Stanovenie krvi pomocou štandardných sér. Stredné špecializačné vzdelanie medicínskeho profilu. Stanovenie krvnej skupiny pomocou štandardných červených krviniek

Zanechať komentár 6,950

Určite sa každý aspoň raz v živote stretol s testom krvnej skupiny. Témou dnešného článku je o tom, aké metódy existujú na určenie krvnej skupiny a ktoré z nich je najlepšie otestovať na príslušnosť k určitému druhu.

Prečo robiť testy krvných skupín?

Krvná skupina je v modernej hematológii chápaná ako špecifický súbor antigénov nachádzajúcich sa na povrchu červených krviniek, ktorý určuje ich špecifickosť. Týchto antigénov je obrovské množstvo (zvyčajne sa používa tabuľka skupín so všetkými druhmi antigénov), avšak klasifikácia krvi podľa systému ABO a Rh faktora je uznávaná na celom svete.

Krvná skupina sa musí určiť pri príprave na akékoľvek operácie. Povinné kontingenty, v ktorých sa určovanie krvnej skupiny vykonáva, zahŕňajú armádu, policajtov a dôstojníkov pre vnútorné záležitosti. Toto opatrenie je nevyhnutné, pretože v prípade rozvoja naliehavého stavu (život ohrozujúceho) môže byť potrebná transfúzia, keď nie je čas na vykonanie analýzy a testovania jej kompatibility s darcom.

Stanovenie krvných skupín pomocou štandardných metód

Existuje mnoho rôznych techník, ale štandardná sérová technika sa najčastejšie používa v klinických laboratóriách. Ako určiť krvnú skupinu pomocou štandardného séra?

Táto metóda sa používa na stanovenie antigénov systému AB0. Štandardné izohemaglutinačné sérum obsahuje súbor špecifických protilátok proti povrchovým molekulám červených krviniek. V prítomnosti antigénu, ktorý je predmetom pôsobenia protilátok, dochádza k tvorbe komplexu antigén-protilátka, ktorý vyvoláva spustenie kaskády imunitných reakcií. Výsledkom je aglutinácia červených krviniek, na základe povahy aglutinácie možno urobiť záver o klasifikácii vzorky ako určitej krvnej skupiny.

Štandardné séra sa pripravujú z darcovskej krvi podľa určitého systému – izoláciou plazmy s prítomnými protilátkami a jej následným zriedením. Riedenie sa uskutočňuje pomocou izotonického roztoku chloridu sodného.

Riedenie sa vykonáva nasledovne: 1 ml plazmy sa pridá do skúmavky s 1 ml 0,9 percentného roztoku kuchynskej soli a roztok sa dôkladne premieša. Potom sa 1 ml výsledného roztoku plazmy odoberie pipetou a pridá sa do druhej skúmavky obsahujúcej izotonický roztok. Tak sa dosiahne riedenie plazmy 1:256. Použitie iných riedení môže viesť k diagnostickým chybám.

Technika výskumu je nasledovná – na špeciálnu doštičku na určenie krvnej skupiny sa nanesie jedna kvapka (celkový objem cca 0,1 ml) každého séra do oblasti s príslušnou značkou (používajú sa séra z dvoch vzoriek, z ktorých jedna je kontrola a druhá sa používa na štúdium). Potom sa testovaná vzorka (0,01 ml) umiestni do blízkosti každej kvapky séra a potom sa zmieša oddelene s každým typom diagnostika.

Po určitom čase (v priemere asi 5 minút) sa výsledky analyzujú s popisom povahy reakcie, ku ktorej došlo:

ak sa v testovanej vzorke vyskytne aglutinácia, test je pozitívny;
ak nedôjde k aglutinácii, potom je reakcia negatívna.

Zjednodušene povedané, prítomnosť aglutinácie naznačuje, že krv obsahuje potrebnú sadu aglutinogénov, a ak k nej dôjde, potom krv patrí do skupiny, pre ktorú sú v sére obsiahnuté protilátky. Na základe získaných výsledkov sa zostaví tabuľka alebo diagram, ktorý vizuálne zobrazuje výsledky.

Metóda krížovej reakcie

Táto technika pozostáva zo stanovenia aglutinogénov pomocou koliklonov alebo štandardných sér s paralelnou detekciou aglutinínov pomocou štandardných erytrocytov.

Metodika sa prakticky nelíši od stanovenia krvnej skupiny pomocou séra, existujú však určité dodatky.

Jedna malá kvapka štandardných červených krviniek sa pridá na platňu pod aplikovaným sérom. Potom sa zo skúmavky s krvou pacienta, ktorá prešla odstredivkou, extrahuje plazma pomocou pipety, ktorá sa pridá k štandardným červeným krvinkám a červené krvinky na dne sa pridajú do štandardného séra.

Rovnako ako pri štandardnej sérovej metóde sa získané výsledky hodnotia niekoľko minút po začiatku reakcie. Pri prítomnosti aglutinácie v štandardných sérach sa posudzuje prítomnosť aglutinínov systému AB0 a pri vývoji reakcie plazmy so štandardnými erytrocytmi sa posudzuje prítomnosť aglutinogénov.

Krížová metóda sa rozšírila vďaka tomu, že zabraňuje veľkým diagnostickým chybám pri určovaní krvi pomocou štandardných metód.

Definícia skupiny zoliklonmi

K použitiu koliklonov sa pristupuje vtedy, keď nie je možné určiť antigény systému AB0 pomocou štandardných sér.

Tsoliklony sú špecifické protilátky získané ich hybridizáciou v živom organizme (zvyčajne sa používajú tsoliklony získané z myší modifikáciou B lymfocytov). Ich charakteristickým znakom je vývoj imunitnej reakcie medzi koliklonom a antigénom A alebo B lokalizovaným na povrchu membrány erytrocytov.

Algoritmus použitia monoklonálnych protilátok je nasledovný: na tabletu sa aplikuje jedna veľká kvapka roztoku tsoliklonov (treba si vyznačiť, kde a ktoré tsoliklony sa nachádzajú). Potom sa do séra pridá jedna kvapka testovanej krvi a po niekoľkých minútach sa vyhodnotia výsledky.

Test je potrebné vykonať v špeciálne vytvorených podmienkach v súlade s teplotou a vlhkosťou (pred vykonaním tejto analýzy musíte zabezpečiť vhodnosť zoliklonov).

Test sa považuje za pozitívny, ak v testovanej vzorke došlo k aglutinácii červených krviniek (t. j. došlo k reakcii medzi protilátkou a antigénom). Ak sa pozoruje pozitívny výsledok v dvoch kvapkách, vzorka sa považuje za patriacu do skupiny IV. Ak sa naopak reakcia nevyskytla v žiadnej vzorke, potom je krvná skupina pravdepodobne I. Chyby pri určovaní krvi touto metódou sú zriedkavé.

Expresná metóda „Erythrotest“

Napriek tomu, že všeobecne akceptované metódy určovania krvných skupín sú rozšírené, expresné metódy určovania krvných skupín sa v súčasnosti vo veľkej miere zavádzajú do lekárskej a laboratórnej praxe. Jedným z nich je „Erythrotest“.

Súprava na určenie krvnej skupiny „Erythrotest-Groupcard“ pozostáva z nasledujúcich komponentov:

univerzálna tableta s piatimi otvormi na určenie skupiny podľa systému AB0 a jej Rh príslušnosti;
vertikutátor na získanie vzorky na výskum;
čistá pipeta, pomocou ktorej sa vykoná sada roztokov;
sklenené tyčinky používané na miešanie vzoriek.

Všetky vyššie uvedené zariadenia sú potrebné pre správnu expresnú diagnostiku.

Táto technika umožňuje určiť krvnú skupinu a Rh faktor v akýchkoľvek podmienkach, najmä ak nie je možné použiť klasické metódy.

Proces analýzy metódou Erythrotest

Jamky tablety obsahujú tsoliklony k povrchovým antigénom (tsoliclon anti-A, anti-B, anti-AB), ako aj k hlavnému antigénu, ktorý určuje dedičnosť Rh faktora (tsoliclone anti-D). Piata jamka obsahuje kontrolné činidlo, ktoré vám umožňuje predchádzať chybám a správne vykonávať analýzu pre príslušnosť k skupine.

Na vyhodnotenie získaných výsledkov sa používa špeciálna tabuľka, v ktorej sú uvedené všetky možné výsledky výskumu.

V súčasnosti medicína dosiahla veľké výšky. Lekári sú schopní vykonávať dlhé operácie a zachraňovať ľudí aj z tých zdanlivo beznádejných situácií z hľadiska prežitia. V takýchto prípadoch však treba čeliť problému potreby transfúzie krvi. Dlho to nebolo možné, pretože pacienti zomierali veľmi rýchlo. Tento problém však vyriešil objav konceptu krvných skupín, či skôr detekcia antigénov na erytrocytoch a následne protilátok v krvnej plazme.

Stanovenie krvnej skupiny pomocou štandardných sér

Čo je krvná skupina

Začiatkom dvadsiateho storočia objavil austrálsky lekár a vedec na čiastočný úväzok K. Landsteiner prítomnosť antigénov a protilátok v krvi. Antigény sa nachádzajú na povrchu červených krviniek. Sú ich 2 druhy. Pre jednoduchosť ich biológovia označili ako A a B. Protilátky sú zase obsiahnuté v krvnej plazme a nazývajú sa α a β. Ak je A spojené s α a B s β, začne proces zrážania krvi. Táto reakcia sa nazýva hemaglutinácia.

Z dostupných súborov antigénov a protilátok je teda možné vytvoriť 4 typy krvi, ktoré sú uvedené v tabuľke nižšie:

Krvné skupiny a charakter

Dôležité! V závislosti od toho, aký typ darcovskej krvi je poskytnutý na transfúziu, krv pacienta sa buď zráža, alebo nie. Prvý prípad je smrteľný.

Séra na reakciu

V súčasnosti existuje pomerne veľké množstvo spôsobov, ako určiť krvnú skupinu. Väčšina z nich je však určená na analýzu vo veľkých laboratóriách. Aj keď sa však nachádzate v malej obci alebo na mieste, kde nie je možné takéto inštitúcie kontaktovať, stále zostáva možnosť identifikácie čísla vašej krvnej skupiny.

Stanovenie krvnej skupiny sa vykonáva pomocou štyroch špeciálnych štandardných sér, ktoré budú vyrobené z ľudskej krvi. Sú dostupné buď vo fľaštičkách alebo v ampulkách s objemom 2-5 ml a zodpovedajú rôznym krvným skupinám:

0. Dodáva sa s bielym štítkom a je čírej farby.
A. Modrá kvapalina. Na fľašu sú aplikované dva modré pruhy.
B. Bledoružová tekutina. Na fľaši sú tri pruhy rovnakej farby.
AB. Žltá kvapalina. Fľaša má 4 pruhy rovnakej farby.

Séra na testovanie krvných skupín

Dôležité! V skutočnosti sú tieto činidlá pri výrobe bezfarebné. Sú špeciálne natreté tak, aby ich pri používaní nebolo možné zameniť.

Na štítkoch sú tiež:

titer;
dátum výroby;
dátum minimálnej trvanlivosti;
informácie o výrobcovi;
sériové číslo.

Ako sa určuje krvná skupina?

Na určenie vašej krvnej skupiny budete potrebovať:

plochá doska s 8 priehlbinami;
sklenené tyčinky alebo pipety - 8 kusov;
2 sady sér rôznych sérií, aby sa eliminovala možnosť chýb;
bežné alebo presýpacie hodiny.

Prístroje na stanovenie krvi pomocou štandardných sér

Séra sa umiestnia v 2 radoch na rovnú dosku, po ktorej sa odoberú sklenené tyčinky. S ich pomocou sa testovaná krv zavádza do riadkov. Mieša týmito tyčinkami, po ktorých sa tanier začne hojdať. Ak máte šťastie, proces je možné sledovať za 10-30 sekúnd, ale je lepšie to urobiť až 5 minút, aby ste vylúčili možnosť pomalej reakcie. Potom sa získané výsledky študujú a dešifrujú.

Pozor! V prvom rade by ste si mali dať pozor na hrnčeky, do ktorých sa nalialo sérum krvných skupín II a III. Zaujímavosťou je prítomnosť drobných vločiek, ktoré vznikajú ako dôsledok aglutinácie – zhlukovania červených krviniek.

Ak nie sú žiadne vločky ani v II, ani v III a počas dodatočnej kontroly sa nič nezrazilo ani v I alebo IV, potom existuje prvá krvná skupina.
Ak sa v dôsledku toho koagulácia pozoruje všade okrem séra skupiny II, potom testovaná krv patrí do druhej skupiny.
Ak je koagulácia pozorovaná vo všetkých vzorkách okrem séra skupiny III, potom testovaná krv patrí do skupiny s rovnakým názvom.
Ak k zrážaniu došlo vo všetkých vzorkách okrem séra skupiny IV, potom sa analyzovala krvná skupina s rovnakým názvom.

Určenie krvnej skupiny

Dôležité, prísne vzaté, krvnú skupinu je možné určiť iba na základe krvnej skupiny 2 a 3. Ako však možno z podstaty metódy usúdiť, je tu veľký vplyv ľudského faktora. Z tohto dôvodu sa ako dodatočná kontrola používajú séra krvnej skupiny I a IV.

Po ukončení procedúry by sa mal použitý riad dobre opláchnuť teplou vodou a vysušiť. Potom sa môže použiť na ďalší výskum.

Nepresné výsledky a ich dôvody

Niekedy sa stáva, že zrazeniny zlepených červených krviniek nie sú veľmi jasne viditeľné. Počas testovania možno často pridať izotonický roztok chloridu sodného. Eliminuje možnosť falošnej aglutinácie, ktorá spôsobí, že vločky, ktoré nevznikli v dôsledku koagulačného procesu, sa opäť rozpadnú.

Dôležité! Ak výsledok analýzy nie je veľmi jasne viditeľný, musí sa vykonať znova a pomocou mikroskopu preskúmať jemnú aglutináciu.

V prípade jasne identifikovaného výsledku môžete pacientovi okamžite presne povedať jeho krvnú skupinu. V opačnom prípade by ste sa mali obrátiť na iné metódy analýzy.

Nemali by sme zabúdať na možnosť chýb, ktoré sa zvyčajne vyskytujú z nasledujúcich dôvodov:

použitie exspirovanej alebo slabej srvátky;
použitie príliš veľkého množstva testovanej krvi v porovnaní s objemom séra;
reakcia trvá oveľa dlhšie, ako vyžadujú predpisy;
teplota okolia nezodpovedá normálu, výsledkom čoho je studená aglutinácia červených krviniek.

Najčastejšie príčiny chýb pri určovaní krvných skupín

Okrem toho je potrebné poznamenať, že počas procesu sušenia sa môžu pozdĺž okrajov zmesi séra a testovanej krvi vytvoriť zrnité oblasti, ktoré nemôžu slúžiť ako indikátory reakcie.

Použitie výsledku v praxi

Ako už bolo uvedené, stanovenie krvnej skupiny sa vykonáva na vylúčenie smrti počas transfúzie krvi. V ideálnom prípade by mal pacient, ktorý dostáva krv – príjemca – dostať transfúziu krvi rovnakého typu, ako je jeho vlastná. Nie vždy to však platí. Už len preto, že drvivá väčšina ľudí s prvou krvnou skupinou je 50%. Zároveň sú univerzálnymi darcami, pretože im chýbajú aglutinogény, ktoré stimulujú proces zrážania krvi.

Pozor! Pokiaľ ide o pacientov s krvnou skupinou IV, možno ich nazvať univerzálnymi príjemcami, pretože ich telo je schopné prijať krv akejkoľvek skupiny. Zároveň ich krv nemožno transfúziovať predstaviteľom inej skupiny.

Na ilustráciu kompatibility darcov a príjemcov uvádzame tabuľku:

Kompatibilita krvných skupín

V modernom svete je znalosť krvnej skupiny životne dôležitá. Z pohľadu lekárov bude od toho závisieť miera prežitia pacientov. Z pohľadu bežných ľudí je to šanca na záchranu života v prípade núdze. V tomto ohľade nebude zbytočné poznať svoju krvnú skupinu a ak je to možné, uviesť ju do pasu alebo iných dokumentov, pretože kedykoľvek môže dôjsť k ohrozeniu zdravia a života.

Video - Stanovenie krvnej skupiny

Video - Stanovenie krvnej skupiny a Rh faktora

Z dostupných súborov antigénov a protilátok je teda možné vytvoriť 4 typy krvi, ktoré sú uvedené v tabuľke nižšie:

Číslo skupiny	Svetové označenie	Antigény	Protilátky
ja	0	žiadne	α a β
II	A	A	β
III	B	B	α
IV	AB	A a B	žiadne

Dôležité! V závislosti od toho, aký typ darcovskej krvi je poskytnutý na transfúziu, krv pacienta sa buď zráža, alebo nie. Prvý prípad je smrteľný.

Séra na reakciu

0. Dodáva sa s bielym štítkom a je čírej farby.
A. Modrá kvapalina. Na fľašu sú aplikované dva modré pruhy.
B. Bledoružová tekutina. Na fľaši sú tri pruhy rovnakej farby.
AB. Žltá kvapalina. Fľaša má 4 pruhy rovnakej farby.

Dôležité! V skutočnosti sú tieto činidlá pri výrobe bezfarebné. Sú špeciálne natreté tak, aby ich pri používaní nebolo možné zameniť.

Na štítkoch sú tiež:

titer;
dátum výroby;
dátum minimálnej trvanlivosti;
informácie o výrobcovi;
sériové číslo.

Ako sa určuje krvná skupina?

Na určenie vašej krvnej skupiny budete potrebovať:

plochá doska s 8 priehlbinami;
sklenené tyčinky alebo pipety - 8 kusov;
2 sady sér rôznych sérií, aby sa eliminovala možnosť chýb;
bežné alebo presýpacie hodiny.

Pozor! V prvom rade by ste si mali dať pozor na hrnčeky, do ktorých sa nalialo sérum krvných skupín II a III. Zaujímavosťou je prítomnosť drobných vločiek, ktoré vznikajú ako dôsledok aglutinácie – zhlukovania červených krviniek.

Ak nie sú žiadne vločky ani v II, ani v III a počas dodatočnej kontroly sa nič nezrazilo ani v I alebo IV, potom existuje prvá krvná skupina.
Ak sa v dôsledku toho koagulácia pozoruje všade okrem séra skupiny II, potom testovaná krv patrí do druhej skupiny.
Ak je koagulácia pozorovaná vo všetkých vzorkách okrem séra skupiny III, potom testovaná krv patrí do skupiny s rovnakým názvom.
Ak k zrážaniu došlo vo všetkých vzorkách okrem séra skupiny IV, potom sa analyzovala krvná skupina s rovnakým názvom.

Dôležité! Presne povedané, krvnú skupinu je možné určiť iba na základe séra krvných skupín 2 a 3. Ako však možno z podstaty metódy usúdiť, je tu veľký vplyv ľudského faktora. Z tohto dôvodu sa ako dodatočná kontrola používajú séra krvnej skupiny I a IV.
Po ukončení procedúry by sa mal použitý riad dobre opláchnuť teplou vodou a vysušiť. Potom sa môže použiť na ďalší výskum.
Nepresné výsledky a ich dôvody
Niekedy sa stáva, že zrazeniny zlepených červených krviniek nie sú veľmi jasne viditeľné. Počas testovania možno často pridať izotonický roztok chloridu sodného. Eliminuje možnosť falošnej aglutinácie, ktorá spôsobí, že vločky, ktoré nevznikli v dôsledku koagulačného procesu, sa opäť rozpadnú.
Dôležité! Ak výsledok analýzy nie je veľmi jasne viditeľný, musí sa vykonať znova a pomocou mikroskopu preskúmať jemnú aglutináciu.

V prípade jasne identifikovaného výsledku môžete pacientovi okamžite presne povedať jeho krvnú skupinu. V opačnom prípade by ste sa mali obrátiť na iné metódy analýzy.
Nemali by sme zabúdať na možnosť chýb, ktoré sa zvyčajne vyskytujú z nasledujúcich dôvodov:
použitie exspirovanej alebo slabej srvátky;
použitie príliš veľkého množstva testovanej krvi v porovnaní s objemom séra;
reakcia trvá oveľa dlhšie, ako vyžadujú predpisy;
teplota okolia nezodpovedá normálu, výsledkom čoho je studená aglutinácia červených krviniek.

Okrem toho je potrebné poznamenať, že počas procesu sušenia sa môžu pozdĺž okrajov zmesi séra a testovanej krvi vytvoriť zrnité oblasti, ktoré nemôžu slúžiť ako indikátory reakcie.
Použitie výsledku v praxi
Ako už bolo uvedené, stanovenie krvnej skupiny sa vykonáva na vylúčenie smrti počas transfúzie krvi. V ideálnom prípade by mal pacient, ktorý dostáva krv – príjemca – dostať transfúziu krvi rovnakého typu, ako je jeho vlastná. Nie vždy to však platí. Už len preto, že drvivá väčšina ľudí s prvou krvnou skupinou je 50%. Zároveň sú univerzálnymi darcami, pretože im chýbajú aglutinogény, ktoré stimulujú proces zrážania krvi.
Pozor! Pokiaľ ide o pacientov s krvnou skupinou IV, možno ich nazvať univerzálnymi príjemcami, pretože ich telo je schopné prijať krv akejkoľvek skupiny. Zároveň ich krv nemožno transfúziovať predstaviteľom inej skupiny.

Na ilustráciu kompatibility darcov a príjemcov uvádzame tabuľku:
Číslo skupiny Pre ktoré skupiny sa stáva darcom? Pre ktoré skupiny sa stáva príjemcom?

ja I, II, III, IV ja
II II, IV I, II

III III, IV I, III

IV IV I, II, III, IV
V modernom svete je znalosť krvnej skupiny životne dôležitá. Z pohľadu lekárov bude od toho závisieť miera prežitia pacientov. Z pohľadu bežných ľudí je to šanca na záchranu života v prípade núdze. V tomto ohľade nebude zbytočné poznať svoju krvnú skupinu a ak je to možné, uviesť ju do pasu alebo iných dokumentov, pretože kedykoľvek môže dôjsť k ohrozeniu zdravia a života.
Video - Stanovenie krvnej skupiny
Video - Stanovenie krvnej skupiny a Rh faktora

Postup stanovenia krvných skupín systémom ABO pozostáva z identifikácie antigénov A a B v erytrocytoch pomocou štandardných protilátok a použitím aglutinínov v plazme alebo sére analyzovanej krvi so štandardnými erytrocytmi. Technika bola vyvinutá na začiatku 20. storočia a stále sa aktívne používa v medicíne. Stanovenie antigénov A a B sa uskutočňuje vďaka anti-A a anti-B cyklónom.

Základné pojmy

U darcov sa vždy stanovujú nielen antigény v erytrocytoch, ale pomocou štandardných erytrocytov aj aglutiníny v sére (plazme). Ako biomateriál sa používa venózna krv. Pred testom sa musíte jeden deň pred testom vzdať mastných jedál a pol hodiny pred testom nefajčiť. Krvné skupiny sa stanovujú dvakrát: najprv na lekárskom oddelení, kde sa materiál pripravuje, a potom potvrdené výskumom v laboratóriu.

Stanovenie krvných skupín pomocou systému ABO je hlavným testom používaným v transfuziológii. Tiež niektoré zvieratá majú podobný systém krvných skupín, ako sú šimpanzy, gorily a bonobovia.

História objavovania

Vo vede je všeobecne uznávaný názor, že metódu určovania krvných skupín pomocou systému ABO prvýkrát identifikoval rakúsky vedec Karl Landsteiner v roku 1900. Potom vo svojej práci opísal tri typy antigénov. Za to mu o tridsať rokov neskôr udelili Nobelovu cenu za medicínu a fyziológiu. Vzhľadom na to, že predtým medzi vedcami neexistovali žiadne úzke väzby, neskôr sa zistilo, že český sérológ Jan Jánský, bez ohľadu na výskum K. Landsteinera, ako prvý opísal štyri ľudské krvné skupiny, ale jeho výskum nebol známy širokému publiku. V súčasnosti sa v Rusku a v republikách bývalého ZSSR používa klasifikácia vypracovaná J. Jánskym. V USA vytvoril svoje podobné dielo v roku 1910 W. L. Moss.

Metóda stanovenia krvných skupín podľa systému ABO pomocou zoliklonov

Krvná skupina by sa mala určiť v miestnosti s dobrým osvetlením, pri udržiavaní teplotného rozsahu 15 až 25 stupňov Celzia, pretože odchýlky od tejto normy môžu ovplyvniť výsledky štúdie. Na štítok alebo štítok sú napísané iniciály a priezvisko pacienta. Zľava doprava alebo v kruhu sa používajú štandardné označenia skupín (O(I), A(II), B(III)). Zodpovedajúce séra sa umiestnia po kvapkách pod ne pomocou samostatných pipiet pre každý typ. Potom sa k nim pridá krv pacienta. Materiál na štúdium sa odoberá z ušného laloku alebo prsta. Vyžaduje si to technika určovania krvnej skupiny pomocou systému ABO.

Je tiež legálne používať červené krvinky, ktoré sú v skúmavke po vytvorení zrazeniny. Je potrebné, aby množstvo séra bolo desaťkrát väčšie ako množstvo pridanej krvi. Potom sa kvapky zmiešajú so sklenenými tyčinkami (pre každú zvlášť). Po dobu piatich minút, jemne potriasajte platňou, sledujte výskyt hemaglutinačnej reakcie. Prezrádza to výskyt malých červených hrudiek, ktoré sa potom spájajú do väčších. Sérum v tomto čase takmer úplne stráca farbu.

Aby ste eliminovali falošnú hemaglutináciu jednoduchej adhézie červených krviniek, musíte po troch minútach pridať jednu kvapku fyziologického roztoku a skontrolovať, či aglutinácia pretrváva. Ak áno, tak je to pravda. To je všetko, určovanie krvných skupín podľa systému ABO je ukončené.

Interpretácia výsledkov

V dôsledku toho možno pozorovať štyri reakcie:

aglutinácia sa nevyskytuje u žiadneho zo sér - prvá skupina O(I);
reakcia sa objavila so sérami I(ab) a III(a) - druhá skupina A(II);
aglutinácia nastáva so sérami I(ab) a II(b) - tretia skupina B(III);
ak k reakcii dôjde s tromi sérami, musíte vykonať dodatočný postup s činidlami skupiny AB (IV), ktoré sú štandardné; ak v takejto kvapke nie je aglutinácia, môžeme predpokladať, že ide o 4. krvnú skupinu AB (IV).

Expresná metóda pre Rh faktor

Metóda určovania krvných skupín pomocou systému ABO zahŕňa súčasnú detekciu Rh faktora (Rh).

Povrch doštičky je vopred navlhčený a je na ňom napísané „kontrolné sérum“ a „sérum proti rhesus“. Potom sa pod nápisy umiestni jedna alebo dve kvapky požadovaných činidiel a pridá sa k nim analyzovaný materiál. Na to môžete použiť aj krv z prsta (v rovnakom množstve ako je objem séra) alebo červené krvinky, ktoré zostali na dne skúmavky po objavení sa zrazeniny (polovica objemu séra). Výber materiálu nemá vplyv na konečný výsledok. Potom sa krv a sérum zmiešajú so suchou sklenenou tyčinkou, po ktorej sa reakcia počká päť minút. Aby sa eliminovali falošné hodnoty, po troch až štyroch minútach sa pridá izotonický roztok chloridu sodného (len niekoľko kvapiek). Stanovenie krvnej skupiny podľa systémov ABO a Rh sa vykonáva veľmi často.

Ak dôjde k aglutinácii červených krviniek v kvapke séra, znamená to pozitívnu Rh krv. Podľa štatistík sa Rh+ vyskytuje u 85% svetovej populácie. Jeho absencia nám umožňuje hovoriť o Rh-negatívnej príslušnosti. Ak sa v kontrolnom sére objaví aglutinácia, znamená to, že sa stalo nepoužiteľným. Bohužiaľ, algoritmus na určenie krvnej skupiny pomocou systému ABO nefunguje vždy dokonale.

Aké chyby je možné pri tejto technike urobiť?

Nepresnosti pri určovaní, či krv patrí do určitej skupiny, závisia od nasledujúcich dôvodov:

Technická.
Biologická špecifickosť testovanej krvi.
Menejcennosť štandardných sér a erytrocytov.

Technické chyby

Možné chyby pri určovaní krvnej skupiny ABO krížovou metódou:

Chyby biologickej špecifickosti

Chyby spojené s biologickou špecifickosťou analyzovanej krvi sa delia na dva typy.

V závislosti od charakteristík červených krviniek.
Chyby spôsobené biologickými charakteristikami séra.

Pozrime sa na každý typ podrobnejšie.

V závislosti od charakteristík červených krviniek

Neskorá aglutinácia, vysvetlená „slabými“ formami červených krviniek a antigénov. Aby sa predišlo chybám, je potrebné určiť krvnú skupinu darcov a príjemcov pomocou štandardných červených krviniek. Aglutinogén A2 by sa mal identifikovať opakovaním štúdie s inými typmi činidiel a iným sklom, čím sa predĺži čas registrácie reakcie.
„Panaglutinácia“ („autoaglutinácia“) je schopnosť krvi prejavovať rovnakú reakciu nešpecifickej povahy so všetkými sérami, vrátane svojich vlastných. Po piatich minútach závažnosť takejto aglutinácie slabne, hoci by sa mala zvyšovať. Podobné prípady sú pozorované u onkologických pacientov, pacientov s popáleninami a pod. Ako kontrola je potrebné vyhodnotiť prejav aglutinácie analyzovaných červených krviniek v štandardnom sére štvrtej skupiny a fyziologickom roztoku. Pri „panaglutinácii“ sa krvná skupina určuje ako výsledok trojitého premytia červených krviniek. Ak neposkytne požadovaný výsledok, oplatí sa znova odobrať vzorku krvi do skúmavky zohriatej pred zákrokom a umiestniť vzorku do termonádoby, ktorá pomôže udržať teplotu 37 stupňov Celzia alebo vyššiu. Potom by sa mal preniesť do laboratória, kde sa udržiava vyššie uvedená teplota a používa sa zohriaty fyziologický roztok, platňa a činidlá.

Niekedy sú červené krvinky analyzovanej krvi usporiadané ako „stĺpce mincí“ a možno ich zameniť za aglutináty. Ak pridáte dve kvapky izotonického roztoku a jemne potrasiete platničkou, červené krvinky sa posunú do správnej polohy.
Nekompletná alebo zmiešaná aglutinácia, vyskytujúca sa u pacientov v druhej, tretej a štvrtej skupine v dôsledku transplantácie kostnej drene alebo v prvých troch mesiacoch po transfúzii krvi 0(I).

Vzhľadom na biologické vlastnosti séra

Chyby spojené s použitím chybných štandardných červených krviniek a sér

Slabé séra, ktoré prekročili dátum exspirácie alebo majú titer nižší ako 1:32, sú schopné generovať slabú a neskorú aglutináciu. Použitie takýchto činidiel je neprijateľné.

Použitie nepoužiteľných štandardných erytrocytov alebo sér, pripravených v nesterilných podmienkach a nedostatočne konzervovaných, vedie k vzniku „bakteriálnej“ aglutinácie, ktorá je nešpecifického charakteru.

Existuje mnoho populárnych predpokladov o krvných skupinách ABO, ktoré sa objavili hneď po ich objavení v rôznych svetových kultúrach. Napríklad v 30. rokoch minulého storočia v Japonsku a niektorých ďalších krajinách získala popularitu teória spájajúca krvnú skupinu s jedným alebo druhým typom osobnosti. Podobné teórie sú populárne dodnes.

Existuje tiež názor, že osoba so skupinou A je náchylná k ťažkým kocovinám, O je spojená s dobrými zubami a skupina A2 je spojená s najvyššou úrovňou IQ. Takéto tvrdenia však neboli vedecky dokázané.

Stanovenie krvných skupín sme skúmali podľa systému ABO pomocou štandardných sér.

Indikácie: potreba transfúzie krvi, príprava na operáciu.

Pripravte si:štandardná doska s priehlbinami; súprava sklenených tyčí; izotonický roztok chloridu sodného; súbor hemaglutinačných sér skupín 1, 2, 3, 4 z dvoch sérií; pipety; krv odobratá zo žily alebo prsta; hodinky; podnosy; rukavice; nádoby na odpadový materiál; nádoby s dezinfekčnými roztokmi.

Príprava na manipuláciu:

Sestra je plne pripravená na výkon: oblečená v obleku (rúchu), maske, rukaviciach, čiapke a náhradnej obuvi.
Skontrolujte kvalitu štandardných hemaglutinačných sér podľa: farebného označenia, vzhľadu (svetlý, transparentný); bezpečnosť balenia, prítomnosť správne navrhnutého štítku.
Pripravte všetko potrebné na vykonanie manipulácie.

Vykonávanie manipulácie:

Na bielu platňu podľa označenia postupne naneste jednu kvapku séra zo skupín 1, 2, 3 z dvoch sérií. Okamžite spustite každú pipetu do tej istej ampulky (liekovky), z ktorej boli odobraté;

Pomocou sklenenej tyčinky naneste kvapku testovanej krvi vedľa zárezov (6 zárezov). Kvapka krvi by mala byť 10-krát menšia ako kvapka séra;

Označte čas a čistou suchou sklenenou tyčinkou zmiešajte krv so sérom 1 g, potom ďalšou tyčinkou 2 g. atď. vo všetkých priehlbinách;

Keď dôjde k aglutinácii, ale nie skôr ako po 3 minútach, pridajte jednu kvapku izotonického roztoku chloridu sodného do tých kvapiek, v ktorých došlo k aglutinačnej reakcii, aby ste vylúčili falošnú aglutináciu a pokračujte v pozorovaní 5 minút.

Vyhodnotenie výsledkov:

a) pri pozitívnej reakcii sa v zmesi objavia drobné zrnká viditeľné okom, pozostávajúce zo zlepených červených krviniek. Malé zrná sa spájajú do veľkých zŕn a niekedy do vločiek a srvátka sa zafarbí;

b) pri negatívnej reakcii zostáva kvapalina rovnomerne sfarbená do ružova;

c) Možné sú 4 kombinácie pozitívnych a negatívnych reakcií:

1. Ak v žiadnej z buniek nie je aglutinácia, potom je krv skupiny I (0).

2. Ak dôjde k aglutinácii v prvej a tretej bunke, potom je krv skupina II (A).

3. Ak je aglutinácia v prvej a druhej skupine, potom krv je skupina III (B).

4. Ak je aglutinácia v prvej, druhej, tretej bunke, krv je skupina IV (AB).

Aby sa vylúčili chyby, krv sa testuje so sérom skupiny 4, kde by nemala byť žiadna aglutinácia.

Koniec manipulácie: