Examen bactériologique des selles à la recherche d'infections intestinales. L'une des méthodes les plus efficaces pour diagnostiquer les infections sexuellement transmissibles est la culture bactériologique.

ANALYSE BACTÉRIOLOGIQUE, yi-crobiologique. l'analyse permet de détecter différents types de micro-organismes et de déterminer leur type dans le matériau à examiner (dans le sol, l'eau, divers types de produits, compartiments animaux, etc.) ; consiste à étudier la biologie du microbe (ses propriétés morphologiques, biologiques et immunologiques), et pour les microbes pathogènes également à déterminer leur capacité à provoquer des maladies spécifiques chez les animaux de laboratoire. Tapoter. processus. L'étude de la morphologie des microbes est réalisée à l'aide d'un microscope, pour lequel le matériau à examiner est soumis à un prétraitement afin de rendre les microbes clairement visibles parmi la décomposition désorganisée dans laquelle ils se trouvent habituellement. Ceci est réalisé en colorant des préparations à partir du matériau étudié avec divers colorants naturels ou artificiels. Parce que les microbes morts se colorent 6"1 mieux, alors les médicaments sont préalablement soumis à ce qu'on appelle. fixation, c'est-à-dire traitement de divers types de physiques. et chimie. agents qui tuent rapidement le protoplasme - ■ chaleur, alcool, etc. Parfois le matériel est microcopié sans traitement préalable, lorsqu'il est nécessaire d'étudier au microscope les microbes vivants lors de l'analyse (observation de leur mobilité, rapport à O, etc.). Dans de tels cas, le médicament est préparé sous la forme de ce qu'on appelle. goutte suspendue. L'observation s'effectue soit de la manière habituelle, soit avec un champ de vision sombre du microscope. Lors de l'examen de la présence de protozoaires, toute l'analyse se limite à une seule microscopie, ce qui est considéré comme suffisant, car les méthodes de culture des protozoaires sont très complexes et ne sont pas encore largement répandues. En bactériologie, l’analyse ne s’arrête pas à l’étude de la forme du microbe. La variabilité inhabituellement grande des bactéries avec les moindres changements dans l'environnement se reflète principalement dans leur forme ; étudier une seule forme de microbes conduirait à des erreurs grossières dans la détermination de leur type. Par conséquent, pour juger du type de microbe, des connaissances sont nécessaires, en plus de la morphologie, et de toute sa biologie. caractéristiques, sa biochimie. et les propriétés immunologiques, et pour les propriétés pathogènes - et le résultat d'une expérience sur un animal ; Seule la totalité de toutes ces données permet de b. ou nous pouvons identifier avec précision un microbe particulier, déterminer son type et son type. C’est à cela que sert toute la technologie bactériologique. Culture de microbes sur des substrats nutritifs artificiels pour étudier leur biochimie. les propriétés sont le point le plus important de B. a. Actuellement, une telle culture se heurte à un certain nombre de difficultés. De nombreux microbes ne peuvent pas encore être obtenus dans des cultures artificielles. L'obstacle réside dans un certain nombre de conditions consistant dans l'extraordinaire diversité du monde microbien, dans la spécificité prononcée des produits biochimiques. fonctions des microbes et leur variabilité qui en résulte. Notre méconnaissance de bon nombre de ces conditions ne nous permet pas de sélectionner des milieux nutritifs qui conviendraient toujours. Néanmoins, c'est la culture des microbes dont nous disposons qui constitue la principale méthode de leur B. a. À l'heure actuelle, l'époque de B. a. commence par l'obtention de microbes individuels à étudier dans des cultures pures, c'est-à-dire dans des cultures constituées d'un type de microbe, sans mélange d'aucun autre. Ceci est obtenu grâce au fait que le matériau à étudier est réparti à la surface de milieux nutritifs solides. Cette répartition vise à séparer les microbes les uns des autres. Après un certain temps, le plus souvent après une journée, des amas de microbes se forment dans les zones du substrat où se trouvent les cellules microbiennes, c'est-à-dire n. colonies d'un microbe envahi. Ces colonies de nombreuses espèces microbiennes ont une forme très caractéristique, qui sert de première orientation dans la composition de la flore microbienne. Les colonies individuelles sont prélevées et transférées dans des milieux nutritifs appropriés pour une culture ultérieure. On suppose que chaque colonie se développe à partir d’une seule cellule ; mais cela n'arrive pas toujours, et récemment, la méthode d'obtention de colonies à partir d'une cellule microbienne connue est devenue de plus en plus pratique. Cette séparation du microbe s'effectue sous contrôle oculaire au microscope à l'aide d'un appareil appelé micromanipulateur. Parce que le matériel à examiner contient un grand nombre de microbes différents, mais il est nécessaire d'en isoler un spécifique, puis dans de tels cas, des milieux nutritifs spéciaux sont utilisés. Ces derniers contiennent soit des produits chimiques. substances qui interagissent les unes avec les autres sous l'influence de la croissance microbienne, qui est détectée par une manifestation facilement accessible, par exemple un changement de couleur, une précipitation ou une dissolution de sédiments (Endo, Drigalsky, craie, sang), ou ces environnements sont connus pour favoriser la croissance du microbe souhaité et supprimer la croissance des microbes qui l'accompagnent, par exemple, un milieu d'enrichissement pour la typhoïde et la diphtérie. Ce n'est qu'après un tel prétraitement que l'on obtient des cultures pures. Dans les cas où le microbe souhaité se trouve dans la matière source en très petites quantités et est difficile à cultiver directement, ils ont recours à l'expérimentation animale (à confirmer). Le matériau est injecté à l'animal et, après cela, la pathologie caractéristique de ce microbe se développe. les changements mettent en évidence une culture pure. Ayant reçu une culture pure, ils commencent à étudier la biochimie. caractéristiques de ce microbe. Étant donné que la composition des milieux nutritifs est très complexe, pour étudier la biochimie, diverses substances chimiquement plus simples sont ajoutées aux milieux, dont les changements sous l'influence de la croissance microbienne peuvent facilement être détectés en ajoutant un indicateur - tournesol, neutre, etc. , les mono-, di-, polysaccharides et alcools polyhydriques, ainsi que la gélatine et le sang (érythrocytes) servent à cet effet. Sur la base des changements dans l'une ou l'autre de ces substances, ils concluent des conclusions biochimiques. caractéristiques de ce microbe. La méthode immunologique, basée sur la capacité de l'organisme animal à réagir très spécifiquement à l'administration parentérale de protéines étrangères par la formation et l'accumulation de diverses protéines dans le sang, revêt une importance capitale pour déterminer le type de microbe. n. anticorps. Le sérum sanguin de ces animaux sert de réactif. Dans ce document, la présence de ces anticorps peut être facilement détectée par un certain nombre de réactions simples. Certaines de ces réactions sont devenues très répandues et sont obligatoires pour l’identification des espèces microbiennes. Ces réactions sont l’agglutination, la précipitation et la réaction de rejet du complément. Pour les microbes non pathogènes B. a. c'est peut-être la fin. Pour les microbes pathogènes, une expérimentation sur un animal est également nécessaire, notamment lorsqu'une nouvelle espèce est découverte. L’idéal pour déterminer tout microbe pathogène est d’obtenir un échantillon pathologique provenant d’un animal approprié. changements provoqués par ce microbe dans la nature. conditions. Cependant, notre connaissance des conditions nécessaires à une telle expérience est loin d’être complète, c’est pourquoi les expériences échouent souvent. Ensuite, pathologiste. les données obtenues grâce à l'expérience ne sont pas toujours fiables, car l'état de santé apparent de l'animal ne dit rien sur les infections et autres maladies dont il a souffert ; les changements détectés peuvent être le résultat de maladies antérieures. Toutes ces considérations nous obligent à être très prudents quant aux résultats obtenus lors de l’expérience et à ne jamais nous contenter d’une seule expérience réussie. Néanmoins, dans les cas où la réaction d'un animal expérimental à l'égard d'un microbe donné est strictement définie et constante (comme, par exemple, l'attitude d'un cobaye face à la diphtérie ou à la tuberculose, ou d'un lapin face à la variole et à la rage ), alors une expérimentation sur un animal est obligatoire. B. une. sans une telle expérience, ce n’est pas assez convaincant. Dans certains cas, en cas de réussite d'une expérience, il est nécessaire d'isoler dans une culture pure le microbe qui a servi à l'expérience et de l'identifier avec celui d'origine. Cela est nécessaire car souvent l'introduction de matières étrangères dans un organisme animal réveille les processus pathogènes qui y sont en sommeil et provoque la généralisation de souffrances limitées, augmentant l'activité des microbes qui s'y trouvent. Lorsqu’on isole une culture pure, il faut donc garder à l’esprit que ce n’est pas le microbe originel qui peut être isolé, mais un microbe qui a été accidentellement présent dans l’organisme. De plus, le sang de nombreux animaux apparemment sains contient divers microbes, qui peuvent également être isolés et induire le chercheur en erreur. Schéma général du cours de B. a. peut se présenter sous la forme suivante : 1) réalisation de préparations à partir du matériau à examiner ; les réparer; 2) microscopie a) non colorée, b) colorée ; 3) semis sur plaques de gélose pour isoler une culture pure ; si nécessaire, puis après semis préalable sur substrat sélectif ou enrichissant ; 4) biochimique analyse; 5) réactions immunitaires ; 6) expérimenter sur des animaux. L’analyse biologique a pour but, outre de déterminer le type de bactérie, d’établir sa place dans la taxonomie des microbes. Cependant, la taxonomie des microbes n’est pas encore suffisamment développée, ou plutôt, il existe plusieurs taxonomies, très incomplètes, construites sur des fondements différents. Tout cela complique la précision de l’analyse. En 1917, des microbiologistes américains créèrent une commission spéciale et développèrent une taxonomie des bactéries, basée sur Ch. arr., sur leurs caractéristiques et propriétés immunobiologiques trouvées dans les cultures. Cette commission a examiné les caractéristiques de tous les microbes connus dans le sens ci-dessus, et les résultats de ses travaux ont été publiés. Toutes les publications sont désormais en anglais. langue les œuvres adhèrent déjà à la nomenclature adoptée dans ce manuel. Lit. : Zlatogorov S.I., La doctrine des micro-organismes, P., 1914 ; T a r a s e v i h L. A., Medical Microbiology, Kiev, 1910 ; Omelyan-sk et y V.L., Fondements de la microbiologie, M.-L., 1926 ; K o 1 I e W. u. Wassermann A., Manuel d. chemin. Mikroorg., V. I, 2 Ausg., Iéna, 1912 ; K o 1 m e r J., Infection, immunité a. thérapie biologique, L., 1924 ; Bergey H., Manuel de bactériologie déterminative, L., 1927 ; P a r k W. a. Williams A., Microorganismes pathogènes, N. Y., 1925 ; In e s s o n A., Technique microbiologique, P., 1925 ; Wadsworth A., Méthodes standard, N. Y., 1927.A. Chelyshie.

L’examen bactériologique classique constitue la référence en matière de diagnostic microbiologique.

Le but de la recherche bactériologique est d'isoler une culture pure du pathogène et de l'identifier.

Algorithme de recherche bactériologique :

Microscopie primaire du matériau étudié (étape facultative, selon la nature du matériau) ;

Semis primaire pour isoler une culture pure ;

Accumulation de culture pure ;

Etude des propriétés biologiques complexes de la culture isolée ;

Identification finale du pathogène.

1er jour d'étude

1. Microscopie primaire

Le résultat de la microscopie primaire donne une idée approximative de la présence de diverses formes morphologiques de micro-organismes dans le matériel clinique, et permet également leur identification primaire par propriétés morphologiques et tinctoriales et la sélection des milieux pour l'inoculation primaire.

Écoulement purulent - une microscopie primaire est requise.

Liquide céphalo-rachidien - une microscopie primaire du sédiment est requise.

Crachats - la microscopie primaire est réalisée à partir de dilutions de 10 4 -10 5.

Prélèvements de la gorge et du nez - la microscopie primaire n'est pas effectuée.

Sang - la microscopie primaire n'est pas réalisée.

Fèces - la microscopie primaire n'est pas effectuée.

2. Semis primaire

Le matériel à tester après ou sans microscopie primaire (fèces, urines, prélèvements nasaux et pharyngés, sang) est inoculé sur des milieux appropriés pour isoler une culture pure :

Bouillon sucré, gélose au sang - pour les streptocoques ;

Gélose jaune-sel, gélose au sang - pour les staphylocoques ;

Milieu Endo - pour les bactéries de la famille des Enterobacteriaceae ;

MPA (gélose à la peptone de viande) - pour les bactéries à Gram négatif ;

MPA (ensemencement selon la méthode Shukevich) - pour isoler Proteus ;

Milieu Kitta-Tarozzi - pour isoler les anaérobies ;

Milieu de Sabouraud - pour isoler les champignons.

Le semis est la première étape de l'examen bactériologique (si une microscopie primaire n'est pas réalisée).

Le semis s'effectue de la manière suivante :

Semer en trait et tirer la boucle. Le matériau est prélevé avec une anse bactériologique calcinée et le champ supérieur de la cupule est densément inoculé d'une strie. Ensuite, la boucle est à nouveau calcinée et amenée dans un secteur densément ensemencé et 2-3 lignes verticales sont tracées sur toute la coupe. Après cela, la coupelle est retournée, le secteur densément ensemencé reste sur le champ inférieur de la coupelle. La boucle est à nouveau chauffée et le semis est réparti sur la tasse en 2-3 mouvements horizontaux.

Semer à la spatule. Le matériau est appliqué sur la surface du support à l'aide d'une spatule ou d'une pipette, puis dispersé sur toute la surface à l'aide d'une spatule.

Semer avec un écouvillon. Pour l'inoculation, un écouvillon contenant le matériel d'essai est placé dans une tasse et son contenu est frotté dans le milieu nutritif dans un mouvement circulaire.

Semis par secteurs. Avec ce semis, le fond de la coupelle est dessiné en secteurs, le semis s'effectue avec des mouvements pointillés du bord de la coupelle vers le centre et le long des secteurs.

Jour 2 de l'étude

1. Enregistrez la croissance sur un milieu nutritif comme étant homogène ou hétérogène.

2. Réaliser une description des biens culturels.

Algorithme de description des colonies

À la suite de la croissance sur un milieu nutritif, des colonies (descendants d'une cellule) se forment. Les colonies isolées sont sélectionnées et étudiées - commence la deuxième étape de l'étude, visant à étudier les propriétés culturelles des bactéries. La connaissance de ces propriétés est nécessaire pour identifier la culture pure résultante, puisque chaque type de micro-organisme, lorsqu'il se développe sur un certain milieu nutritif, correspond à certaines propriétés culturelles.

Etude des colonies :

Macroscopiquement : à l'œil nu en lumière transmise et réfléchie ;

Au microscope : à faible grossissement d'un système de microscope sec.

En lumière transmise, ils étudient :

La taille des colonies (grandes, moyennes, petites, naines) ;

Forme de la colonie (régulière, irrégulière, ronde) ;

Transparence des colonies (transparente, opaque).

En lumière réfléchie, déterminez :

Couleur (incolore ou coloré) ;

La nature de la surface (lisse, bosselée, brillante, rugueuse) ;

La hauteur des colonies au-dessus de la surface du milieu (déprimée, plate, surélevée).

Évaluer au microscope :

Bord (lisse, irrégulier) ;

Structure (homogène, inhomogène).

L'étude des colonies se termine par la préparation d'un frottis, la coloration de Gram et la microscopie.

Lors du prélèvement de matériel sur une colonie pour préparer un frottis, sa consistance est évaluée (molle, visqueuse, sèche).

Si la culture s’avère propre au microscope, elle est alors repiquée sur de la gélose inclinée pour accumulation.

Jour 3 de l'étude

1. Description du modèle de croissance sur gélose inclinée :

Homogène, hétérogène ;

Le long du trait, continu, continu.

2. Vérification de la pureté de la culture accumulée. Les frottis sont préparés, colorés au Gram et examinés au microscope. Si une culture pure a été accumulée, elle subit une identification plus approfondie. L'identification des bactéries en genre et en espèce repose sur l'étude des caractéristiques métaboliques - identification biochimique et structure antigénique - identification sérologique.

3. Etude des propriétés biochimiques. Propriétés biochimiques - la capacité des bactéries à décomposer certains substrats grâce à la production d'enzymes appropriées. Pour étudier les propriétés biochimiques, des milieux de diagnostic différentiel contenant divers substrats (séries panachées) sont utilisés. Ils comprennent des milieux Hiss avec des glucides, du lait de tournesol, de la gélatine, des milieux avec des acides aminés, du MPB (bouillon de viande et de peptone) avec des indicateurs de sulfure d'hydrogène et d'indole.

Les propriétés saccharolytiques sont étudiées sur milieu Hiss. Ils contiennent de l'eau peptonée, un substrat glucidique (divers mono- et polysaccharides), des alcools polyhydriques et un indicateur.

Si les bactéries possèdent des enzymes qui décomposent le substrat glucidique, elles libèrent des produits métaboliques (acide ou acide et gaz). Lorsque de l'acide se forme, l'indicateur change la couleur du milieu ; lorsque du gaz se forme, des ruptures dans le milieu sont enregistrées.

Les propriétés protéolytiques sont étudiées par culture sur gélatine et lait de tournesol. Si les bactéries possèdent des protéases, la gélatine se liquéfie. Un caillot de couleur crème apparaît dans le lait et un liquide au-dessus - la peptonisation du lait (due au fait que les protéases bactériennes décomposent la caséine du lait en peptone).

Propriétés petolytiques. Le plus souvent, les bactéries sont capables de décomposer les produits intermédiaires de dégradation des protéines - les peptones. Les produits de ce procédé : amines (skatole, indole), acides aminés, gaz (sulfure d'hydrogène, ammoniac, dioxyde de carbone). Ils peuvent être détectés à l’aide de papier indicateur :

Test décisif - pour détecter l'ammoniac ;

Humidifié avec de l'acide oxaloacétique - pour détecter l'indole ;

Humidifié avec de l'acétate de plomb - pour détecter le sulfure d'hydrogène. Les produits de désamination et de décarboxylation des acides aminés sont détectés à l'aide de bandelettes réactives qui changent de couleur lorsque le pH du milieu change.

Jour 4 de l'étude

1. Enregistrez les résultats des tests biochimiques. Une fois qu'une culture a été identifiée à son espèce, un certain nombre de caractéristiques supplémentaires sont étudiées, telles que la sensibilité aux antibiotiques, la toxigénicité, la présence de facteurs de virulence, le profil plasmidique et une différenciation intraspécifique.

2. Les résultats de l'identification biochimique servent de base à l'identification sérologique. L'identification sérologique de la culture isolée est réalisée dans une réaction d'agglutination sur verre en utilisant des sérums immunoadsorbés appropriés, dont le choix est déterminé par les résultats de l'identification biochimique.

Différenciation intraspécifique - déterminer si une souche appartient à un phagovar, un bactériocinogénovavar, un bactériocynovar, un biovar, un résistovar particulier, etc. Cela nous permet d’identifier des liens épidémiologiques entre des souches d’une même espèce.

L'identification de la culture isolée nous permet de conclure quel micro-organisme sert de facteur étiologique de la maladie. Lors de l'isolement de bactéries opportunistes, il est nécessaire de respecter les critères de signification étiologique :

La présence de bactéries dans le matériau provenant du foyer pathologique en quantité d'au moins 10 5 CFU ml/g ;

Isolement répété du matériel de la même culture ;

Une augmentation du titre d'anticorps dans le sérum sanguin du patient contre l'autosouche de 4 fois ou plus.

Détermination des phages bactériens (phagetypage)

L'identification Phagovar est réalisée selon des indications épidémiologiques pour établir des liens épidémiologiques entre personnes malades. Pour réaliser l'étude, prenez des boîtes de Pétri avec du MPA, séchez la surface, dessinez le fond en carrés et marquez-les. Ensuite, une culture de 3 à 4 heures en bouillon est ensemencée avec une pelouse, séchée et une goutte du phage étalon correspondant dans une dilution de travail est appliquée sur chaque carré. Les récoltes sont placées dans un thermostat pendant une journée. Après 24 heures, le spectre de sensibilité de la culture à certains phages par action lytique est pris en compte.

détermination du bactériocynovar

Pour déterminer le bactériocynovar, la sensibilité des souches étudiées au bactériocynovar de référence est déterminée. Comme la lysotypie, elle est réalisée selon des indications épidémiologiques.

Pour mener l'étude, les cultures standard correspondantes produisant des bactériocines typiques sont semées sur des milieux nutritifs. Les récoltes sont placées dans un thermostat à 37°C pendant 48 heures.

Les colonies cultivées de cultures indicatrices sont inactivées avec du chloroforme, après quoi 2 à 4 ml d'agar fondu sont versés sur la surface, dans lesquels 0,2 ml du bouillon de culture étudié de 4 heures sont d'abord ajoutés. Une fois la gélose durcie, les cultures sont à nouveau placées dans un thermostat pendant 18 à 24 heures. Après le temps spécifié, la présence de zones d'inhibition de croissance autour des cultures indicatrices est prise en compte, déterminant ainsi le bactériocynovar des bactéries étudiées.

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Date de création de la page : 2016-04-27

Analyse bactériologique (microbiologique) comprend des études de selles, d'urine, d'expectorations, d'échantillons de gorge, etc. Elles sont réalisées afin d'identifier la cause du processus inflammatoire infectieux, de poser un diagnostic et de prescrire un traitement adapté.

L'analyse bactériologique permet également de déterminer la sensibilité des bactéries aux antibiotiques, et dans certains cas aux bactériophages. Elle consiste à isoler une culture pure de l'agent causal de la maladie et à l'identifier, c'est-à-dire à étudier les propriétés des micro-organismes en laboratoire bactériologique afin de déterminer s'ils appartiennent à une espèce ou un genre particulier.

L'isolement d'une culture pure du pathogène à partir de l'ensemencement constitue la première étape de l'étude. Les éléments suivants sont :

• identification des micro-organismes ;
• détermination de la sensibilité des micro-organismes pathogènes identifiés aux antibiotiques et aux bactériophages.

Des méthodes mécaniques et biologiques peuvent être utilisées pour isoler des cultures pures.

Dans la méthode mécanique, une goutte du matériau d'essai est broyée sur la surface d'un milieu nutritif dense dans les première, deuxième et troisième boîtes de Pétri. Et l'isolement même d'une culture pure inclut sa recherche et son criblage sur un milieu nutritif frais.

Les méthodes biologiques, quant à elles, reposent sur la prise en compte des propriétés spécifiques du microbe isolé, ce qui le distingue des autres microbes présents dans le matériau étudié. Cette méthode utilise des milieux nutritifs dans lesquels des conditions favorables sont créées pour le développement d'un certain type de microbe.

Demande préliminaire de consultation

L'ensemencement bactériologique est l'un des types de recherche en laboratoire, basé sur l'analyse du matériel biologique en l'ensemençant sur des milieux nutritifs spéciaux. Sur la base des résultats de la culture bactérienne, la présence/absence de micro-organismes opportunistes et pathogènes d'un certain type est révélée afin d'étudier plus en détail leurs propriétés physicochimiques et de déterminer un schéma thérapeutique pour les maladies infectieuses diagnostiquées.

L'intérêt de cette méthode de recherche réside dans le fait qu'elle permet non seulement de détecter les bactéries pathogènes, mais également de déterminer leur degré de sensibilité aux médicaments antibactériens. En d’autres termes, sur la base de l’analyse, vous pouvez sélectionner avec précision un ensemble de médicaments pour une thérapie réussie.

Les principaux avantages de la culture bactériologique sont les suivants :

• Haute précision de la recherche. Contrairement à l'ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) et à la PCR (réaction en chaîne par polymérase), la probabilité d'obtenir des résultats faussement négatifs et faussement positifs est quasiment nulle.
• Absolument n'importe quel liquide libéré par le corps humain peut être utilisé comme matière biologique.
• Développement d'un atibiogramme. C'est-à-dire établir le degré d'impact d'un antibiotique particulier sur les microbes identifiés, ce qui permet d'effectuer les prescriptions thérapeutiques avec la plus grande précision possible.

Inconvénients de la méthode

Les inconvénients du semis bactérien comprennent les facteurs suivants :

• La complexité de la procédure et la nécessité de se conformer à des exigences spécifiques en matière de collecte de matériel.
• Temps d'attente pour les résultats de la recherche.
• Disponibilité d'un laboratoire spécial, ainsi que qualifications appropriées du personnel médical impliqué dans l'analyse.

Le but de la culture bactériologique

La méthode de culture bactérienne est assez courante dans la pratique médicale, utilisée pour diagnostiquer des maladies dans divers domaines de la médecine : chirurgie, oncologie, gastro-entérologie, oto-rhino-laryngologie, etc. En gynécologie et urologie, ce type d'analyse en laboratoire est utilisé pour étudier la microflore afin pour diagnostiquer les agents pathogènes suivants :

• mycoplasmose et uréeplasmose;
• trichomonase;
• candidose (muguet);
• chlamydia.

Sur la base des résultats de l'étude, il est possible non seulement d'identifier la présence de bactéries pathogènes, mais également de déterminer leur composition quantitative. Ce qui, à son tour, permet de comprendre à quel stade la maladie progresse et de coordonner le traitement ultérieur.

Outre les frottis des organes génitaux, un certain nombre d'autres types de matériel biologique sont également utilisés pour la culture bactérienne. Par exemple:

• Sang - pour vérifier la stérilité, les infections intravasculaires, l'endocardite.
• Muqueuses du nez et de la gorge - pour identifier les virus et les bactéries provoquant la rhinite, la sinusite, l'amygdalite et d'autres maladies ORL.
• Fèces - pour diagnostiquer la dysbiose et d'autres troubles gastro-intestinaux.
• Bile - en présence de maladies inflammatoires du foie, du pancréas, de la vésicule biliaire.
• Crachats - pour déterminer les infections des voies respiratoires, en particulier la tuberculose pulmonaire.
• La membrane muqueuse des yeux - avec le développement d'une inflammation purulente des yeux et d'autres pathologies ophtalmologiques.
• Sébum - pour identifier les staphylocoques, les champignons et autres représentants de la flore pathogène qui s'accumulent dans la couche épithéliale de la peau du visage.

Mécanisme

La procédure de recherche en laboratoire peut être divisée en plusieurs étapes :

• Collecter le matériel et le placer sur un milieu nutritif spécial. Le type de milieu utilisé dépend du but de la culture bactérienne (cultiver un agent pathogène spécifique ou déchiffrer des cultures bactériennes dans le but de construire davantage un antibiogramme). Si nécessaire, les milieux liquides peuvent ensuite être remplacés par des surfaces solides, ce qui permet une identification plus précise des colonies bactériennes.
• Placer le milieu nutritif dans un équipement spécial (thermostat), où des conditions appropriées sont créées pour la croissance et la reproduction d'agents pathogènes pathogènes. Les indicateurs d'humidité de l'air, de température, d'éclairage, etc. sont importants.
• Teinter le matériau avec divers réactifs pour une meilleure inspection et une analyse plus approfondie. Grâce aux colorants, les bactéries changent de couleur et deviennent plus visibles dans le contexte général du milieu nutritif.
• Évaluation des colonies cultivées selon certains indicateurs : densité, forme, couleur, composition chimique, etc.

Important! L'une des conditions les plus importantes pour réaliser une culture bactériologique est le maintien de la stérilité absolue des locaux du laboratoire, ainsi que des ustensiles et instruments utilisés. Pour transférer le matériau vers le milieu, des dispositifs tels qu'une tige de verre, une anse bactérienne ou une pipette Pasteur sont utilisés.

Cette vidéo, à partir de l'exemple de l'analyse bactériologique des urines, décrit le principe de la culture bactérienne.

Décoder la culture bactérienne

Le résultat de l'analyse est évalué selon plusieurs indicateurs, prenant en compte non seulement le facteur qualitatif (confirmation de la présence de bactéries pathogènes dans l'environnement), mais également le facteur quantitatif - c'est-à-dire le degré de concentration de micro-organismes pathogènes dans le matériau à l’étude. Pour compter le nombre de cellules microbiennes, on utilise la notion d'unité formant colonie (UFC), qui permet de déterminer le niveau de saturation bactérienne de l'échantillon étudié.

Il existe 4 degrés de croissance des agents pathogènes :

• D'abord- une mauvaise croissance des bactéries sur un milieu nutritif liquide et un manque de croissance sur un milieu solide. Ce résultat n’est pas considéré comme un écart par rapport à la norme.
• Deuxième- croissance de bactéries sur milieu solide jusqu'à 10 colonies. Cela n’indique pas la présence d’une maladie, mais plutôt la contamination des fournitures de laboratoire destinées à la recherche.
• Troisième- croissance de bactéries sur milieu solide au sein de 10 à 100 colonies.
• Quatrième- plus de 100 colonies.

Dans la conclusion remise au patient, les résultats de culture bactérienne sont indiqués comme suit :

• le nom de l'agent pathogène identifié est indiqué en latin (par exemple, Trichomonas vaginalis - Trichomonas) ;
• la concentration du micro-organisme cultivé dans un milieu nutritif est prescrite (normale - jusqu'à 10 3 CFU/ml, anormale - à partir de 10 5 CFU/ml) ;
• la nature du milieu est indiquée : la flore est conditionnellement pathogène, pathogène.

Parallèlement à la détermination de la concentration des bactéries, leur sensibilité aux antibiotiques est analysée. La présence d'une réaction positive à un médicament antibactérien particulier est indiquée par le symbole « S » et une réaction négative par « R ».

Règles pour effectuer des tests de culture pour la microflore chez la femme

Avant de passer le test, il est nécessaire de prendre en compte un certain nombre d'exigences obligatoires concernant le respect des règles d'hygiène personnelle, ainsi que le mécanisme de collecte du matériel biologique. Ils sont les suivants :

• un jour avant l’intervention, éviter tout contact sexuel (anal, oral, vaginal) ;
• ne pas effectuer de douches vaginales, de bains, de lotions sur les organes génitaux et d'autres procédures antiseptiques ;
• arrêtez d'utiliser des suppositoires et des comprimés vaginaux ;
• un frottis doit être effectué au plus tôt 2 semaines après la menstruation ;
• un mois avant le test, évitez de prendre des antibiotiques ;
• Ne pas uriner pendant 2 heures avant de collecter le matériel.

Pour la recherche, des échantillons du vagin, de l'urètre, du col de l'utérus et du canal cervical peuvent être utilisés. Avant de commencer la procédure, les organes génitaux sont soigneusement nettoyés, si nécessaire, l'entrée du vagin est fermée avec un coton-tige. Lors de l'analyse de l'urine, une portion moyenne est prélevée puis placée dans un pot stérile. L'urine doit être traitée dans les 2 heures suivant le prélèvement et conservée à une température ne dépassant pas 20°C.

Règles pour effectuer des tests de culture pour la microflore chez l'homme

L’éjaculat (sperme), le sang, l’urine et les sécrétions de la prostate peuvent être utilisés comme matériel de recherche. Pour obtenir le résultat le plus précis, les hommes doivent respecter les exigences suivantes avant de passer le test :

• s'abstenir de tout contact sexuel 1 à 2 jours avant le test de culture bactérienne ;
• Évitez de prendre des antibiotiques 3 à 4 semaines avant le test ;
• ne pas uriner 4 à 5 heures avant le prélèvement ;
• Lavez soigneusement vos parties génitales et changez de sous-vêtements.

Tout changement dans votre état de santé doit être signalé immédiatement à votre médecin pour éviter des résultats de test incorrects.

Culture bactérienne pendant la grossesse

Toute infection bactérienne « dormante » dans le corps d’une femme peut affecter négativement le déroulement de la grossesse, entraîner une infection du fœtus et, dans certains cas, même provoquer une fausse couche précoce. Pour vous protéger, vous et votre enfant à naître, de diverses pathologies, vous devez planifier consciemment la conception et, si nécessaire, effectuer un traitement antibactérien approprié.

Parmi les indications de la culture bactérienne figurent les suivantes :

• la présence de maladies inflammatoires des organes génitaux et du système génito-urinaire ;
• identifier les causes d'une fausse couche avec un diagnostic préliminaire d'infertilité ;
• diagnostic d'inflammation de la prostate (chez l'homme);
• actions préparatoires à la conception d'un enfant;
• choisir le bon schéma thérapeutique pour les infections génito-urinaires ;
• changement fréquent de partenaires sexuels et négligence de la contraception mécanique (préservatif) ;
• grossesse extra-utérine (actuelle ou présente dans le passé).

L'uréeplasmose présente un grave danger pour la santé d'une femme, en particulier pendant la grossesse. Comme elle est le plus souvent asymptomatique, entraînant par la suite un certain nombre de complications graves (endométrite, inflammation de l'utérus, etc.), un diagnostic rapide de l'infection permet d'effectuer le traitement nécessaire et de réduire le risque d'infection de l'enfant pendant la grossesse et accouchement.

Dates prêtes

Le délai d'exécution de l'analyse dépend du type de matériau testé et peut varier de 3 à 14 jours. Lors d'un frottis du tractus urogénital, le test prend en moyenne 7 jours. Les cultures pour la microflore (pour hommes et femmes) durent 5 à 8 jours. Le résultat préliminaire peut être obtenu au plus tôt 3 jours après le frottis.

Compte tenu de la durée relative et de la spécificité de la culture bactériologique, ce type de recherche en laboratoire constitue aujourd'hui l'une des méthodes de diagnostic les plus précises et les plus efficaces, permettant non seulement de déterminer le type d'organismes pathogènes, mais également de planifier un schéma de lutte contre la maladie identifiée.

Dans le même temps, la pathogenèse de la maladie et les lieux de plus grande accumulation de micro-organismes suspectés, ainsi que les voies de leur élimination de l'organisme, sont pris en compte. Par exemple, en cas de septicémie ou de maladie contre laquelle se développe une bactériémie, le matériel de recherche le plus informatif est le sang. Si la dysenterie est sérieusement suspectée, les selles du patient sont prélevées pour analyse.
En cas de pneumonie, une analyse des crachats est effectuée et si une infection anaérobie est suspectée, le matériel de recherche est sélectionné parmi les couches profondes des tissus affectés.
Il est conseillé de prélever du matériel pour examen bactériologique sur tous les patients avant de commencer un traitement avec des médicaments antibactériens et chimiothérapeutiques. Le matériel biologique collecté pour l'examen bactériologique est collecté dans un récipient stérile, dans le respect des règles d'asepsie, sans utiliser de solutions désinfectantes. Dans les plus brefs délais, le conteneur est livré à un laboratoire spécialisé. Le transport du matériel suspecté de contenir des agents pathogènes d'infections dangereuses s'effectue dans des conteneurs fermés, qui sont conditionnés dans des conteneurs spéciaux. Ce matériel doit être accompagné d'un document d'accompagnement contenant les informations suivantes : le nom du matériel collecté et la date de sa collecte, le nom complet, l'âge et l'adresse du patient, la date la plus précise d'apparition de sa maladie et un aperçu clinique préliminaire. diagnostic. Le matériel livré doit être examiné le plus rapidement possible.
L'analyse commence par une bactérioscopie par examen au microscope de frottis spécialement colorés à partir de matériel prélevé sur le patient. Dans certains cas, cela permet déjà d'identifier l'agent causal de la maladie. Le plus souvent, la bactérioscopie est utilisée comme méthode de recherche indicative (préliminaire). Sur la base d'un résultat aussi rapide, vous pouvez immédiatement commencer un traitement antibactérien.

Pour prévenir la propagation des maladies infectieuses, non seulement le patient, mais également les personnes en contact avec lui sont examinés : proches, personnel médical, etc.

La recherche bactériologique consiste à obtenir une culture pure du pathogène et à établir son appartenance à une espèce, un genre, etc. Cette méthode comprend certaines étapes. Tout d’abord, une culture pure du pathogène est isolée par inoculation sur un milieu nutritif solide. Le choix du milieu nutritif dépend des propriétés de l'agent pathogène suspecté. À l'étape suivante, les colonies bactériennes résultantes sont examinées par des méthodes macroscopiques et microscopiques. Ensuite, des frottis sont préparés à partir de petits fragments de chacune des colonies formées, qui sont colorés au Gram. Ensuite, ils sont examinés au microscope, déterminant les propriétés inhérentes à la culture isolée et vérifiant sa pureté.
La partie restante de la colonie est transférée dans des tubes spéciaux avec de la gélose inclinée (milieu nutritif solide) pour accumuler une culture pure en vue d'une étude complète ultérieure de cette colonie. Tous les tubes contenant de l'agar sont placés dans un thermostat pendant 18 à 24 heures. Lors de la 2ème étape de la recherche bactériologique, le nombre de colonies de micro-organismes formées est souvent pris en compte. Ceci est d'une grande importance si le patient souffre de maladies causées par une microflore opportuniste. À la troisième étape de la recherche bactériologique, la culture pure isolée de l'agent pathogène est identifiée et son degré de sensibilité aux antibiotiques et autres médicaments chimiothérapeutiques est déterminé. L'identification des cultures s'effectue par propriétés morphologiques, biochimiques, tinctoriales, antigéniques, culturelles et toxicogènes :
Étant donné que le nombre de formes de bactéries résistantes aux médicaments a récemment augmenté, la détermination d'un antibiogramme est nécessaire pour prescrire une chimiothérapie rationnelle à un patient spécifique. Il reflète la sensibilité ou la résistance d'une culture pure isolée de l'agent causal d'une maladie particulière aux médicaments chimiothérapeutiques et aux antibiotiques. À cette fin, on utilise soit la méthode du disque papier, soit la méthode beaucoup plus précise, mais également plus exigeante en main-d'œuvre, de dilutions en série. La première méthode est basée sur l'identification de la zone de suppression de la croissance des colonies de microflore autour de disques imprégnés de divers antibiotiques.
Lors de l'utilisation de la technique de dilution en série, un antibiotique spécifique est dilué dans des tubes à essai remplis d'un milieu nutritif liquide et un nombre égal de micro-organismes y est placé. Les résultats de ce type d'étude sont enregistrés sur la base de l'absence ou de la présence de croissance de microflore bactérienne dans ces tubes à essai. L’antibiogramme qui en résulte aide souvent les épidémiologistes à établir l’identité des souches de micro-organismes.

(module direct4)

Lors de la détermination d'un éventuel portage bactérien chez un patient, des études sont effectuées à plusieurs reprises, car l'agent pathogène peut ne pas être détecté dans une seule partie du matériel biologique collecté.

La livraison du matériel d'un patient pour la recherche bactériologique s'effectue dans le respect de certaines règles.

• Le biomatériau est collecté dans un récipient jetable avec du milieu Ames. Ce conteneur est réceptionné à l'accueil de l'établissement médical concerné.
• Le délai de livraison du matériel du patient au laboratoire à une température ambiante de 10 à 20 °C ne doit pas dépasser 6 heures, à une température plus basse, par exemple 2 à 8 °C, jusqu'à 48 heures.
• La congélation du biomatériau collecté est exclue.

Afin de procéder à un examen bactériologique de l'urine, le patient doit prélever une portion moyenne de 3 à 5 ml. Le matériel est collecté dans un récipient stérile jetable en plastique après une toilette minutieuse des organes génitaux, sans utilisation d'antiseptiques. Les microbes contenus dans l'urine se multiplient activement à température ambiante. Ce fait donne souvent de faux résultats lors de la détermination du degré de leur teneur dans l'urine (bactériurie).
L'analyse du sperme pour la recherche bactériologique est collectée par le patient dans un récipient stérile jetable en plastique. Le délai de livraison du matériel au laboratoire de bactériologie à température ambiante est de 1 à 2 heures.
Il est conseillé de recueillir les crachats le matin, avant les repas (à jeun), mais après avoir désinfecté la cavité buccale. Le matériel de recherche est collecté dans un récipient en plastique stérile.
Le recueil des sécrétions prostatiques pour examen bactériologique est effectué par un urologue qualifié après un massage préalable de la prostate. Avant de collecter ce matériel, il est recommandé au patient de pratiquer une abstinence sexuelle complète pendant au moins 2 jours.

Si le matériel d'un patient est collecté pour la recherche dans un tube stérile avec un coton-tige, alors avant de l'insérer, il est nécessaire de brûler les bords du tube avec une lampe à alcool.

Des échantillons de lait maternel sont prélevés pour un examen bactériologique ultérieur uniquement avant que le bébé ne soit nourri ou 2 heures après. En préparation de la collecte de ce matériel, la patiente lave les 2 glandes mammaires avec de l'eau tiède et du savon et les essuie avec une serviette propre. La surface des mamelons et du bout des doigts est traitée avec un coton légèrement humidifié avec de l'alcool éthylique à 70 %. La première portion de lait, environ 0,5 ml, est égouttée. Après quoi, sans toucher le mamelon avec ses mains, la patiente exprime 0,5 à 1 ml de lait des glandes mammaires droite et gauche dans des récipients stériles séparés. Le lait maternel ne doit pas être conservé ou transporté pendant de longues périodes à température ambiante. Sinon, la microflore du lait pourrait se multiplier, entraînant des erreurs quantitatives importantes dans les résultats de l'analyse bactériologique.

Il est important de rappeler que lors de l'enregistrement d'une analyse bactériologique du lait maternel, les éléments suivants doivent être indiqués :

• quel récipient contient du matériel provenant des glandes mammaires droites et lequel provenant des glandes mammaires gauches ;
• à partir de quelle glande le bébé a été nourri pour la dernière fois.

Le liquide synovial est collecté par un médecin qualifié dans un récipient en plastique stérile spécialement préparé à cet effet. Il est important de se rappeler que cette procédure n’est pas réalisée en laboratoire.
La collecte des écoulements de la plaie dans un récipient jetable spécial contenant du milieu Ames est effectuée uniquement par un médecin.
La bile pour examen bactériologique est prélevée lors de l'intubation duodénale. Il est collecté dans 3 tubes stériles. Dans certains cas, la bile est collectée pendant l'intervention chirurgicale à l'aide d'une seringue stérile dans 1 tube. Cette procédure n’est jamais effectuée en laboratoire.
Le matériel est collecté dans la gorge et le nasopharynx (frottis) avant d'être consommé. De plus, le patient doit éviter de se brosser les dents et de se rincer la bouche.
Les matières fécales pour analyse bactérienne sont collectées à l'aide d'une anse en fil stérile enveloppée dans du coton, qui est insérée dans le rectum à une profondeur de 8 à 10 cm. Ensuite, l'anse est immédiatement immergée dans un tube stérile contenant un milieu nutritif et envoyée à un centre bactériologique. laboratoire.