आरएससी की स्थापना और उन्हें प्राप्त करने के लिए आवश्यक सामग्री। पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीआरएफ)। आरएसके बोर्डेट - झांगौ का मुख्य प्रयोग स्थापित करना

आरएससी का एक विशेष लाभ यह है कि इसमें शामिल एंटीजन की प्रकृति (कॉर्पसकुलर या घुलनशील) कोई मायने नहीं रखती है, क्योंकि पूरक आईजीजी और आईजीएम से संबंधित किसी भी एंटीबॉडी के एफसी टुकड़े को बांधता है, भले ही इसकी एंटीबॉडी विशिष्टता कुछ भी हो। इसके अलावा, आरएसए बहुत संवेदनशील है: यह आपको उदाहरण के लिए, वर्षा प्रतिक्रिया की तुलना में 10 गुना कम एंटीबॉडी की मात्रा का पता लगाने की अनुमति देता है। आरएससी का प्रस्ताव 1901 में जे. बोर्डेट और ओ. झांग द्वारा किया गया था। यह पूरक के दो गुणों पर आधारित है:

1) "एंटीजन + एंटीबॉडी" कॉम्प्लेक्स से जुड़ने की क्षमता;

2) हेमोलिटिक सीरम प्राप्त करने के लिए लाल रक्त कोशिकाओं का विश्लेषण किया जाता है।

आरएसके दो चरणों में किया जाता है, और इसमें क्रमशः दो प्रणालियाँ शामिल होती हैं - प्रयोगात्मक, या नैदानिक, और संकेतक। डायग्नोस्टिक प्रणाली में एक परीक्षण (या डायग्नोस्टिक) सीरम होता है, जिसे इसमें मौजूद पूरक और एंटीजन को निष्क्रिय करने के लिए प्रतिक्रिया करने से पहले 30 मिनट के लिए 56 डिग्री सेल्सियस पर गर्म किया जाता है।

इस प्रणाली में मानक पूरक जोड़ा जाता है। इसका स्रोत ताजा या सूखा गिनी पिग मट्ठा है। मिश्रण को एक घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किया जाता है। यदि परीक्षण सीरम में एंटीबॉडी हैं, तो वे अतिरिक्त एंटीजन के साथ बातचीत करेंगे, और परिणामी "एंटीजन + एंटीबॉडी" कॉम्प्लेक्स अतिरिक्त पूरक को बांध देंगे। यदि सीरम में कोई एंटीबॉडी नहीं हैं, तो एंटीजन + एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का निर्माण नहीं होगा, और पूरक मुक्त रहेगा।

प्रतिक्रिया के इस चरण में आमतौर पर पूरक निर्धारण की कोई अभिव्यक्तियाँ दिखाई नहीं देती हैं। इसलिए, इस प्रश्न को स्पष्ट करने के लिए कि पूरक निर्धारण हुआ है या नहीं, एक दूसरा संकेतक सिस्टम (निष्क्रिय हेमोलिटिक सीरम + भेड़ लाल रक्त कोशिकाएं) जोड़ा जाता है, और सभी आरएससी घटकों के मिश्रण को 30-60 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर फिर से इनक्यूबेट किया जाता है। , जिसके बाद प्रतिक्रिया परिणामों का आकलन किया जाता है। स्मार्टफोन का उपयोग करके (जैसे यह वाला), आप सटीक प्रतिक्रिया समय की गणना कर सकते हैं। यदि निदान प्रणाली में पहले चरण में पूरक बंधा हुआ है, यानी रोगी के सीरम में एंटीबॉडी हैं, और पूरक "एंटीबॉडी + एंटीजन" कॉम्प्लेक्स से बंधा हुआ है, तो लाल रक्त कोशिकाओं का कोई लसीका नहीं होगा - आरबीसी सकारात्मक है: तरल रंगहीन होता है, ट्यूब के नीचे लाल रक्त कोशिकाओं में तलछट होती है

यदि सीरम में कोई विशिष्ट एंटीबॉडी नहीं हैं और निदान प्रणाली में पूरक बंधन नहीं होता है, यानी आरएससी नकारात्मक है, तो निदान प्रणाली में अव्ययित पूरक संकेतक प्रणाली के "लाल रक्त कोशिकाओं + एंटीबॉडी" परिसर से जुड़ जाता है और हेमोलिसिस होता है: एक टेस्ट ट्यूब "लैकर्ड ब्लड" में कोई लाल रक्त कोशिका तलछट नहीं होती है। आरएससी की तीव्रता का आकलन हेमोलिसिस विलंब की डिग्री और एरिथ्रोसाइट तलछट की उपस्थिति के आधार पर चार-क्रॉस प्रणाली का उपयोग करके किया जाता है। प्रतिक्रिया उचित नियंत्रण के साथ होती है: सीरम नियंत्रण (एंटीजन के बिना) और एंटीजन नियंत्रण (सीरम के बिना), क्योंकि कुछ सीरा और कुछ एंटीजन में पूरक-विरोधी प्रभाव होता है। आरएससी करने से पहले, परीक्षण सीरम या एंटीजन को छोड़कर, इसमें शामिल सभी घटकों को सावधानीपूर्वक अनुमापन के अधीन किया जाता है।

प्रतिक्रिया में पूरक की सटीक खुराक शामिल करना विशेष रूप से महत्वपूर्ण है, क्योंकि इसकी कमी या अधिकता से गलत परिणाम हो सकते हैं। पूरक अनुमापांक वह न्यूनतम मात्रा है, जो हेमोलिटिक सीरम की कार्यशील खुराक की उपस्थिति में, लाल रक्त कोशिकाओं का पूर्ण विघटन सुनिश्चित करती है। मुख्य प्रयोग करने के लिए, स्थापित अनुमापांक की तुलना में पूरक की खुराक 20-25% बढ़ा कर लें। हेमोलिटिक सीरम का अनुमापांक इसका अधिकतम तनुकरण है, जो 10% पूरक समाधान की समान मात्रा के साथ मिश्रित होने पर 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 1 घंटे के भीतर लाल रक्त कोशिकाओं की संबंधित खुराक को पूरी तरह से हेमोलाइज कर देता है।

अप्रत्यक्ष हेमोलिसिस प्रतिक्रिया का उपयोग विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक त्वरित विधि के रूप में किया जाता है। लाल रक्त कोशिकाओं का उपयोग एंटीजन के वाहक के रूप में किया जाता है। यदि रोगी के सीरम में विशिष्ट एंटीबॉडी हैं, तो पूरक की उपस्थिति में संवेदनशील लाल रक्त कोशिकाओं को नष्ट कर दिया जाता है।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर)किसी विशिष्ट एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने या किसी ज्ञात एंटीबॉडी का उपयोग करके एंटीजन के प्रकार को निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाता है। यह एक जटिल सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया है, जिसमें दो प्रणालियाँ और पूरक शामिल हैं। पहली प्रणाली बैक्टीरियोलॉजिकल (बुनियादी) है, इसमें एक एंटीजन और एक एंटीबॉडी (एक ज्ञात है, दूसरा नहीं) शामिल है। दूसरी प्रणाली हेमोलिटिक (सूचक) है। इसमें भेड़ की लाल रक्त कोशिकाएं (एंटीजन) और संबंधित हेमोलिटिक सीरम (एंटीबॉडी) शामिल हैं। आरएससी को दो चरणों में प्रशासित किया जाता है: सबसे पहले, एंटीजन को परीक्षण रक्त सीरम के साथ जोड़ा जाता है, जिसमें एंटीबॉडी की खोज की जाती है, और फिर पूरक जोड़ा जाता है। यदि एंटीजन और एंटीबॉडी एक-दूसरे से मेल खाते हैं, तो एक प्रतिरक्षा कॉम्प्लेक्स बनता है जो पूरक को बांधता है। सीरम में एंटीबॉडीज की अनुपस्थिति में इम्यून कॉम्प्लेक्स नहीं बन पाता है और पूरक मुक्त रहता है। चूंकि कॉम्प्लेक्स द्वारा पूरक सोखने की प्रक्रिया दृश्यमान रूप से अदृश्य है, इसलिए इस प्रक्रिया की पहचान करने के लिए एक हीम प्रणाली जोड़ी जाती है। प्रतिक्रिया को निम्नानुसार ध्यान में रखा जाता है। यदि पूरक पहले (बैकसिस्टम) में बंधा हुआ है, तो जब हेमसिस्टम जोड़ा जाता है, तो एरिथ्रोसाइट्स का हेमोलिसिस नहीं होगा - प्रतिक्रिया सकारात्मक है। यदि एंटीबॉडी की कमी के कारण पूरक पहली प्रणाली में बंध नहीं पाता है, तो यह हीम प्रणाली से संपर्क करेगा, जिसके परिणामस्वरूप लाल रक्त कोशिकाओं का हेमोलिसिस होगा - एक नकारात्मक प्रतिक्रिया।

आरएससी के लिए एंटीजन मारे गए और नष्ट किए गए रोगाणुओं से तैयार किए जाते हैं, अक्सर निष्कर्षण द्वारा।

आरएससी का व्यापक रूप से ब्रुसेलोसिस, ग्लैंडर्स, रिकेट्सियोसिस, पैर और मुंह की बीमारी और कई अन्य के निदान के लिए उपयोग किया जाता है।

दीर्घकालिक पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (एलडीसीआर)। यह सामान्य आरएससी का एक प्रकार है, लेकिन इसमें अंतर है कि प्रतिक्रिया का पहला चरण ठंड (4 डिग्री सेल्सियस) में 16-18 घंटे तक चलता है। ऐसी परिस्थितियों में, एंटीजन-एंटीबॉडी-पूरक कॉम्प्लेक्स में पहली प्रणाली में, क्रायोफिलिक (ठंडा) एंटीबॉडी अतिरिक्त रूप से बंधे होते हैं, जिससे प्रतिक्रिया की संवेदनशीलता बढ़ जाती है। इस विकल्प का उपयोग ब्रुसेलोसिस, कैम्पिलोबैक्टीरियोसिस आदि के निदान के लिए किया जाता है।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर) का वर्णन सबसे पहले बोर्डेट और झांगौ (1901) द्वारा किया गया था। आरए और आरपी के विपरीत, सीएससी में, एंटीबॉडी के साथ एंटीजन का संयोजन केवल तीसरे घटक - पूरक की उपस्थिति में प्रकट होता है।

जटिल गठन की प्रतिक्रिया, प्रतिजन - प्रतिजनलो - पूरक - अदृश्य। प्रतिक्रिया घटकों की निर्दिष्ट बातचीत की पहचान करने के लिए, एक अतिरिक्त संकेतक प्रणाली का उपयोग किया जाता है, जो अभिव्यक्ति की स्पष्टता से, अप्रत्यक्ष रूप से पहली प्रणाली में बातचीत के परिणाम को दर्शाता है। इस प्रकार; आरएससी में दो प्रणालियाँ शामिल हैं: 1) बैक्टीरियोलाइटिक (नैदानिक) और 2) हेमोलिटिक (सहायक संकेतक), जो यह निर्धारित करना संभव बनाता है कि पहले सिस्टम में पूरक निर्धारण हुआ है या नहीं। पहले, बैक्टीरिया के निलंबन को एंटीजन के रूप में उपयोग किया जाता था, और सकारात्मक मामलों में, उनका लसीका (बैक्टीरियोलिसिस) होता था, इसलिए पहली प्रणाली को बैक्टीरियोलाइटिक कहा जाता था। नतीजतन, आरएससी दो घटनाओं पर आधारित है - बैक्टीरियोलिसिस और हेमोलिसिस।

आरएससी दो चरणों में किया जाता है। सबसे पहले, एक बैक्टीरियोलाइटिक प्रणाली तैयार की जाती है - एंटीजन के साथ परीक्षण निष्क्रिय सीरम का 0.5 मिलीलीटर परीक्षण ट्यूबों में मिलाया जाता है, पूरक को कड़ाई से परिभाषित मात्रा (टाइटर) में जोड़ा जाता है। एंटीजन - एंटीबॉडी (सीरम) - पूरक (बैक्टीरियोलाइटिक सिस्टम) का मिश्रण पानी के स्नान (या थर्मोस्टेट) में 37-38 डिग्री सेल्सियस पर 20-40 मिनट के लिए रखा जाता है। इसके बाद, प्रतिक्रिया के दूसरे चरण के लिए आगे बढ़ें - दूसरे हेमोलिटिक सिस्टम के घटकों को सभी टेस्ट ट्यूबों में जोड़ा जाता है और फिर से 15-20 मिनट के लिए पानी के स्नान में रखा जाता है। फिर प्रारंभिक परिणाम को ध्यान में रखा जाता है (चाहे हेमोलिसिस हो या नहीं), अगले दिन तक कमरे के तापमान पर छोड़ दिया जाता है, और आरएससी की अंतिम गणना की जाती है। हेमोलिसिस (सकारात्मक निदान परिणाम) की अनुपस्थिति इंगित करती है कि परीक्षण सीरम में लिए गए एंटीजन के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी शामिल हैं, एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स पहले सिस्टम में बना है, और पूरक बाध्य है। दूसरी प्रणाली के घटक जोड़े जाते हैं - हेमोलिसिन और एरिथ्रोसाइट्स, जो एक दूसरे के संबंध में एक एंटीजन (एरिथ्रोसाइट्स) और एक एंटीबॉडी (हेमोलिसिन) भी होते हैं और पूरक की उपस्थिति में परस्पर क्रिया करते हैं। यदि परीक्षण सीरम में लिए गए एंटीजन के लिए कोई विशिष्ट एंटीबॉडी नहीं हैं, एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है और पूरक पहले बैक्टीरियोलाइटिक सिस्टम में अवशोषित नहीं होता है और टेस्ट ट्यूब में मुक्त रहता है, तो जब दूसरा (हेमोलिटिक) सिस्टम होता है जोड़ा गया, पूरक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स (हेमोलिसिन - लाल रक्त कोशिकाओं) के साथ बातचीत करता है और हेमोलिसिस (लाल रक्त कोशिकाओं का विश्लेषण) होता है। निदान परिणाम नकारात्मक है. इस प्रकार, आरएससी में 5 घटक शामिल हैं: एंटीजन, एंटीबॉडी (परीक्षण सीरम), पूरक, हेमोलिसिन, भेड़ एरिथ्रोसाइट्स का निलंबन। सभी घटकों को पतला करने के लिए, एक इलेक्ट्रोलाइट माध्यम - खारा NaCl समाधान - का उपयोग किया जाता है।

नैदानिक ​​​​प्रयोगशाला में आरएससी करने के लिए, निम्नलिखित की आवश्यकता होती है: परीक्षण के लिए प्रयोगशाला द्वारा प्राप्त जानवरों से सीरम के नमूने; दो सीरा को सकारात्मक माना जाता है (मानक, हाइपरइम्यून, एक सकारात्मक परिणाम प्रदान करता है - नियंत्रण के लिए) और स्वस्थ जानवरों से दो सामान्य सीरा - नियंत्रण के लिए भी (1:10 के कमजोर पड़ने पर सभी सीरा को गर्म करके अपने स्वयं के पूरक को नष्ट करने के लिए निष्क्रिय कर दिया जाता है) 56-58° पर जल स्नान 30 मिनट से); एंटीजन को टिटर के अनुसार पतला किया जाता है (पैकेजिंग पर बायोफैक्ट्री द्वारा दर्शाया गया है); पूरक (गिनी पिग सीरम) स्थापित अनुमापांक (अनुमापन के दौरान) के अनुसार पतला; कार्यशील अनुमापांक में हेमोलिसिन; 1:40 पतला भेड़ एरिथ्रोसाइट्स का निलंबन, खारा समाधान, विभिन्न क्षमताओं के स्नातक पिपेट, टेस्ट ट्यूब, स्टैंड, पानी के स्नान, रबर बल्ब।

पूरक निर्धारण परीक्षण (एफएफआर) एक सीरोलॉजिकल परख है जो वर्षा, एग्लूटिनेशन और न्यूट्रलाइजेशन विधियों की संवेदनशीलता में तुलनीय है। आरएसके एक ऐसी विधि है जो दो एंटीजन-एंटीबॉडी प्रणालियों का उपयोग करती है:

पहला विशिष्ट है;

दूसरा सूचक (हेमोलिटिक) है।

आरएससी को पूरा करने के लिए, 5 घटकों की आवश्यकता होती है: निदान किया जा रहा एंटीजन, नैदानिक ​​​​एंटीबॉडी, संकेतक एंटीजन (भेड़ लाल रक्त कोशिकाएं), संकेतक एंटीबॉडी (खरगोश हेमोलिसिन), पूरक।

एंटीजन और एंटीबॉडी की विशिष्ट अंतःक्रिया पूरक बंधन के साथ होती है। परिणामी कॉम्प्लेक्स दृष्टिगत रूप से प्रकट नहीं होता है। हेमोलिटिक प्रणाली का उपयोग एक संकेतक के रूप में किया जाता है। हेमोलिटिक सीरम लाल रक्त कोशिकाओं को पूरक की क्रिया के प्रति संवेदनशील बनाता है, जिसकी उपस्थिति में लाल रक्त कोशिकाओं का क्षरण होता है (हेमोलोसिस)। यदि कोई हेमोलिसिस नहीं है, तो पूरक पहली प्रणाली से बंधा हुआ है, और इसलिए, इसमें मौजूद एंटीजन एंटीबॉडी से मेल खाता है - एक सकारात्मक प्रतिक्रिया। यदि एंटीबॉडी एंटीजन से मेल नहीं खाता है, तो कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है और पूरक, मुक्त रहकर, दूसरी प्रणाली के साथ जुड़ जाता है, जिससे हेमोलिसिस होता है - एक नकारात्मक प्रतिक्रिया।

आरएससी करने के लिए, मुख्य प्रयोग से पहले सभी प्रतिक्रिया सामग्री तैयार की जाती है और उनका शीर्षक दिया जाता है।

प्रतिक्रिया की पूर्व संध्या पर सीरम (रोगी या निदानकर्ता) को अपने स्वयं के पूरक को निष्क्रिय करने के लिए 30 मिनट के लिए 56ºC के तापमान पर पानी के स्नान में गर्म किया जाता है। कुछ सीरा, विशेष रूप से प्रतिरक्षित जानवरों से, में पूरक-विरोधी गुण होते हैं, अर्थात। समजात प्रतिजन की अनुपस्थिति में पूरक को ठीक करने की क्षमता। उन्हें कार्बन डाइऑक्साइड के साथ उपचारित करके, 57-58ºC के तापमान पर गर्म करके, एक बार -20ºC या -70ºC के तापमान पर ठंडा करके और सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा तलछट को हटाकर, 1 की मात्रा में सीरम में पूरक जोड़कर एंटी-पूरकता को समाप्त किया जाता है: 10 सीरम और 18-20 घंटों के लिए ठंड में ऊष्मायन के बाद इसे गर्म करें, सीरा की एंटीकॉम्प्लिमेंटरी को रोकने के लिए, उन्हें कम तापमान पर लियोफिलाइज़्ड या जमे हुए रखा जाता है।

सीएससी के लिए एंटीजन विभिन्न मारे गए सूक्ष्मजीवों, उनके लाइसेट्स, बैक्टीरिया के घटकों, पैथोलॉजिकल रूप से परिवर्तित और सामान्य अंगों, ऊतक लिपिड, वायरस और वायरस युक्त सामग्रियों की संस्कृतियां हो सकती हैं। सूक्ष्मजीवों से कई एंटीजन औद्योगिक रूप से प्राप्त किए जाते हैं। एंटीजन की एंटी-पूरकता को थर्मोलिसिस (एकाधिक ठंड और पिघलना), वसा सॉल्वैंट्स (ईथर, क्लोरोफॉर्म, एसीटोन), अल्कोहल (मेथनॉल, इथेनॉल) आदि के साथ उपचार जैसे तरीकों का उपयोग करके समाप्त किया जाता है।

प्रयोग से तुरंत पहले लिया गया गिनी पिग सीरम पूरक के रूप में उपयोग किया जाता है; सूखे पूरक का भी उपयोग किया जा सकता है। बाद के अनुमापन के लिए मुख्य समाधान प्राप्त करने के लिए, पूरक को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ 1:10 पतला किया जाता है।

भेड़ की लाल रक्त कोशिकाओं का उपयोग आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में निलंबन के रूप में किया जाता है। रक्त (100-150 मिली) गले की नस से लिया जाता है, कांच के मोतियों के साथ एक बाँझ जार में रखा जाता है, 10-15 मिनट के लिए हिलाकर डीफाइब्रिन किया जाता है और फ़ाइब्रिन को हटाने के लिए बाँझ धुंध की 3-4 परतों के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है। लाल रक्त कोशिकाओं को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान से 3 बार धोया जाता है, इसे लाल रक्त कोशिका तलछट में मूल रक्त मात्रा में मिलाया जाता है। लाल रक्त कोशिकाओं को 4-6ºC के तापमान पर 5-6 दिनों तक संग्रहीत किया जा सकता है। लाल रक्त कोशिकाओं का शेल्फ जीवन तब बढ़ जाता है जब उन्हें फॉर्मेल्डिहाइड के साथ संरक्षित किया जाता है।

आरएससी के लिए हेमोलिटिक सीरम इस प्रकार प्राप्त किया जाता है: धुली हुई भेड़ की लाल रक्त कोशिकाओं के 50% निलंबन (हर दूसरे दिन 4-6 बार 1 मिलीलीटर) के साथ खरगोशों को कान की नस में इंजेक्ट करके टीकाकरण करें। अंतिम इंजेक्शन के 7 दिन बाद, एक परीक्षण सीरम प्राप्त किया जाता है। यदि सीरम टिटर 1:1200 से कम नहीं है, तो रक्तपात किया जाता है। सीरम को 56ºC के तापमान पर 30 मिनट तक गर्म किया जाता है। बैक्टीरिया के विकास को रोकने के लिए, हेमोलिटिक सीरम में एक परिरक्षक (मेरथिओलेट 1:10000 या 1 बोरिक एसिड) मिलाया जाता है।

हेमोलिटिक प्रणाली में हेमोलिटिक सीरम (ट्रिपल टिटर में लिया गया) और भेड़ एरिथ्रोसाइट्स के 3 निलंबन समान मात्रा में मिश्रित होते हैं। हेमोलिसिन के साथ एरिथ्रोसाइट्स को संवेदनशील बनाने के लिए, मिश्रण को 30 मिनट के लिए 37ºC के तापमान पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है।

हेमोलिटिक सीरम का अनुमापन.सीरम का शीर्षक इसके 0.5 मिलीलीटर (1:600, 1:1200, 1:1600, 1:3200, आदि के घोल में) को लाल रक्त कोशिकाओं के 3 निलंबन के 0.5 मिलीलीटर और ताजा पूरक के 0.5 मिलीलीटर के साथ मिलाकर किया जाता है। तनुकरण 1:10. नियंत्रण ट्यूबों में प्रतिक्रिया मिश्रण की मात्रा को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान जोड़कर 1.5 मिलीलीटर तक समायोजित किया जाता है। 37ºC के तापमान पर ऊष्मायन के 1 घंटे के बाद प्रतिक्रिया परिणामों को ध्यान में रखा जाता है। हेमोलिटिक सीरम के अनुमापांक को इसका उच्चतम तनुकरण माना जाता है जिससे पूर्ण हेमोलिसिस होता है। सीरम को लियोफिलाइज्ड रूप में संग्रहित किया जाता है।

हेमोलिटिक सीरम अनुमापन योजना

पूरक अनुमापन.प्रयोग से पहले, पूरक का मुख्य समाधान (1:10) 0.05 से 0.5 मिलीलीटर तक परीक्षण ट्यूबों की एक पंक्ति में डाला जाता है और प्रत्येक में एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान जोड़ा जाता है, जिससे तरल की मात्रा 1.5 मिलीलीटर हो जाती है। ट्यूबों को थर्मोस्टेट में 37ºC के तापमान पर 45 मिनट के लिए रखा जाता है, फिर हेमोलिटिक सिस्टम को उनमें जोड़ा जाता है और 30 मिनट के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है, जिसके बाद पूरक टिटर निर्धारित किया जाता है।

प्रयोग के लिए, पूरक की एक कार्यशील खुराक (0.5 मिली की मात्रा में निहित) लें, जो अनुमापांक से 20-30% अधिक है।

पूरक अनुमापन योजना

45 मिनट के लिए 37ºC पर थर्मोस्टेट

30 मिनट के लिए 37ºC पर थर्मोस्टेट

प्रतिजन अनुमापन.आरएससी के लिए उपयोग किए जाने वाले एंटीजन एक निश्चित मात्रा में पूरक को सोख सकते हैं, अर्थात। पूरक-विरोधी गुण होते हैं। इसलिए, प्रयोग करने से पहले, एंटीजन को पूरक की कार्यशील खुराक की उपस्थिति में शीर्षक दिया जाता है। कुछ हद तक, औद्योगिक रूप से उत्पादित विशिष्ट एंटीजन में पूरक-विरोधी गुण व्यक्त होते हैं। उनका अनुमापांक प्रत्येक प्रयोग से पहले नहीं, बल्कि महीने में एक बार भंडारण के दौरान इसकी कमी की संभावना को ध्यान में रखते हुए निर्धारित किया जाता है।

एंटीजन टिटर निर्धारित करने के लिए, इसे 0.5 से 0.05 मिलीलीटर तक घटती मात्रा में टेस्ट ट्यूबों की एक श्रृंखला में डाला जाता है, सोडियम क्लोराइड समाधान जोड़कर मात्रा को 1 मिलीलीटर तक लाया जाता है। फिर प्रत्येक टेस्ट ट्यूब में पूरक की कार्यशील खुराक का 0.5 मिलीलीटर जोड़ा जाता है और 37ºC के तापमान पर 1 घंटे के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है। इसके बाद, हेमोलिटिक प्रणाली का 1 मिलीलीटर सभी परीक्षण ट्यूबों में जोड़ा जाता है, फिर से 1 घंटे के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है, और प्रतिक्रिया परिणामों को ध्यान में रखा जाता है।

एंटीजन टिटर को सबसे छोटी मात्रा माना जाता है जिस पर पूर्ण हेमोलिसिस होता है। आरएससी के लिए, एंटीजन की एक कार्यशील खुराक का उपयोग किया जाता है, जो लगभग 1/2-1/3 टिटर है। ऐसे एंटीजन जिनकी उपस्थिति में पूरक अनुमापांक 30% से अधिक कम हो जाता है, प्रतिक्रिया के लिए अनुपयुक्त होते हैं।

एंटीजन अनुमापन योजना

1 घंटे के लिए 37ºC पर थर्मोस्टेट

1 घंटे के लिए 37ºC पर थर्मोस्टेट

डीएससी का मुख्य प्रयोग आयोजित करना।प्रतिक्रिया अवयवों की कुल मात्रा 2.5 मिली है, उनमें से प्रत्येक की कार्यशील खुराक की मात्रा 0.5 मिली है। पहली ट्यूब में उचित तनुकरण में सीरम, एंटीजन और पूरक मिलाया जाता है, दूसरी ट्यूब में उचित तनुकरण पर सीरम, पूरक और आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल (सीरम नियंत्रण) मिलाया जाता है, दूसरी ट्यूब में एंटीजन, पूरक और आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल (एंटीजन नियंत्रण) मिलाया जाता है। ) को तीसरी ट्यूब में जोड़ा जाता है। साथ ही, ट्रिपल टिटर (निर्देशों में निर्दिष्ट के सापेक्ष) में 2 मिलीलीटर हेमोलिटिक सीरम और भेड़ एरिथ्रोसाइट्स के 3% निलंबन (मूल रक्त मात्रा के सापेक्ष) को मिलाकर एक हेमोलिटिक प्रणाली तैयार करें। ट्यूबों को 1 घंटे के लिए 37ºC के तापमान पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है, फिर हेमोलिटिक प्रणाली का 1 मिलीलीटर पहले 3 ट्यूबों (पहली प्रणाली) (दूसरी प्रणाली) में जोड़ा जाता है। सामग्री को अच्छी तरह मिलाने के बाद, टेस्ट ट्यूब को फिर से 37ºC के तापमान पर 1 घंटे के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है।

आरएसके का मुख्य प्रयोग आयोजित करने की योजना

1 घंटे के लिए 37ºC पर थर्मोस्टेट

1 घंटे के लिए 37ºC पर थर्मोस्टेट

प्रतिक्रिया परिणामों को प्रारंभिक रूप से ध्यान में रखा जाता है - थर्मोस्टेट से टेस्ट ट्यूब को हटाने के बाद और अंत में - रेफ्रिजरेटर में या कमरे के तापमान पर 15-18 घंटे तक रहने के बाद।

अंतिम लेखांकन में, प्रतिक्रिया की तीव्रता प्लसस द्वारा व्यक्त की जाती है: (++++) - एक तीव्र सकारात्मक प्रतिक्रिया, जिसमें हेमोलिसिस में पूर्ण देरी होती है (टेस्ट ट्यूब में तरल रंगहीन होता है, सभी लाल रक्त कोशिकाएं बस जाती हैं तल); (+++, ++) - एक सकारात्मक प्रतिक्रिया, हेमोलिसिस के कारण तरल के बढ़े हुए रंग और तलछट में लाल रक्त कोशिकाओं की संख्या में कमी से प्रकट होती है; (+) - कमजोर सकारात्मक प्रतिक्रिया (तरल गहरे रंग का होता है, ट्यूब के नीचे थोड़ी मात्रा में लाल रक्त कोशिकाएं होती हैं)। एक नकारात्मक प्रतिक्रिया (-) के साथ, पूर्ण हेमोलिसिस देखा जाता है, टेस्ट ट्यूब में तरल का रंग गहरा गुलाबी (लैकरयुक्त रक्त) होता है।

आरएससी के कई संशोधन प्रस्तावित किए गए हैं, जो बढ़ी हुई संवेदनशीलता और उपयोग की जाने वाली सामग्री की कम मात्रा की विशेषता है। उदाहरण के लिए, वायरोलॉजिकल अध्ययनों में, ठंड में आरएससी के लिए सामग्री की मात्रा 1 मिली है। ड्रिप आरएससी के लिए, सीरम की 1 बूंद + एंटीजन की 1 बूंद + पूरक की 1 बूंद + हेमोलिटिक सिस्टम की 2 बूंदें लें।

कॉम्प्लिमेंट बाइंडिंग रिएक्शन का माइक्रोबायोलॉजिकल और सीरोलॉजिकल डायग्नोस्टिक्स में सबसे अधिक उपयोग किया जाता है।

आरएससी का उपयोग करके, सिफलिस, ग्लैंडर्स, क्रोनिक गोनोरिया, रिकेट्सियोसिस, वायरल रोगों आदि के रोगियों के रक्त सीरम में पूरक-फिक्सिंग एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है।

सीएससी क्लिनिकल इम्यूनोलॉजी के लिए विशेष रुचि रखता है। प्रतिक्रिया का उपयोग लिम्फोसाइटों की विभिन्न उप-आबादी को अलग करने, प्लेटलेट्स, प्रत्यारोपण योग्य लिम्फोब्लास्ट, फ़ाइब्रोब्लास्ट, ट्यूमर कोशिकाओं और प्लेटलेट-विशिष्ट एंटीजन, साथ ही संबंधित एंटीबॉडी पर एचएलए एंटीजन का पता लगाने के लिए किया जाता है।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया , आरएसके, बोर्डेटझांग की प्रतिक्रिया [बेल्जियम के नाम पर। बैक्टीरियोलॉजिस्ट जे. बोर्डेट और ओ. गेंगौ, 1901], मुक्त पूरक को ठीक करने के लिए एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स की संपत्ति पर आधारित एक अत्यधिक विशिष्ट और बहुत संवेदनशील सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया, जिसका उपयोग कई बैक्टीरिया और वायरल और कुछ प्रोटोजोअल और के निदान में किया जाता है। हेल्मिंथिक रोग, साथ ही एंटीजन या एंटीबॉडी की मात्रा में परिवर्तन के साथ प्रक्रियाओं का अध्ययन करना। आरएससी 2 चरणों में आगे बढ़ता है: 1) एंटीबॉडी, एंटीजन और पूरक की परस्पर क्रिया, जिसके परिणामस्वरूप मुक्त पूरक परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स (विशिष्ट चरण) से बंधा होता है; 2) एरिथ्रोसाइट्स (गैर विशिष्ट चरण) द्वारा संवेदनशील प्रतिक्रिया का संकेत। आरएससी 2 प्रणालियों का उपयोग करता है: एक विशिष्ट बैक्टीरियोलॉजिकल प्रणाली, जिसमें एक एंटीबॉडी (परीक्षण सीरम), एंटीजन और पूरक, साथ ही एक गैर-विशिष्ट "संकेतक" प्रणाली जिसमें हेमोलिसिन (हेमोलिटिक सीरम) और भेड़ एरिथ्रोसाइट्स का निलंबन शामिल है। एंटीजन, एंटीबॉडी के साथ केवल पूरक की उपस्थिति में ही संयोजित होता है। यदि परीक्षण सीरम में लिए गए एंटीजन के समरूप एंटीबॉडी होते हैं, तो प्रतिक्रिया मिश्रण में मौजूद पूरक परिणामी एंटीजन × एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स द्वारा सोख लिया जाता है और संवेदनशील लाल रक्त कोशिकाओं को नष्ट करने की क्षमता खो देता है, अर्थात, पूरक के बिना, हेमोलिसिन (हेमोलिटिक एंटीबॉडी) ) लाल रक्त कोशिकाओं को नष्ट नहीं करता (प्रतिक्रिया सकारात्मक है)। ऐसे मामलों में जहां परीक्षण सीरम के एंटीजन और एंटीबॉडी के बीच कोई विशिष्ट संबंध नहीं होता है, कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है और पूरक मुक्त अवस्था में रहता है। इस मामले में हेमोलिटिक प्रणाली जोड़ते समय, अनबाउंड पूरक संवेदनशील लाल रक्त कोशिकाओं (नकारात्मक प्रतिक्रिया) के हेमोलिसिस का कारण बनता है। आरएससी के मंचन के लिए विभिन्न विकल्प हैं: मैक्रो- और माइक्रोवेरिएंट के रूप में मंचन की शास्त्रीय विधि, ठंड में दीर्घकालिक पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (एलडीएसटी), संवेदीकृत एरिथ्रोसाइट्स के 50% हेमोलिसिस पर आधारित मात्रात्मक आरएससी की विधि, आदि। पशु चिकित्सा निदान अभ्यास में, क्लासिक आरएससी विधि का उपयोग अक्सर मैक्रो विकल्प के रूप में किया जाता है, जिसमें प्रत्येक घटक का 0.5 या 0.25 मिलीलीटर एक निश्चित कामकाजी टिटर में लिया जाता है। पूरक को बैक्टीरियोलॉजिकल प्रणाली में जानवरों की उन्हीं प्रजातियों के सीरा का उपयोग करके शीर्षक दिया जाता है जिनके रक्त की जांच की जानी है। टेस्ट सीरा का परीक्षण आमतौर पर एंटीजन के साथ 1:5 और 1:10 के तनुकरण पर और एंटीजन (नियंत्रण) के बिना 1:5 के तनुकरण पर किया जाता है। विशिष्ट चरण में पूरक निर्धारण का समय 20 मिनट है, गैर-विशिष्ट चरण में हेमोलिसिस प्रतिक्रिया का समय 20 मिनट है टी 3738ºC. कई बीमारियों के निदान के लिए अधिक संवेदनशील विधि, डीएससीटी का उपयोग किया जाता है। इस मामले में, प्रतिक्रिया का पहला चरण पूरा किया जाता है टी 1618 घंटों के लिए 46ºC, जिससे एंटीजन और एंटीबॉडी की थोड़ी मात्रा द्वारा पूरक का अधिशोषण बढ़ जाता है। फिर हेमोलिटिक सिस्टम जोड़ा जाता है और प्रतिक्रिया आगे बढ़ती है टी 20 मिनट के लिए 3738ºC। आरएसके और आरडीएससी के परिणामों को हेमोलिसिस देरी की डिग्री के अनुसार ध्यान में रखा जाता है, जो एरिथ्रोसाइट हेमोलिसिस के निम्नलिखित प्रतिशत के अनुरूप क्रॉस या माइनस द्वारा इंगित किया जाता है: ++++ 0 से 10% तक; +++ 10 से 40% तक; ++ 40 से 70% तक; + 70 से 90% तक; 90 से 100% तक. पशु चिकित्सा कानून प्रत्येक बीमारी के लिए अलग से आरएससी और आरडीएसके के निर्माण, रिकॉर्डिंग और मूल्यांकन के लिए विशेष निर्देश प्रदान करता है।

साहित्य:
पशु चिकित्सा में प्रयोगशाला अनुसंधान, एम., 1971;
इम्यूनोलॉजी के लिए गाइड, एड. ओ. ई. व्याज़ोवा और श्री खोडज़ेवा, एम., 1973।

पशु चिकित्सा विश्वकोश शब्दकोश. - एम.: "सोवियत विश्वकोश". प्रधान संपादक वी.पी. शिश्कोव. 1981 .

देखें अन्य शब्दकोशों में "" क्या है:

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया- (आरएसके) सेरोल। पूरक-फिक्सिंग एब्स और एजी के मात्रात्मक निर्धारण के लिए उपयोग की जाने वाली प्रतिक्रिया। आरएससी का सिद्धांत यह है कि एक विशिष्ट प्रतिरक्षा कॉम्प्लेक्स सिस्टम में जोड़े गए सी को पूरी तरह या आंशिक रूप से सोख लेता है। सूक्ष्म जीव विज्ञान का शब्दकोश

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया- आरएसके प्रयोगशाला विधि। [वैक्सीनोलॉजी और टीकाकरण में बुनियादी शब्दों की अंग्रेजी-रूसी शब्दावली। विश्व स्वास्थ्य संगठन, 2009] विषय वैक्सीनोलॉजी, टीकाकरण आरएससी ईएन पूरक निर्धारण परीक्षण सीएफटीसीएफ परीक्षण के पर्यायवाची ... तकनीकी अनुवादक मार्गदर्शिका

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया- I पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया एक सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया है जिसका उपयोग एंटीजन या एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए किया जाता है, जो एंटीजन-एंटीबॉडी परिसरों द्वारा पूरक की खपत (निर्धारण) के आकलन के आधार पर होता है, इम्यूनोलॉजिकल अनुसंधान विधियां देखें। द्वितीय... ... चिकित्सा विश्वकोश

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया- पूरक निर्धारण की रस प्रतिक्रिया (जी), प्रतिक्रिया (जी) बोर्डेट झांगौ; प्रतिक्रिया (जी) पूरक अस्वीकृति; एलेक्सिन फिक्सेशन रिएक्शन (जी) इंजी कॉम्प्लीमेंट फिक्सेशन टेस्ट फ्रारा रिएक्शन (एफ) डी फिक्सेशन डु कंप्लीमेंट देउ कॉम्प्लीमेंटबिंडुंग्सरिएक्शन (एफ) स्पा… …

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया- (आरएसके), एक अत्यधिक संवेदनशील और विशिष्ट सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया जिसका उपयोग कई संक्रामक और आक्रामक पशु रोगों के निदान के लिए किया जाता है। दो क्रमिक चरणों से मिलकर बनता है। पहले चरण में, एंटीजन को परीक्षण सीरम के साथ मिलाया जाता है और... ... कृषि। बड़ा विश्वकोश शब्दकोश

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया- (आरएसके; पर्यायवाची: बोर्डेट झांगू प्रतिक्रिया, पूरक अस्वीकृति प्रतिक्रिया पुरानी, ​​​​एलेक्सिन निर्धारण प्रतिक्रिया पुरानी) पूरक को बांधने के लिए परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स की क्षमता के आधार पर सीरोलॉजिकल अनुसंधान की एक विधि, जिसका पता लगाया जाता है... ... बड़ा चिकित्सा शब्दकोश- पूरक निर्धारण की रस प्रतिक्रिया (जी), प्रतिक्रिया (जी) बोर्डेट झांगौ; प्रतिक्रिया (जी) पूरक अस्वीकृति; एलेक्सिन फिक्सेशन रिएक्शन (जी) इंजी कॉम्प्लीमेंट फिक्सेशन टेस्ट फ्रारा रिएक्शन (एफ) डी फिक्सेशन डु कंप्लीमेंट देउ कॉम्प्लीमेंटबिंडुंग्सरिएक्शन (एफ) स्पा… … व्यावसायिक सुरक्षा और स्वास्थ्य। अंग्रेजी, फ्रेंच, जर्मन, स्पेनिश में अनुवाद

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया- पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया देखें। (

लगभग सभी संक्रामक रोगों का प्रयोगशाला निदान रोगी के रक्त में एंटीबॉडी की पहचान पर आधारित होता है जो सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं का उपयोग करके रोगज़नक़ एंटीजन के खिलाफ उत्पन्न होते हैं। उन्होंने उन्नीसवीं सदी के अंत से लेकर बीसवीं सदी की शुरुआत तक चिकित्सा पद्धति में प्रवेश किया।

विज्ञान के विकास ने रोगाणुओं की एंटीजेनिक संरचना और उनके विषाक्त पदार्थों के रासायनिक सूत्रों को निर्धारित करने में मदद की है। इससे न केवल चिकित्सीय, बल्कि नैदानिक ​​सीरा बनाना भी संभव हो गया। वे प्रयोगशाला जानवरों में कमजोर रोगजनकों को इंजेक्ट करके प्राप्त किए जाते हैं। कई दिनों के ऊष्मायन के बाद, खरगोशों या चूहों के रक्त से तैयारी तैयार की जाती है जिसका उपयोग सीरोलॉजिकल परीक्षणों का उपयोग करके रोगाणुओं या उनके विषाक्त पदार्थों की पहचान करने के लिए किया जाता है।

ऐसी प्रतिक्रिया की बाहरी अभिव्यक्ति इसके उत्पादन की स्थितियों और रोगी के रक्त में एंटीजन की स्थिति पर निर्भर करती है। यदि माइक्रोबियल कण अघुलनशील होते हैं, तो वे सीरम में अवक्षेपित हो जाते हैं, घुल जाते हैं, बंध जाते हैं या स्थिर हो जाते हैं। यदि एंटीजन घुलनशील हैं, तो उदासीनीकरण या अवक्षेपण की घटना घटित होती है।

एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (आरए)

सीरोलॉजिकल एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया अत्यधिक विशिष्ट है। इसे करना आसान है और देखने में यह काफी आसान है, जिससे रोगी के रक्त सीरम में एंटीजन की उपस्थिति का शीघ्रता से पता लगाया जा सकता है। इसका उपयोग विडाल प्रतिक्रिया (टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार का निदान) और वीगल प्रतिक्रिया (टाइफस बुखार) करने के लिए किया जाता है।

यह मानव एंटीबॉडी (या एग्लूटीनिन) और माइक्रोबियल कोशिकाओं (एग्लूटेनोजेन्स) के बीच विशिष्ट बातचीत पर आधारित है। उनकी परस्पर क्रिया के बाद, कण बनते हैं जो अवक्षेपित होते हैं। यह एक सकारात्मक संकेत है. प्रतिक्रिया को चरणबद्ध करने के लिए जीवित या मारे गए माइक्रोबियल एजेंटों, कवक, प्रोटोजोआ और दैहिक कोशिकाओं का उपयोग किया जा सकता है।

रासायनिक रूप से, प्रतिक्रिया को दो चरणों में विभाजित किया गया है:

1. एंटीजन (एजी) के साथ एंटीबॉडी (एटी) का विशिष्ट संयोजन।
2. गैर-विशिष्ट - एजी-एटी समूह का अवक्षेपण, यानी एग्लूटीनेट का निर्माण।

अप्रत्यक्ष एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (आईएआर)

इसे करने के लिए, शुद्ध भेड़ एरिथ्रोसाइट्स और मानव लाल रक्त कोशिकाओं, एंटीबॉडी या एंटीजन के साथ पूर्व-उपचार किया जाता है (यह इस बात पर निर्भर करता है कि प्रयोगशाला तकनीशियन वास्तव में क्या खोजना चाहता है), का उपयोग किया जाता है। कुछ मामलों में, मानव लाल रक्त कोशिकाओं का उपचार इम्युनोग्लोबुलिन से किया जाता है। एरिथ्रोसाइट्स की सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं सफल मानी जाती हैं यदि वे ट्यूब के नीचे तक बस जाती हैं। हम एक सकारात्मक प्रतिक्रिया के बारे में बात कर सकते हैं जब कोशिकाओं को एक उल्टे छतरी के रूप में व्यवस्थित किया जाता है, जो पूरे तल पर कब्जा कर लेता है। एक नकारात्मक प्रतिक्रिया तब गिनी जाती है जब लाल रक्त कोशिकाएं एक स्तंभ में या नीचे के केंद्र में एक बटन के रूप में बस जाती हैं।

वर्षा प्रतिक्रिया (आरपी)

इस प्रकार के सीरोलॉजिकल परीक्षणों का उपयोग एंटीजन के अत्यंत छोटे कणों का पता लगाने के लिए किया जाता है। ये हो सकते हैं, उदाहरण के लिए, प्रोटीन (या उसके हिस्से), लिपिड या कार्बोहाइड्रेट के साथ प्रोटीन के यौगिक, बैक्टीरिया के हिस्से और उनके विषाक्त पदार्थ।

प्रतिक्रिया के लिए सीरा कृत्रिम रूप से जानवरों, आमतौर पर खरगोशों को संक्रमित करके प्राप्त किया जाता है। इस विधि का उपयोग करके, आप बिल्कुल कोई भी अवक्षेपण सीरम प्राप्त कर सकते हैं। सीरोलॉजिकल अवक्षेपण प्रतिक्रियाओं का उत्पादन क्रिया के तंत्र में एग्लूटिनेशन प्रतिक्रियाओं के समान है। सीरम में मौजूद एंटीबॉडीज एंटीजन के साथ मिलकर बड़े प्रोटीन अणु बनाते हैं जो ट्यूब के नीचे या सब्सट्रेट (जेल) पर जमा हो जाते हैं। यह विधि अत्यधिक विशिष्ट मानी जाती है और किसी पदार्थ की सूक्ष्म मात्रा का भी पता लगा सकती है।

प्लेग, टुलारेमिया, एंथ्रेक्स, मेनिनजाइटिस और अन्य बीमारियों के निदान के लिए उपयोग किया जाता है। इसके अलावा, वह फोरेंसिक मेडिकल जांच में भी शामिल हैं।

जेल में

सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं न केवल तरल माध्यम में, बल्कि अगर जेल में भी की जा सकती हैं। इसे विसरित अवक्षेपण विधि कहते हैं। इसकी सहायता से जटिल एंटीजेनिक मिश्रण की संरचना का अध्ययन किया जाता है। यह विधि एंटीजन से एंटीबॉडी के केमोटैक्सिस और इसके विपरीत पर आधारित है। जेल में, वे अलग-अलग गति से एक-दूसरे की ओर बढ़ते हैं और मिलते हैं, अवक्षेपण रेखाएँ बनाते हैं। प्रत्येक पंक्ति AG-AT का एक सेट है।

एंटीटॉक्सिन (आरएन) के साथ एक्सोटॉक्सिन न्यूट्रलाइजेशन प्रतिक्रिया

एंटीटॉक्सिक सीरम सूक्ष्मजीवों द्वारा उत्पादित एक्सोटॉक्सिन के प्रभाव को बेअसर कर सकते हैं। ये सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं इसी पर आधारित हैं। माइक्रोबायोलॉजी इस पद्धति का उपयोग सीरम, विषाक्त पदार्थों और टॉक्सोइड्स का अनुमापन करने के साथ-साथ उनकी चिकित्सीय गतिविधि निर्धारित करने के लिए करती है। विष निराकरण की शक्ति पारंपरिक इकाइयों - एई द्वारा निर्धारित की जाती है।

इसके अलावा, इस प्रतिक्रिया के लिए धन्यवाद, एक्सोटॉक्सिन की प्रजाति या प्रकार का निर्धारण करना संभव है। इसका उपयोग डिप्थीरिया, बोटुलिज़्म के लिए किया जाता है। अध्ययन "कांच पर" और जेल दोनों में किया जा सकता है।

लाइसिस प्रतिक्रिया (आरएल)

रोगी के शरीर में प्रवेश करने वाले प्रतिरक्षा सीरम में निष्क्रिय प्रतिरक्षा के अपने मुख्य कार्य के अलावा, लाइसिंग गुण भी होते हैं। यह रोगी के शरीर में प्रवेश करने वाले माइक्रोबियल एजेंटों, विदेशी सेलुलर तत्वों और वायरस को भंग करने में सक्षम है। सीरम में निहित एंटीबॉडी की विशिष्टता के आधार पर, बैक्टीरियोलिसिन, साइटोलिसिन, स्पाइरोचेटोलिसिन, हेमोलिसिन और अन्य को अलग किया जाता है।

इन विशिष्ट एंटीबॉडीज़ को "पूरक" कहा जाता है। यह मानव शरीर के लगभग सभी तरल पदार्थों में पाया जाता है, इसमें एक जटिल प्रोटीन संरचना होती है और यह बढ़े हुए तापमान, झटकों, एसिड और सीधी धूप के प्रति बेहद संवेदनशील होता है। लेकिन सूखने पर यह छह महीने तक अपने लाइसिंग गुणों को बरकरार रख सकता है।

इस प्रकार की सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं निम्नलिखित प्रकार की होती हैं:

बैक्टीरियोलिसिस;

हेमोलिसिस।

रोगी के रक्त सीरम और जीवित रोगाणुओं के साथ विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम का उपयोग करके बैक्टीरियोलिसिस किया जाता है। यदि रक्त में पर्याप्त मात्रा में पूरक मौजूद है, तो शोधकर्ता बैक्टीरिया का लसीका देखेगा, और प्रतिक्रिया सकारात्मक मानी जाएगी।

दूसरी सीरोलॉजिकल रक्त प्रतिक्रिया यह है कि रोगी की लाल रक्त कोशिकाओं के निलंबन का इलाज हेमोलिसिन युक्त सीरम से किया जाता है, जो केवल एक निश्चित प्रशंसा की उपस्थिति में सक्रिय होते हैं। यदि कोई है, तो प्रयोगशाला सहायक लाल रक्त कोशिकाओं के विघटन का निरीक्षण करता है। रक्त सीरम में पूरक के अनुमापांक (यानी, इसकी सबसे छोटी मात्रा जो लाल रक्त कोशिकाओं के लसीका को उत्तेजित करती है) को निर्धारित करने और पूरक निर्धारण परीक्षण करने के लिए आधुनिक चिकित्सा में इस प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। यह इस प्रकार है कि सिफलिस के लिए एक सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया की जाती है -

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर)

इस प्रतिक्रिया का उपयोग रोगी के रक्त सीरम में एक संक्रामक एजेंट के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने के साथ-साथ इसकी एंटीजेनिक संरचना द्वारा रोगज़नक़ की पहचान करने के लिए किया जाता है।

इस बिंदु तक हमने सरल सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं का वर्णन किया है। आरएससी को एक जटिल प्रतिक्रिया माना जाता है, क्योंकि इसमें दो नहीं, बल्कि तीन तत्व परस्पर क्रिया करते हैं: एंटीबॉडी, एंटीजन और पूरक। इसका सार इस तथ्य में निहित है कि एंटीबॉडी और एंटीजन के बीच बातचीत केवल पूरक प्रोटीन की उपस्थिति में होती है, जो परिणामी एजी-एटी कॉम्प्लेक्स की सतह पर अवशोषित होती है।

पूरक जोड़ने के बाद स्वयं एंटीजन में महत्वपूर्ण परिवर्तन होते हैं, जो निष्पादित प्रतिक्रिया की गुणवत्ता का संकेत देते हैं। यह लसीका, हेमोलिसिस, स्थिरीकरण, जीवाणुनाशक या बैक्टीरियोस्टेटिक प्रभाव हो सकता है।

प्रतिक्रिया स्वयं दो चरणों में होती है:

1. एक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का निर्माण जो शोधकर्ता को दृष्टिगोचर नहीं होता है।
2. पूरक के प्रभाव में प्रतिजन में परिवर्तन। इस चरण को अक्सर नग्न आंखों से देखा जा सकता है। यदि प्रतिक्रिया स्पष्ट रूप से दिखाई नहीं देती है, तो परिवर्तनों की पहचान करने के लिए एक अतिरिक्त संकेतक प्रणाली का उपयोग किया जाता है।

सूचक प्रणाली

यह प्रतिक्रिया पूरक निर्धारण पर आधारित है। शुद्ध भेड़ एरिथ्रोसाइट्स और हेमोलिटिक सीरम जिसमें पूरक नहीं होता है, आरएससी प्लेसमेंट के एक घंटे बाद टेस्ट ट्यूब में जोड़ा जाता है। यदि टेस्ट ट्यूब में अनबाउंड पूरक बचा है, तो यह भेड़ की रक्त कोशिकाओं और हेमोलिसिन के बीच बने एजी-एटी कॉम्प्लेक्स में शामिल हो जाएगा और उनके विघटन का कारण बनेगा। इसका मतलब यह होगा कि आरएससी नकारात्मक है। यदि लाल रक्त कोशिकाएं बरकरार रहती हैं, तो प्रतिक्रिया सकारात्मक होती है।

रक्तगुल्म प्रतिक्रिया (HRA)

दो मौलिक रूप से भिन्न हेमग्लूटीनेशन प्रतिक्रियाएं हैं। उनमें से एक सीरोलॉजिकल है, इसका उपयोग रक्त समूहों को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। इस मामले में, लाल रक्त कोशिकाएं एंटीबॉडी के साथ परस्पर क्रिया करती हैं।

और दूसरी प्रतिक्रिया सीरोलॉजिकल नहीं है, क्योंकि लाल रक्त कोशिकाएं वायरस द्वारा उत्पादित हेमाग्लगुटिनिन के साथ प्रतिक्रिया करती हैं। चूँकि प्रत्येक रोगज़नक़ केवल विशिष्ट लाल रक्त कोशिकाओं (मुर्गी, भेड़ का बच्चा, बंदर) पर कार्य करता है, इसलिए इस प्रतिक्रिया को अत्यधिक विशिष्ट माना जा सकता है।

आप टेस्ट ट्यूब के नीचे रक्त कोशिकाओं के स्थान से बता सकते हैं कि कोई प्रतिक्रिया सकारात्मक है या नकारात्मक। यदि उनका पैटर्न उल्टे छतरी जैसा दिखता है, तो इसका मतलब है कि रोगी के रक्त में वांछित वायरस मौजूद है। और यदि सभी लाल रक्त कोशिकाएं सिक्कों के स्तंभ की तरह बन जाती हैं, तो वांछित रोगज़नक़ मौजूद नहीं होते हैं।

रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया (HAI)

यह एक अत्यधिक विशिष्ट प्रतिक्रिया है जो आपको रोगी के रक्त सीरम में वायरस के प्रकार, प्रकार या विशिष्ट एंटीबॉडी की उपस्थिति निर्धारित करने की अनुमति देती है।

इसका सार इस तथ्य में निहित है कि परीक्षण सामग्री के साथ एक टेस्ट ट्यूब में जोड़े गए एंटीबॉडी लाल रक्त कोशिकाओं पर एंटीजन के जमाव को रोकते हैं, जिससे रक्तगुल्म रुक जाता है। यह खोजे जा रहे विशिष्ट वायरस के लिए रक्त में विशिष्ट एंटीजन की उपस्थिति का गुणात्मक संकेत है।

इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया (आरआईएफ)

यह प्रतिक्रिया फ्लोरोक्रोम रंगों से उपचारित करने के बाद एजी-एटी कॉम्प्लेक्स का पता लगाने की क्षमता पर आधारित है। इस विधि का उपयोग करना आसान है, इसमें शुद्ध संस्कृति को अलग करने की आवश्यकता नहीं होती है और इसमें कम समय लगता है। संक्रामक रोगों के त्वरित निदान के लिए यह अपरिहार्य है।

व्यवहार में, इन सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं को दो प्रकारों में विभाजित किया जाता है: प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष।

डायरेक्ट आरआईएफ एक एंटीजन के साथ निर्मित होता है जिसे फ्लोरोसेंट सीरम के साथ पूर्व-उपचार किया गया है। और अप्रत्यक्ष यह है कि दवा को पहले पारंपरिक डायग्नोस्टिकम के साथ इलाज किया जाता है जिसमें वांछित एंटीबॉडी के लिए एंटीजन होते हैं, और फिर एक ल्यूमिनसेंट सीरम फिर से लगाया जाता है, जो एजी-एटी कॉम्प्लेक्स के प्रोटीन के लिए विशिष्ट होता है, और माइक्रोबियल कोशिकाएं ध्यान देने योग्य हो जाती हैं। माइक्रोस्कोपी.