepteur O 9 - dans une dilution de 1:40 et plus, récepteur H d - dans une dilution de 1:10 et plus.

Indications pour l'utilisation

Conçu pour détecter des anticorps spécifiques contre l'antigène Vi de Salmonella typhus dans le sérum sanguin humain lors d'une réaction d'hémagglutination passive (RPHA).

Schéma posologique et mode d'administration

Des échantillons de sérum sanguin humain sont utilisés comme échantillons analysés.
L'échantillon analysé est conservé dans des conditions empêchant la croissance bactérienne à une température de 2 à 8 °C pendant 72 heures maximum. La congélation est autorisée ; les échantillons d’essai congelés doivent être décongelés à température ambiante avant l’essai.
L'analyse des échantillons présentant une hémolyse sévère, une croissance bactérienne, ainsi que ceux conservés pendant une longue période sans congélation ni recongelation, n'est pas autorisée.

CONDUIRE L'ANALYSE
Préparation de solutions pour RPHA.
Ouvrir à sec les flacons contenant le sérum diagnostique de Salmonella adsorbé par le récepteur B et ajouter 1 ml de la solution de chlorure de sodium à 0,9% fournie, obtenant ainsi une dilution de 1:10, qui est une dilution de travail.
Un flacon ouvert contenant du sérum de diagnostic de Salmonella adsorbé à sec à une dilution de 1:10, fermé, peut être conservé à une température de 2 à 8 °C pendant un mois.
Diagnosticum est prêt à l’emploi. Avant ouverture, le flacon contenant le diagnosticum doit être soigneusement agité jusqu'à l'obtention d'une suspension homogène. Il est recommandé de répéter l'agitation pendant le fonctionnement.
Un flacon ouvert contenant du diagnosticum sous forme fermée peut être conservé à une température de 2 à 8°C pendant un mois.
Solution de chlorure de sodium à 0,9%. Prêt à l'emploi.

Conduite du RPGA.
Lors du contrôle d'un nombre quelconque de sérums analysés, il est obligatoire d'effectuer 1 série d'agglutinations avec du sérum diagnostique de Salmonella adsorbé par le récepteur B sec.
Pour réaliser la RPHA, un comprimé à usage unique pour les réactions immunologiques est utilisé. Préparer des dilutions en série au double des sérums analysés dans 0,05 ml de la solution de chlorure de sodium à 0,9 % fournie à partir de 1:10 à 1:2560 et 1 rangée de dilutions en série au double du sérum diagnostique de Salmonella adsorbé sur le récepteur B sec, en commençant par une dilution au 1:10, jusqu'au double du titre indiqué sur l'étiquette des flacons de ce sérum.
Ajouter 0,025 ml de diagnosticum dans chaque puits avec des dilutions de sérum.

Les contrôles obligatoires sont :
1. Contrôle du sérum diagnostique de salmonelle adsorbé par le récepteur
Vi sérum sec et analysé, qui est ajouté à une dilution de 1:10 dans un volume de 0,05 ml
dans deux puits témoins.
2. Vérification de l'absence d'agglutination spontanée du diagnosticum, pour laquelle 0,025 ml de diagnosticum sont ajoutés dans deux puits contenant 0,05 ml d'une solution de chlorure de sodium à 0,9%.
Le comprimé est secoué et placé pendant 1,5 à 2,0 heures dans un thermostat à une température de (37+1) °C.

COMPTABILITÉ DES RÉSULTATS
La réaction est prise en compte à l'aide du système des quatre croix :
4+ - tous les globules rouges sont agglutinés et recouvrent uniformément le fond du puits ;
3+ - presque tous les globules rouges sont agglutinés. Sur leur fond, il y a un anneau discret d'érythrocytes déposés et non agglutinés ;
3+ - avec un agglutinat uniforme au fond du puits se trouve un sédiment d'érythrocytes non agglutinés sous la forme d'un petit « anneau » ou « bouton » ;
1+ - la majorité des globules rouges sont non agglutinés et déposés sous la forme d'un petit « anneau » aux bords lisses ou d'un « bouton » au centre du fond du trou.
(-) - il n'y a aucun signe d'agglutination. Les globules rouges se déposent sous la forme d’un petit « anneau » aux bords lisses ou d’un bouton au centre du puits ou au fond du tube à essai.
Une réaction d'au moins 3+ est considérée comme positive.
Les résultats obtenus dans le RPGA peuvent être considérés comme fiables si le sérum diagnostique de salmonelles adsorbé par le récepteur B sec 1:10 a obtenu un résultat positif dans une dilution d'au moins 14 de leurs titres, et dans 2 puits avec le sérum analysé et avec le diagnostic Le sérum de Salmonella adsorbé sur le récepteur B est sec dans des dilutions de 1:10, il ne doit y avoir ni flocons ni sédiments ; dans des puits avec une solution de chlorure de sodium à 0,9% et un diagnosticum - la réaction est négative.
Le titre en anticorps du sérum analysé est considéré comme la dernière dilution du sérum, qui donne encore une agglutination positive des globules rouges.
Interprétation des résultats.
Les personnes qui présentent des anticorps contre l'antigène B à une dilution de 1:40 ou plus sont considérées comme suspectées de portage chronique de la bactérie typhoïde. Cependant, étant donné que le diagnostic ne peut être posé uniquement sur la base d'une étude sérologique, un examen bactériologique approfondi est nécessaire.

Précautions d'emploi

Le kit comprend du sérum de diagnostic sur le récepteur B adsorbé par Salmonella et inactivé à sec.
Les sérums à tester doivent être inactivés à 56°C pendant 30 minutes.
Les sérums à tester, ainsi que les réactifs, équipements et instruments en contact avec eux, peuvent constituer du matériel potentiellement infectieux et doivent être manipulés avec précaution :
- travailler avec des gants en caoutchouc ;
- lors du pipetage, il est nécessaire d'utiliser des appareils automatiques ;
- à la fin des travaux, traiter les sérums analysés ainsi que les réactifs et instruments en contact avec eux avec une solution désinfectante ;
- essuyer le matériel avec de l'alcool éthylique à 96 % avant et après utilisation.

Les résultats objectifs de l'analyse sont garantis si les conditions suivantes sont remplies :
- tous les réactifs du kit doivent être conservés à une température de 2 à 8 °C ;
- ne pas utiliser de réactifs périmés ;
- ne pas utiliser les réactifs du kit s'il n'y a pas de marquage approprié sur leur emballage ;
- pour réaliser le RPGA, utiliser les réactifs inclus uniquement dans ce kit.

Un test sanguin correctement effectué permet de détecter les agents responsables de diverses maladies complexes dans le corps dès les premiers stades de leur développement, et parfois même avant l'apparition des symptômes cliniques de la maladie. Très souvent, les médecins prescrivent aux patients un test de réaction d'agglutination. Nous verrons ensuite de quoi il s'agit : un test sanguin RPGA, quand est-il utilisé et que peut-il nous dire ?

Principe de fonctionnement

La réaction d'hémagglutination indirecte (également appelée réaction d'hémagglutination passive, également connue sous le nom de RPHA, RNGA) se produit lorsque les globules rouges qui ont adsorbé un antigène sont exposés à un sérum immunitaire correspondant à l'antigène donné.

Des études ont prouvé que cette méthode est nettement supérieure aux autres tests sérologiques en termes de spécificité et de sensibilité. Par conséquent, il est souvent utilisé pour détecter des maladies causées par des bactéries ou des rickettsies. Les antigènes pour une telle analyse peuvent être des extraits bactériens, des antigènes purifiés de divers microbes et des composants de vaccins bactériens.

Une fois qu'une bactérie pathogène pénètre dans le corps humain, elle commence à produire des anticorps spécifiques et non spécifiques, formant ainsi une réponse immunitaire spécifique. Dans le cas de la syphilis, dont l'agent causal est Treponema pallidum, qui appartient aux spirochètes à Gram négatif, des anticorps non tréponémiques ou tréponémiques sont produits dans le sang humain. Les tests de diagnostic en laboratoire reposent sur leur identification, qui doit confirmer ou infirmer la présence de l'agent causal du virus dans l'organisme.

Avec le RPHA, les globules rouges, dont la surface a adsorbé les antigènes du tréponème pallidum, lorsqu'on ajoute du sérum contenant des anticorps contre le tréponème provenant de matériel provenant d'une personne infectée par la syphilis, se collent les uns aux autres, c'est-à-dire qu'ils s'agglutinent.

Fiabilité de l'étude

Il est important de se rappeler que les anticorps dirigés contre le spirochète pâle commencent à apparaître dans le corps des personnes infectées 2 à 4 semaines après l'infection et, dans certains cas, cette période peut s'étendre jusqu'à 6 semaines.

Pour cette raison, la sensibilité de l'analyse de la RPHA au stade primaire de la maladie est d'environ 86 %, ce qui est nettement inférieur à la précision du diagnostic des patients aux deux stades suivants. La sensibilité de l'analyse pour ces patients, ainsi que pour les porteurs de syphilis latente, atteint 99-100 %.

Cependant, la réaction d'hémagglutination passive a une spécificité très élevée, qui atteint un niveau de 96 à 100 %.

Ceci permet d'utiliser cet examen pour confirmer le diagnostic en cas de réaction positive issue d'une étude préliminaire non tréponémique, par exemple une réaction de microprécipitation d'un cancer de la vessie.

Étant donné que la sensibilité des tests tréponémiques, y compris le RPGA, dépasse largement la sensibilité des méthodes non tréponémiques, de tels examens sont de plus en plus prescrits lors de la réalisation de tests de dépistage de la syphilis. Cependant, si une réaction positive à un test de dépistage est obtenue, une autre analyse spécifique (tréponémique), mais pas la RPGA, est nécessaire pour clarifier le diagnostic.

Transcription de l'analyse

Lorsque du sérum contenant des anticorps contre le tréponème provenant du matériel d'une personne infectée par la syphilis est ajouté au réactif avec lequel l'étude est réalisée, les globules rouges s'agglutinent, ce qui entraîne une précipitation.

Le nombre de globules rouges collants est influencé par le niveau d’anticorps dans le sérum. Par conséquent, l'hémagglutination passive montre non seulement la présence d'anticorps, mais permet également de déterminer leur quantité. Le résultat de l'étude est présenté par le niveau de titre d'anticorps.

Une réaction positive indique la présence de l’agent pathogène dans le corps du patient. Cependant, au cours du processus de diagnostic, des réactions faussement positives peuvent survenir, dont le nombre ne dépasse pas statistiquement le niveau de 0,05 à 2,5 % du nombre total d'études.

Une réaction positive à la RPHA chez les personnes non infectées par la syphilis peut survenir si :

maladies systémiques du tissu conjonctif,
dans le sang du patient, des anticorps dirigés contre des agents pathogènes similaires à Treponema pallidum,
pathologies physiologiques, telles que l'infarctus du myocarde,
hépatite B ou C,
maladies oncologiques,
typhus, leptospirose, tuberculose,
Infections au VIH,
borréliose d'étiologie transmise par les tiques,
blessures ou fractures importantes,
grossesse,
en cas d'injection de stupéfiants.

Dans la plupart des cas, les réactions faussement positives s'accompagnent d'un titre faible. Des titres élevés sont typiques du stade secondaire de la maladie et de la syphilis auparavant latente. Cependant, ils peuvent également apparaître lors d'une réaction faussement positive chez des patients atteints de tumeurs malignes.

Chez les personnes ayant eu au moins une fois la syphilis, la réaction à la RPHA reste positive pour le reste de leur vie.

De rares exceptions peuvent être les situations dans lesquelles la maladie a été identifiée à un stade précoce de développement, après quoi un traitement intensif et efficace a été effectué. Par conséquent, l'analyse RPGA ne peut pas être utilisée pour évaluer la dynamique de guérison ou le diagnostic comparatif des stades précoces ou tardifs de la maladie.

Si une réaction positive est obtenue, il est nécessaire d'examiner les membres de la famille du malade et les personnes ayant eu des contacts sexuels avec lui.

Une réaction négative peut être obtenue dans les cas suivants :

la personne n'a pas la syphilis,
le sang n'a pas été prélevé correctement pour les tests,
2 à 4 semaines se sont écoulées depuis l'infection et la production d'anticorps n'a pas encore commencé.

Dans tous les cas, le résultat de l'étude doit être évalué en combinaison avec des indicateurs de laboratoire et anamnestiques supplémentaires.

A qui s’adresse l’analyse ?

Un médecin peut orienter les patients vers un don de sang pour la RPHA dans les cas suivants :

en présence de manifestations cliniques de la syphilis : éruptions cutanées ulcéreuses, hypertrophie des ganglions lymphatiques, alopécie diffuse et autres,
si vous soupçonnez une éventuelle infection en cas de contact avec des personnes déjà malades,
les donneurs souhaitant donner du sang,
les personnes subissant des examens préventifs annuels ou délivrant des certificats de santé,
les patients avec un test de dépistage positif,
avant une hospitalisation dans un hôpital pour patients hospitalisés,
lors de l'examen préopératoire,
identifier les agents pathogènes de la salmonellose, de la diphtérie, de la dysenterie en utilisant la méthode RPGA avec le diagnosticum approprié.

Procédure de réalisation de l'étude

Un échantillon de sang veineux donné par le patient est envoyé pour analyse. Afin de ne pas recevoir de conclusion erronée, le patient doit être responsable de la préparation de l'analyse. Pour que les résultats des tests soient fiables, vous devez respecter les recommandations suivantes :

Le test ne doit être effectué qu’à jeun.
Le jour de l'analyse, vous pouvez boire de l'eau minérale sans gaz en quantité minime.
Il ne faut pas fumer au moins 30 minutes avant l'analyse, mais il vaut mieux augmenter ce temps à plusieurs heures.
Une interdiction directe est imposée sur la consommation de boissons alcoolisées.
Les patients qui doivent prendre régulièrement des médicaments doivent en informer le médecin qui les oriente pour un examen.
Si vous ne vous sentez pas bien ou si vous ne vous sentez pas bien, vous devez en informer l'infirmière qui effectue la prise de sang ou le médecin de la clinique externe où vous devez passer le test.

Soyez responsable non seulement de la question de savoir où se faire tester, mais également de la préparation à l'examen.

Il ne faut pas penser qu'une étude telle que la RPGA peut être réalisée uniquement pour identifier l'agent causal de la syphilis dans le corps.

Une analyse avec un salmonella diagnosticum permet de détecter la présence d'une infection dans le système digestif - la salmonelle. À partir du quatrième jour après l'infection, l'organisme produit des anticorps contre les antigènes de Salmonella, que la méthode RPGA permet d'identifier. Un résultat négatif indique l'absence d'infection, et un titre positif, augmentant de 1 : 200 à 1 : 800 en phase aiguë, indiquera sa présence.

La méthode de réalisation du RPGA avec un marqueur diphtérique permet de diagnostiquer la diphtérie et d'évaluer l'immunité après vaccination. Les anticorps commencent à être produits par le système immunitaire dès le lendemain de l’infection et restent dans l’organisme pendant plusieurs semaines. La sensibilité de cette analyse est supérieure à la méthode de recherche bactériologique. Un titre de 1:80 confirme la présence de diphtérie dans l'organisme.

Le marqueur de dysenterie pour RPHA détecte avec la plus grande précision la shigellose (dysenterie bactérienne), même par rapport à la méthode de diagnostic en laboratoire par culture bactérienne. Si le patient ne reçoit pas un traitement de qualité, la maladie évolue vers un processus chronique, au cours duquel des rechutes surviennent souvent. L'analyse permet de diagnostiquer les phases aiguës et chroniques de la diarrhée, d'identifier l'agent causal de la dysenterie, de distinguer la shigellose bactérienne du cancer colorectal, des troubles endocriniens ou de l'inflammation du côlon. Une réaction négative indique l'absence du bacille, et sa présence est confirmée par un titre de 1 :80 pour les enfants ou 1 :320 pour les adultes.

Effectuer un test avec un marqueur de rougeole vous permet de déterminer la rougeole. Un tel examen peut devenir une alternative à l’analyse RTGA souvent réalisée pour diagnostiquer la rougeole.

Alors, test sanguin RPGA, qu'est-ce que c'est ? En résumé, nous pouvons affirmer avec certitude qu'il s'agit d'une méthode moderne, très sensible et fiable pour diagnostiquer diverses maladies d'étiologie bactériologique.

En contact avec

DIAGNOSTICUM (grec, diagnostikos capable de reconnaître) - suspensions de micro-organismes neutralisés utilisées comme antigènes pour les réactions sérologiques. Le danger de travailler avec des cultures vivantes, leur capacité à varier et la présence de larges liaisons antigéniques rendent conseillé l'utilisation de D. - des préparations plus standards et homogènes contenant certains composants antigéniques.

Avec l'aide de D., les réactions d'agglutination, l'hémagglutination passive (indirecte) (RPHA) et autres sont utilisées pour identifier des anticorps spécifiques dans les sérums de personnes et d'animaux afin de poser un diagnostic et d'étudier l'état immunitaire du corps.

D. est particulièrement largement utilisé dans les études de laboratoire sur les infections intestinales. Cependant, la structure antigénique commune des bactéries intestinales détermine la présence de réactions croisées et nécessite une détection différenciée des anticorps. À cette fin, une suppression sélective d'antigènes individuels est effectuée : à l'aide de phénol ou de formol, la O-agglutinabilité est supprimée, comme le suggèrent Felix et Olitzki (A. Felix, L. Olitzki, 1928). Par traitement à l'alcool selon la méthode de Wien et Sontag ou par chauffage selon Kauffmann, on obtient des O-diagnosticums avec antigène flagellaire inactivé. Encore plus prometteuse est l’utilisation des mono diagnosticums, dont le principe a été développé par F. G. Bernhof (1944). Ces médicaments ne contiennent qu’un seul composant antigénique et n’interagissent qu’avec certains anticorps spécifiques.

La possibilité de préserver les propriétés des bactéries D. par leur lyophilisation a été démontrée (voir).

D., utilisés pour le sérodiagnostic de diverses infections, sont fondamentalement similaires, cependant, certains types de ces médicaments ont certaines spécificités.

Il est généralement admis que le RPGA est plus sensible et spécifique que l'agglutination bactérienne. Des érythrocytes formalisés sensibilisés avec des antigènes obtenus par les méthodes Boivin et Westphal sont utilisés comme antigènes dans le RPGA.

Il est également possible d'utiliser les érythrocytes D. pour détecter l'antigène dans les tissus, les sécrétions des patients, les extraits de diverses substances, etc. Dans ces cas, des érythrocytes sensibilisés par des anticorps sont utilisés - « anticorps diagnostics ».

Les virus D. sont principalement utilisés dans les réactions de fixation du complément (CRF), de RTGA et de neutralisation. Ils sont préparés à partir de liquides de culture contenant des virus traités (inactivés) de diverses manières.

Une brève description des principaux D. et de la portée de leur application est présentée dans le tableau.

Il existe également des médicaments expérimentaux utilisés dans les travaux scientifiques : érythrocytes colidiagnosticums, érythrocytes diphtériques D., antigènes hémagglutinants des virus des oreillons, antigène hémagglutinant de la rougeole, etc.

Diagnostics	une brève description de	But d'utilisation (le sérum du sujet est utilisé)
Diagnostics bactériens
Diagnosticums à partir de bactéries de la famille intestinale : Shigella Flexner, Sonne, Newcastle ; Salmonella typhus (OH, O), paratyphoïdes A et B, choléra su is, typhimurium, enteritidis	Suspension microbienne (3 milliards de corps microbiens dans 1 ml), inactivée avec une solution de formaldéhyde à 0,4-0,5 %	Déclaration d'une réaction d'agglutination pour clarifier le coin, diagnostic de la maladie
Salmonella O-diagnosticums (2, 4, 7, 8, 9 et 3, 10)	Suspension microbienne contenant un antigène O partiel (3 milliards de corps microbiens dans 1 ml), obtenue à partir de souches sélectionnées, inactivée avec une solution de glycérol à 15 %	Mise en place d'une réaction d'agglutination pour détecter les O-anticorps de la salmonellose
Salmonella H-monodiagnosticums (antigènes a, b, c, d, eh, c, k, lv, gm, p, st et deuxième phase - 1, 2, 5, 6, 7)	Suspension microbienne contenant des composants de l'antigène flagellaire des 1ère et 2ème phases (3 milliards de corps microbiens dans 1 ml), obtenue à partir de souches sélectionnées, inactivée avec une solution de formol à 0,5%	Réalisation d'une réaction d'agglutination pour détecter les anticorps H à des fins de diagnostic et pour établir des antécédents de maladie
Vi-diagnosticum	Suspension microbienne (3 milliards de corps microbiens dans 1 ml) provenant de souches contenant du facteur Vi, traitée avec une solution de formol à 0,4 % et une solution de chlorure de calcium à 0,6 %	Mise en place d'une réaction d'agglutination pour détecter le portage de la bactérie typhoïde
Diagnostic unifié de la brucellose	Une suspension de Brucella dans une solution de chlorure de sodium à 12 %, colorée en bleu et inactivée avec une solution de phénol à 0,5 %	Mise en scène d'une réaction d'agglutination (réaction de Wright et réaction de Huddleson pour identifier les personnes et les animaux infectés - voir Brucellose, méthodes de recherche)
Diagnostic de la tularémie	Suspension microbienne (25 milliards de corps microbiens dans 1 ml) de la souche vaccinale, inactivée avec une solution de formaldéhyde à 0,5 %	Mise en place d'une réaction d'agglutination volumétrique de gouttelettes sur verre pour le sérodiagnostic et étude de l'état immunitaire des personnes vaccinées
Diagnostic de la leptospirose	Suspension microbienne lyophilisée de 11 souches des sérotypes les plus courants	Déclaration du RSC pour confirmer le coin, diagnostic de la maladie
Diagnostics des rickettsies	Antigènes corpusculaires - une suspension de rickettsies cultivées dans les sacs vitellins d'embryons de poulet ou de matériel de rickettsies pulmonaires provenant de rongeurs infectés, traitées à l'éther, à la célite ou par centrifugation différentielle	Mise en place d'une réaction d'agglutination pour le diagnostic différentiel des infections à rickettsies
Diagnostics érythrocytaires
Diagnostics érythrocytaires de Shigella Flexner - Sonne	Érythrocytes formalisés sensibilisés aux antigènes de Boivin, Westphal, etc.	Déclaration du RPGA pour clarifier le diagnostic clinique de la dysenterie
Érythrocytes Salmonella Vi-diagnosticum	Érythrocytes formalisés sensibilisés avec l'antigène Vi purifié	Déclaration du RPGA pour détecter le portage de la bactérie typhoïde
Érythrocytes Salmonella O-diagnosticums (1, 2, 12 ; 1, 4, 12 ; 6, 7 ; 6, 8 ; 1, 9, 12 ; 3, 10 et complexe)	Suspension à 1% d'érythrocytes formolisés sensibilisés aux antigènes Boivin, Westphal, etc.	Déclaration du RPGA pour clarifier le diagnostic clinique de la maladie
Diagnostic érythrocytaire de la tularémie lyophilisée	Globules rouges lyophilisés formalisés sensibilisés à l'antigène de la tularémie	Déclaration du RPGA pour clarifier le diagnostic clinique de la tularémie, ainsi que la réaction de neutralisation des anticorps pour détecter : l'antigène
Diagnostic viral
Antigène du virus de la vaccine	Préparation sèche de virus de la vaccine vivant cultivé sur membrane chorion-allantoïque d'embryons de poulet	Déclaration du RPGA pour la détection des antihémagglutinines chez les patients et les personnes vaccinées
Antigène spécifique de l'adénovirus	Préparé en cultivant le virus de type 6 dans une culture de cellules A-1 continues (antigène commun à tous les adénovirus)	Test de RSC pour détecter les anticorps fixateurs de complément dans le sérum du patient
Diagnostic de l'encéphalite à tiques et des maladies étiologiquement similaires		Relevé de RSC et radiographie pour clarifier le coin, diagnostic de la maladie
Antigène de l'ornithose	Préparation sèche à partir de sacs vitellins bouillis contenant des virus d'embryons de poulet, extraits à l'éther, précipités à l'acétone et inactivés au merthiolate	Déclaration du RSC pour le diagnostic de l'ornithose chez l'homme, les oiseaux et les animaux
Diagnostic de la grippe sèche	Liquide allantoïque d'embryons de poulet en développement infectés par l'une des souches du virus grippal de type A, B ou C, inactivé par le formol, le merthiolate. En raison de la variabilité de la structure antigénique du virus de la grippe, des changements fréquents dans les souches de production sont prévus	Relevé de radiographie pour clarifier le diagnostic clinique de la maladie
Parainfluenza diagnosticum type 1, 2, 3 pour RTGA, sec	Fluide de culture (reins d'embryons humains) contenant une des souches du virus parainfluenza, traité au Tween-80, à l'éther et au merthiolate	Relevé de radiographie pour clarifier le coin, diagnostic de la maladie

Bibliographie : Zuev A. S. Bacterial vi-diagnosticum pour l'identification des porteurs chroniques de bactéries typhoïdes, Zhurn, mikr., epid, i immun., n° 2, p. 51, 1959, bibliogr.; Zuev A. S., Novoselova A. I. et Likina I. V. Développement d'une méthode de production d'O-diagnosticums et de N-monodiagnosticums et leur utilisation dans le sérodiagnostic de la salmonellose, ibid., n° 3, p. 42, 1956 ; Immunologie et prévention des infections intestinales, éd. S.I. Didenko, p. 180, M., 1962 ; Karalnik B.V. Diagnostics érythrocytaires, M., 1976; Guide du diagnostic microbiologique des maladies infectieuses, éd. K.I. Matveeva, p. 172, M., 1973 ; Subbotina Yu. et Dr. Diagnostic sérologique de la salmonellose et des liaisons antigéniques dans les réactions avec les O-diagnosticums érythrocytaires et bactériens, Zhurn, mikr., epid, i imm., n° 3, p. 19, 1970, bibliogr.

L.B. Bogoyavlenskaya.

Certificat d'immatriculation n° RZN 2016/3905 du 04/04/2016

L'ensemble de réactifs "Diagnosticum erythrocyte salmonella Vi-antigen for RPHA" (SED-Vi) est destiné à la détection d'anticorps dirigés contre l'antigène Vi de l'agent causal de la fièvre typhoïde dans le sérum sanguin humain par réaction d'hémagglutination passive (RPHA ).

En présence d'anticorps dirigés contre l'agent causal de la fièvre typhoïde, on observe une hémagglutination des érythrocytes de poulet sensibilisés à l'antigène Vi, ce qui conduit à la formation d'un « parapluie » d'érythrocytes déposés au fond des puits en forme de U de la plaque. . En l'absence d'anticorps contre l'agent causal de la fièvre typhoïde, les globules rouges déposés forment un « point ».

Diagnosticum érythrocytes salmonelles Antigène Vi, sec 6% (EDS)	Érythrocytes formalisés de poulet sensibilisés à l'antigène Vi de S. typhi. Masse hygroscopique sèche de couleur brune. Après dissolution, la suspension est de couleur rouge-brun.	1 fl., à partir de 0,6 ml
Sérum de diagnostic de Salmonella adsorbé, récepteur Vi, sec (dilué 1:20, (K+))	Sérum de lapin Salmonella adsorbé, récepteur Vi, dilué 1:20. Masse poreuse hygroscopique sèche de couleur blanche. Après dissolution, c'est un liquide transparent jaunâtre ou incolore.	1 fl., à partir de 0,3 ml
Diluant pour échantillon de test (RSD)	Liquide transparent de couleur bleu-violet.	1 once liquide, 10 ml
Solution tampon phosphate (PBS)	Liquide transparent et incolore.	1 once liquide, 10 ml
Comprimé polymère à usage unique pour réactions immunologiques	Comprimé polymère à usage unique pour réactions immunologiques en polystyrène transparent incolore.	1 PC.

Le diagnosticum doit être agglutiné dans le RPHA avec du sérum diagnostique de salmonelle adsorbé, récepteur Vi, sec (dilution 1:20), au titre indiqué sur l'étiquette du sérum. Le niveau conditionnel des caractéristiques diagnostiques du sérum sanguin de personnes en bonne santé doit être considéré comme une dilution sérique ne dépassant pas 1:20. Le temps d'analyse est de 3040 minutes. Le kit est conçu pour tester 42 sérums sanguins dans l’option dépistage ou 10 sérums sanguins dans l’option titrage.

Le kit est destiné uniquement à un usage diagnostique in vitro. Les substances incluses dans le kit sont inactivées et sûres. Lorsque vous travaillez avec le kit, vous devez vous conformer aux spécifications SP 1.3.2322-08 et SanPiN 2.1.7.2790-10.

Équipements, matériaux, solutions :

Distributeurs de pipettes à 1 canal avec volume de dosage variable de 5 à 40 µl ; 40 à 200 µl ; 200 à 1 000 µl et 1 000 à 5 000 µl ;
Distributeurs de pipettes à 8 ou 12 canaux avec volumes de dosage variables de 5 à 40 µl et de 40 à 200 µl ;
eau distillée (GOST 6709-72).

Les échantillons de sérum sanguin étudiés sont conservés à une température de 2 à 8 °C pendant 3 jours maximum à compter du moment du prélèvement sanguin. Le lactosérum peut être conservé congelé à une température ne dépassant pas moins 18 °C pendant 1 an maximum. Avant utilisation, les échantillons sont décongelés à une température de 16 à 25 °C et mélangés par agitation. La recongélation n'est pas autorisée. Les échantillons présentant une croissance bactérienne et une hémolyse ne doivent pas être utilisés. Avant d'effectuer la réaction, les sérums testés sont chauffés à 56 °C pendant 30 minutes.

Préparer une solution de travail de sérum diagnostique de Salmonella adsorbé, récepteur Vi, sec (dilution 1:20) à partir de 0,3 ml (K+). Pour ce faire, ajoutez 0,3 ml de solution tampon phosphate (PBS) au contenu du flacon contenant du K+. La quantité restante de sérum peut être aliquotée et conservée congelée à une température ne dépassant pas moins 18°C pendant 6 mois maximum.

Pour préparer une dilution de travail de la suspension d'érythrocytes de diagnostic de Salmonella, 0,6 ml d'eau distillée est ajouté au contenu du flacon avec 6 % de SED sec et laissé hydrater pendant 2 heures à une température de 16 à 25 °C. Ensuite, 2,4 ml de solution tampon phosphate (PBS) sont ajoutés à la solution. La solution de travail est conservée à une température de 2 à 8 °C pendant 1 mois maximum. La congélation n'est pas autorisée.

Les sérums sanguins destinés aux études de dépistage sont dilués dans les puits du comprimé comme suit :

des dilutions préliminaires au 1:20 sont préparées dans les premiers puits de la plaque en y ajoutant d'abord 190 µl de solution RIP, puis 10 µl des sérums à tester. Chaque sérum est ajouté avec un embout séparé et soigneusement pipeté (la couleur de la solution dans les puits après l'ajout des sérums doit passer du bleu-violet au vert) ;
des dilutions de dépistage au 1:40 sont préparées dans les seconds puits en y ajoutant d'abord 25 µl de solution PBS, puis 25 µl de sérums prédilués et en pipetant soigneusement.

A chaque réalisation de RPGA, il est nécessaire d'effectuer une détermination de contrôle du titre K+. Pour ce faire, ajoutez 50 µl de solution PBS dans 8 puits consécutifs. Ajoutez ensuite 50 µl de solution de travail K+ (1:20) dans le premier puits, pipetez-le soigneusement et transférez 50 µl dans les puits suivants, en obtenant des dilutions au 2 fois de 1:40 à 1:5120. 50 µl de solution PBS sont ajoutés à 4 autres puits pour surveiller l'EDS afin de détecter l'absence d'hémagglutination spontanée.

25 µl de SED sont ajoutés dans tous les puits de la plaque avec les dilutions de dépistage des sérums à tester (sauf les premiers contenant du RIP) et des contrôles. Remuer la suspension SED dans un flacon ou un bain avant utilisation ! Le comprimé est soigneusement agité et laissé à une température de 16 à 25°C pendant 30 à 40 minutes jusqu'à ce que les érythrocytes du contrôle se déposent complètement.

Le titrage des sérums à tester et de la solution de travail K+ est effectué en rangées courtes de la plaque. Une autre rangée courte est utilisée pour surveiller l’absence d’hémagglutination spontanée de l’EDS.

180 µl de solution RIP sont ajoutés dans les premiers puits des rangées courtes pour le titrage du sérum à tester. Ajouter 50 ul de solution PBS à tous les autres puits.

20 µl de sérums à tester sont ajoutés dans les puits avec la solution RIP (une dilution au 1:10 est obtenue). Chaque sérum est ajouté avec son propre embout et soigneusement pipeté (la couleur de la solution dans les puits doit passer du bleu-violet au vert). Ensuite, 50 µl sont transférés des premiers puits aux puits suivants des rangées, obtenant des dilutions au double de 1:20 à 1:1280. A la fin du titrage, des solutions dans un volume de 50 µl sont retirées des derniers puits.

Pour contrôler le diagnostic de l'absence d'hémagglutination spontanée, 50 µl de solution PBS sont ajoutés dans tous les puits d'une rangée courte.

25 µl de SED sont ajoutés dans tous les puits (sauf les premiers puits de chaque rangée pour les sérums à tester contenant du RIP). Remuer la suspension SED dans un flacon ou un bain avant utilisation ! Le comprimé est soigneusement agité et laissé à une température de 16 à 25°C pendant 30 à 40 minutes jusqu'à ce que les érythrocytes du contrôle se déposent complètement.

Les résultats sont pris en compte sur une échelle conventionnelle de quatre croisements. Le titre sérique est considéré comme sa dilution, qui donne une hémagglutination par au moins 3 (+++) croisements.

++++ (4+) - les érythrocytes agglutinés forment un « parapluie » inversé au fond du trou, ses bords tombent ;
+++ (3+) - les érythrocytes agglutinés forment un « parapluie » inversé au fond du trou, ses bords sont lisses ;
++ (2+) - avec les érythrocytes agglutinés, au fond du puits se trouve un sédiment sous la forme d'un petit « anneau » d'érythrocytes non agglutinés ;
+ (1+) - la plupart des globules rouges ne sont pas agglutinés et se déposent sous la forme d'un petit « anneau » ;
(-) - les globules rouges non agglutinés forment un « point » au fond du puits.

Un résultat positif est considéré comme une hémagglutination d'érythrocytes chargés en antigène Vi par au moins 3 croisements (+++).

Le contrôle qualité du diagnosticum est assuré par 4 puits de la rangée de contrôle, dans lesquels seules les solutions PBS et SED ont été ajoutées. Il ne devrait y avoir aucune hémagglutination spontanée dans ces puits - la réaction est négative (-). Dans le cas contraire, l'étude doit être répétée. Si une hémagglutination apparaît lors de la reclassification, le médicament n'est pas utilisé.

Les sérums avec un résultat négatif doivent être considérés comme ne contenant pas d'anticorps contre l'antigène Vi avec un titre diagnostique de 1:40 ou moins.

Les sérums qui donnent un résultat positif à une dilution de 1:40 doivent être retestés avec titrage du sérum pour établir son titre.

Le titre sérique est considéré comme sa dilution, qui donne une hémagglutination d'au moins 3 (+++) croisements.

Le contrôle qualité du diagnosticum est assuré par les puits de la rangée de contrôle EDS. Il ne devrait y avoir aucune hémagglutination spontanée dans ces puits - la réaction est négative (-). Dans le cas contraire, l'étude doit être répétée. Si une hémagglutination apparaît lors de la reclassification, le médicament n'est pas utilisé.