Diagnosticum Salmonella vi antigénna kvapalina. PHA alebo pasívna hemaglutinačná reakcia, aký je to krvný test? Precipitujúce antraxové sérum

Cena na vyžiadanie

Položku môžete pridať do košíka zadaním množstva

Výrobca: Microgen NPO Federal State Unitary Enterprise

Krajina Rusko

Jednotka Meas.: set

Typ balenia: kartónová krabica

Kód dodávateľa:

Popis

Diagnosticum erytrocytový Salmonella Vi-antigén je určený na staging pasívnej hemaglutinačnej reakcie (RPHA) a je to 0,75% suspenzia formalinizovaných a senzibilizovaných Vi-antigénu ľudských erytrocytov O (I) krvnej skupiny vo fosfátovom tlmivom roztoku (pH 7,2±0,2; koncentrácia; koncentrácia - 0,06 mol/l), konzervovaný vo formaldehyde. Kompletné s diagnostickým sérom Salmonella adsorbovaným receptorom B, suchým riediacim roztokom a 96-jamkovou platňou na jedno použitie s okrúhlym dnom na jedno použitie na imunologické reakcie. Princíp účinku je založený na fenoméne aglutinácie erytrocytov pri interakcii so sérami obsahujúcimi protilátky proti Vi-antigénu fixovanému na povrchu erytrocytov. Navrhnuté pre 8 definícií


Funkčný účel

Detekcia špecifických protilátok proti antigénu Salmonella tyfus B vo vzorkách ľudského séra. Aglutinačná reakcia pri zriedení nie menšom ako 1/2 ich titra, ale nie menšom ako 1:160. Podmienená hladina diagnostického krvného séra zdravých ľudí by sa mala považovať za riedenie séra nie vyššie ako 1:20. Diagnosticum by sa nemalo aglutinovať diagnostickým adsorbovaným suchým sérom Salmonella na RA: O receptor 9 - v riedení 1:40 a vyššom, H receptor d - v riedení 1:10 a vyššom.
Pripravte dvojnásobné sériové riedenia analyzovaného séra v 0,05 ml dodaného 0,9 % roztoku chloridu sodného počínajúc od 1:10 do 1:2560 a 1 rad dvojnásobného sériového riedenia diagnostického séra, počínajúc riedením 1: 10, aby sa zdvojnásobil titer uvedený na štítku fľaše. Fľaše sa pred otvorením a počas používania pretrepú, aby sa suspenzia homogenizovala. Vykopte do jamiek priloženej tablety, pridajte 0,025 ml diagnostika. Nastavte kontroly a inkubujte v termostate. Čas analýzy je 2 hodiny.
Povinné kontroly sú: kontrola diagnostického séra Salmonella adsorbovaného suchým a testovaným sérom B receptora (v riedení 1:10 v objeme 0,05 ml) a kontrola neprítomnosti spontánnej aglutinácie diagnostica.
Výsledky reakcie sa zaznamenávajú pomocou štvorkrížového systému:
4+ všetky červené krvinky sú aglutinované a rovnomerne pokrývajú dno jamky vo forme „dáždnika“;
3+ takmer všetky erytrocyty sú aglutinované, na ich pozadí je nenápadný prstenec usadených neaglutinovaných erytrocytov;
3+, spolu s rovnomerným aglutinátom, na dne jamky je sediment neaglutinovaných erytrocytov vo forme malého „krúžku“ alebo „gombíka“;
1+ väčšina červených krviniek je neaglutinovaná a usadená vo forme malého „krúžku“ s hladkými okrajmi alebo „gombíka“ v strede spodnej časti otvoru.
(-) nie sú žiadne známky aglutinácie. Červené krvinky sa usadili vo forme malého „krúžku“ s hladkými okrajmi alebo gombíkom v strede jamky alebo na dne skúmavky.
Reakcia aspoň 3+ sa považuje za pozitívnu.
Výsledky získané v RPGA možno považovať za spoľahlivé, ak diagnostické sérum salmonely adsorbované na B receptor suchý 1:10 získalo pozitívny výsledok v zriedení nie menej ako 14 ich titrov a v 2 jamkách s analyzovaným sérom a s diagnostickým Salmonella sérový adsorbovaný B receptor suchý v riedení 1:10 by nemali byť žiadne vločky ani sediment; v jamkách s 0,9% roztokom chloridu sodného a diagnosticum - reakcia je negatívna.
Protilátkový titer analyzovaného séra sa považuje za posledné riedenie séra, ktoré stále poskytuje pozitívnu aglutináciu červených krviniek.
Osoby, ktoré majú protilátky proti antigénu B v zriedení 1:40 alebo vyššom, sa považujú za osoby podozrivé z chronického prenášania baktérií týfusu. Avšak vzhľadom na to, že diagnózu nemožno stanoviť len na základe sérologického vyšetrenia, je potrebné hĺbkové bakteriologické vyšetrenie

technické údaje

Obsah sady:
1. Diagnosticum erytrocyt Salmonella Vi-antigén, homogénna suspenzia hnedej farby bez vločiek pri usadení sa vytvoria dve vrstvy - hustý hnedý sediment erytrocytov a priehľadný žltkastý supernatant; 6 ml - 1 fľaša;
2. Diagnostické sérum Salmonella adsorbované B receptorom, suchá homogénna hmota od bielej s hnedastým odtieňom po béžovú - vo forme lyofilizátu 0,1 ml 1 fľaša;
3. 1% suspenzia formalinizovaných nesenzibilizovaných ovčích erytrocytov - homogénna suspenzia hnedej farby bez vločiek pri usadzovaní sa vytvoria dve vrstvy - hustý hnedý sediment erytrocytov a priehľadná žltkastá supernatantová kvapalina; 1 ml - 1 fľaša;
4. Roztok na riedenie séra a staging RPHA - 0,9% roztok chloridu sodného - priehľadná bezfarebná kvapalina - 8 ml, 2 fľaštičky;
5. Jednorazová platnička na imunologické reakcie pozostáva z 8 radov, každá s 12 jamkami s priehľadným, bezfarebným okrúhlym dnom - 1 ks.
Podmienky skladovania: v suchej a tmavej miestnosti pri teplote +4...8°C. Otvorenú fľašu s diagnostikom v uzavretej forme možno skladovať pri teplote 2 až 8 °C po dobu jedného mesiaca.
Trvanlivosť - 18 mesiacov od dátumu výroby, uvedeného na obale.
Registrovaný v Roszdravnazor

Aktívnou zložkou diagnostika je Vi-antigén, fixovaný na povrchu červených krviniek. Pri interakcii so sérami obsahujúcimi protilátky proti Vi-antigénu sa pozoruje fenomén aglutinácie erytrocytov.

Formulár na uvoľnenie

Dostupné v sade 1 fľaštička s diagnostickom - 3 ml, diagnostické sérum Salmonella adsorbovaný receptor Vi Dry vo forme lyofilizátu 0,1 ml 1 fľaša; 0,9% roztok chloridu sodného - 2 fľaše po 8 ml; jednorazová tableta na imunologické reakcie - 1 ks.

Zlúčenina

Množstvo činidiel:

Diagnosticum erytrocytový Salmonella Vi-antigén, čo je 0,75% suspenzia formalinizovaných a senzibilizovaných ľudských erytrocytov krvnej skupiny O (I) s Vi-antigénom vo fosfátovom tlmivom roztoku (pH - 7,2 ± 0,2; koncentrácia - 0,06 mol/l). Konzervačná látka - formaldehyd. Homogénna suspenzia hnedej farby bez vločiek; po usadení sa vytvoria 2 vrstvy: hustý hnedý sediment erytrocytov a priehľadná žltkastá kvapalina nad usadeninou 1 fľaša-3 ml.

Diagnostické sérum Salmonella adsorbované na B receptor suchá - homogénna hmota od bielej s hnedastým odtieňom až po béžovú. 1 fľaša - od 0,1 ml.

Udržiavací roztok - 0,9% roztok chloridu sodného - číra, bezfarebná kvapalina, pH od 6,5 do 7,5. 2 fľaštičky - každá po 8 ml.

Doštička s okrúhlym dnom na jednorazové imunologické reakcie – pozostáva z 8 radov, z ktorých každá obsahuje 12 jamiek s priehľadným, bezfarebným, okrúhlym dnom. 1 PC.

Diagnostikum musí byť aglutinované v RPHA diagnostickým sérom Salmonella adsorbovaným suchým B receptorom v zriedení nie menšom ako 1/2 ich titra, ale nie menšom ako 1/160. Diagnosticum by sa nemalo aglutinovať diagnostickým adsorbovaným suchým sérom Salmonella na RA: O receptor 9 - v riedení 1:40 a vyššom, H receptor d - v riedení 1:10 a vyššom.

Indikácie na použitie

Navrhnuté na detekciu špecifických protilátok proti Salmonella tyfus Vi-antigénu v ľudskom krvnom sére pri pasívnej hemaglutinačnej reakcii (RPHA).

Dávkovací režim a spôsob podávania

Vzorky ľudského krvného séra sa používajú ako analyzované vzorky.
Analyzovaná vzorka sa uchováva za podmienok, ktoré zabraňujú rastu baktérií pri teplote 2 až 8 °C najviac 72 hodín. Zmrazenie je povolené pred testovaním;
Analýza vzoriek s ťažkou hemolýzou, bakteriálnym rastom, ako aj vzoriek skladovaných dlhší čas bez zmrazenia alebo opätovného zmrazenia nie je povolená.

VYKONÁVANIE ANALÝZY
Príprava roztokov pre RPGA.
Nasucho otvorte liekovky s diagnostickým sérom Salmonella adsorbovaným receptorom B a pridajte 1 ml dodaného 0,9 % roztoku chloridu sodného, ​​čím získate riedenie 1:10, čo je pracovné riedenie.
Otvorená fľaša s diagnostickým sérom Salmonella adsorbovaná za sucha v riedení 1:10, uzavretá, možno skladovať pri teplote 2 až 8 °C po dobu jedného mesiaca.
Diagnosticum je pripravené na použitie. Pred otvorením sa injekčná liekovka s diagnostikom musí dôkladne pretrepať, kým sa nezíska homogénna suspenzia. Počas prevádzky sa odporúča pretrepávanie opakovať.
Otvorenú fľašu s diagnostikom v uzavretej forme možno skladovať pri teplote 2 až 8 °C po dobu jedného mesiaca.
0,9% roztok chloridu sodného. Pripravený k použitiu.

Vedenie RPGA.
Pri monitorovaní akéhokoľvek počtu analyzovaných sér je povinné vykonať 1 sériu aglutinácie s diagnostickým sérom Salmonella adsorbovaným suchým B receptorom.
Na vykonanie RPHA sa používa tableta na jedno použitie na imunologické reakcie. Pripravte dvojnásobné sériové riedenia analyzovaného séra v 0,05 ml dodaného 0,9 % roztoku chloridu sodného počínajúc od 1:10 do 1:2560 a 1 rad dvojnásobného sériového riedenia diagnostického séra Salmonella adsorbovaného na suchý B receptor, počnúc od riedenie 1:10 až do dvojnásobku titra uvedeného na štítku fľaštičiek tohto séra.
Pridajte 0,025 ml diagnostica do každej jamky so sérovým riedením.

Povinné kontroly sú:
1. Kontrola diagnostického séra salmonely adsorbovaného receptorom
Vi suché a analyzované sérum, ktoré sa pridáva v riedení 1:10 v objeme 0,05 ml
do dvoch kontrolných jamiek.
2. Kontrola neprítomnosti spontánnej aglutinácie diagnostika, pre ktorú sa pridá 0,025 ml diagnostika do dvoch jamiek obsahujúcich 0,05 ml 0,9 % roztoku chloridu sodného.
Tableta sa pretrepe a umiestni sa na 1,5-2,0 hodiny do termostatu pri teplote (37+1) °C.

ÚČTOVNÍCTVO VÝSLEDKOV
Reakcia sa berie do úvahy pomocou štvorkrížového systému:
4+ - všetky červené krvinky sú aglutinované a rovnomerne pokrývajú dno jamky;
3+ - takmer všetky červené krvinky sú aglutinované. Na ich pozadí je nenápadný prstenec usadených, neaglutinovaných erytrocytov;
3+ - spolu s rovnomerným aglutinátom na dne jamky je sediment neaglutinovaných erytrocytov vo forme malého „krúžku“ alebo „gombíka“;
1+ - väčšina červených krviniek je neaglutinovaná a usadená vo forme malého „krúžku“ s hladkými okrajmi alebo „gombíka“ v strede spodnej časti otvoru.
(-) - nie sú žiadne známky aglutinácie. Červené krvinky sa usadili vo forme malého „krúžku“ s hladkými okrajmi alebo gombíka v strede jamky alebo na dne skúmavky.
Reakcia aspoň 3+ sa považuje za pozitívnu.
Výsledky získané v RPGA možno považovať za spoľahlivé, ak diagnostické sérum salmonely adsorbované na B receptor suchý 1:10 získalo pozitívny výsledok v zriedení nie menej ako 14 ich titrov a v 2 jamkách s analyzovaným sérom a s diagnostickým Salmonella sérový adsorbovaný B receptor suchý v riedení 1:10 by nemali byť žiadne vločky ani sediment; v jamkách s 0,9% roztokom chloridu sodného a diagnosticum - reakcia je negatívna.
Protilátkový titer analyzovaného séra sa považuje za posledné riedenie séra, ktoré stále poskytuje pozitívnu aglutináciu červených krviniek.
Interpretácia výsledkov.
Osoby, ktoré majú protilátky proti antigénu B v zriedení 1:40 alebo vyššom, sa považujú za osoby podozrivé z chronického prenášania baktérií týfusu. Avšak vzhľadom na to, že diagnózu nemožno stanoviť len na základe sérologického vyšetrenia, je potrebné hĺbkové bakteriologické vyšetrenie.

Bezpečnostné opatrenia pri používaní

Súčasťou súpravy je diagnostické sérum Salmonella adsorbovaný suchým inaktivovaným B receptorom.
Testovacie séra sa musia inaktivovať pri teplote 56 °C počas 30 minút.
Testovacie séra, ako aj činidlá, vybavenie a nástroje, ktoré sú s nimi v kontakte, môžu predstavovať potenciálne infekčný materiál a treba s nimi zaobchádzať opatrne:
- pracovať s gumenými rukavicami;
- pri pipetovaní je potrebné používať automatické zariadenia;
- po ukončení práce ošetrite analyzované séra a reagencie a nástroje, ktoré sú s nimi v kontakte, dezinfekčným roztokom;
- pred a po použití utrite vybavenie 96% etylalkoholom.

Objektívne výsledky analýzy sú zaručené, ak sú splnené nasledujúce podmienky:
- všetky reagencie súpravy by sa mali skladovať pri teplote 2 až 8 °C;
- nepoužívajte reagencie po expirácii;
- nepoužívajte reagencie súpravy, ak na ich obale nie je vhodné označenie;
- na vykonanie RPGA použite činidlá, ktoré sú súčasťou tejto súpravy.

Správne vykonaný krvný test pomáha odhaliť pôvodcov rôznych komplexných ochorení v tele v počiatočných štádiách ich vývoja a niekedy ešte predtým, ako sa objavia klinické príznaky ochorenia. Veľmi často lekári predpisujú pacientom test aglutinačnej reakcie. Ďalej zistíme, čo to je - krvný test RPGA, kedy sa používa a čo nám môže povedať?

Princíp fungovania

Nepriama hemaglutinačná reakcia (tiež nazývaná pasívna hemaglutinačná reakcia, tiež známa ako RPHA, RNGA) nastáva, keď sú červené krvinky, ktoré adsorbovali antigén, vystavené imunitnému séru, ktoré zodpovedá danému antigénu.

Štúdie preukázali, že táto metóda je výrazne lepšia ako iné sérologické testy, pokiaľ ide o špecifickosť a citlivosť. Preto sa často používa na detekciu chorôb spôsobených baktériami alebo rickettsiou. Antigény na takúto analýzu môžu byť bakteriálne extrakty, purifikované antigény rôznych mikróbov a zložky bakteriálnych vakcín.

Po vstupe patogénnej baktérie do ľudského tela začne produkovať špecifické a nešpecifické protilátky, čím sa vytvorí špecifická imunitná odpoveď. V prípade syfilisu, ktorého pôvodcom je Treponema pallidum, ktorý patrí medzi gramnegatívne spirochéty, sa v ľudskej krvi tvoria netreponémové alebo treponémové protilátky. Na ich identifikácii sú založené laboratórne diagnostické testy, ktoré by mali potvrdiť alebo vyvrátiť prítomnosť pôvodcu vírusu v organizme.

Pri RPHA sa červené krvinky, ktorých povrch má adsorbované antigény treponema pallidum, po pridaní séra s protilátkami proti treponému z materiálu od človeka infikovaného syfilisom k sebe lepia, čiže aglutinujú.

Spoľahlivosť štúdie

Je dôležité mať na pamäti, že protilátky proti svetlej spirochéte sa v tele infikovaných ľudí začínajú objavovať 2-4 týždne po infekcii a v niektorých prípadoch sa toto obdobie môže predĺžiť až na 6 týždňov.

Z tohto dôvodu je citlivosť analýzy RPHA v primárnom štádiu ochorenia asi 86 %, čo je výrazne horšie ako presnosť diagnostiky pacientov v nasledujúcich dvoch štádiách. Citlivosť analýzy u takýchto pacientov, ako aj u nosičov latentného syfilisu, dosahuje 99-100%.

Pasívna hemaglutinačná reakcia má však veľmi vysokú špecificitu, ktorá dosahuje úroveň 96 – 100 %.

To umožňuje použiť toto vyšetrenie na potvrdenie diagnózy v prípade pozitívnej reakcie z predbežnej netreponemálnej štúdie, napríklad mikroprecipitačnej reakcie rakoviny močového mechúra.

Vzhľadom na to, že citlivosť treponemálnych testov, vrátane RPGA, výrazne prevyšuje citlivosť netreponemálnych metód, takéto vyšetrenia sa čoraz viac predpisujú pri vykonávaní skríningových testov na syfilis. Ak sa však získa pozitívna reakcia zo skríningového testu, na objasnenie diagnózy je potrebná ďalšia špecifická (treponémová) analýza, nie však RPGA.

Prepis analýzy

Keď sa sérum s protilátkami proti treponému z materiálu osoby infikovanej syfilisom pridá do činidla, s ktorým sa štúdia uskutočňuje, červené krvinky aglutinujú, v dôsledku čoho sa vyzrážajú.

Počet lepkavých červených krviniek je ovplyvnený hladinou protilátok v sére. Preto pasívna hemaglutinácia ukazuje nielen prítomnosť protilátok, ale umožňuje aj určiť ich množstvo. Výsledok štúdie je prezentovaný úrovňou titra protilátok.

Pozitívna reakcia naznačuje prítomnosť patogénu v tele pacienta. Počas diagnostického procesu sa však môžu vyskytnúť falošne pozitívne reakcie, ktorých počet štatisticky nepresahuje úroveň 0,05-2,5 % z celkového počtu štúdií.

Pozitívna reakcia RPHA u ľudí, ktorí nie sú infikovaní syfilisom, sa môže vyskytnúť, ak:

  • systémové ochorenia spojivového tkaniva,
  • v krvných protilátkach pacienta proti patogénom podobným Treponema pallidum,
  • fyziologické patológie, ako je infarkt myokardu,
  • hepatitída B alebo C,
  • onkologické ochorenia,
  • týfus, leptospiróza, tuberkulóza,
  • HIV infekcie,
  • borelióza kliešťovej etiológie,
  • rozsiahle zranenia alebo zlomeniny,
  • tehotenstvo,
  • v prípade injekcie omamných látok.

Vo väčšine prípadov sú falošne pozitívne reakcie sprevádzané nízkym titrom. Vysoké titre sú typické pre sekundárne štádium ochorenia a predtým latentný syfilis. Môžu sa však objaviť aj pri falošne pozitívnej reakcii u pacientov s malígnymi novotvarmi.

U ľudí, ktorí mali syfilis aspoň raz, zostáva RPHA reakcia pozitívna po zvyšok ich života.

Zriedkavými výnimkami môžu byť situácie, keď bola choroba identifikovaná v počiatočnom štádiu vývoja, po ktorej sa uskutočnila intenzívna a účinná liečba. Analýza RPGA sa preto nemôže použiť na posúdenie dynamiky zotavenia alebo na porovnávaciu diagnostiku skorých alebo neskorých štádií ochorenia.

Ak sa získa pozitívna reakcia, je potrebné vyšetriť rodinných príslušníkov chorého a ľudí, ktorí s ním mali sexuálny kontakt.

Negatívnu reakciu možno dosiahnuť v nasledujúcich prípadoch:

  • osoba nemá syfilis,
  • krv bola odobratá nesprávne na vyšetrenie,
  • Od nákazy prešli 2-4 týždne a tvorba protilátok ešte nezačala.

V každom prípade musí byť výsledok štúdie hodnotený v kombinácii s ďalšími laboratórnymi a anamnestickými ukazovateľmi.

Pre koho je analýza určená?

Lekár môže odporučiť pacientov darovať krv na RPHA v nasledujúcich prípadoch:

  • v prítomnosti klinických prejavov syfilisu: ulcerózne vyrážky, zväčšené lymfatické uzliny, difúzna alopécia a iné,
  • ak máte podozrenie na možnú infekciu v prípade kontaktu s už chorými ľuďmi,
  • darcovia, ktorí chcú darovať krv,
  • osoby, ktoré sa každoročne podrobujú preventívnym prehliadkam alebo vystavujú zdravotné potvrdenia,
  • pacienti s pozitívnym skríningovým testom,
  • pred hospitalizáciou v lôžkovej nemocnici,
  • pri predoperačnom vyšetrení,
  • identifikovať patogény salmonelózy, záškrtu, dyzentérie metódou RPGA s príslušným diagnostikom.

Postup pri vykonávaní štúdie

Vzorka venóznej krvi, ktorú daruje pacient, sa odošle na testovanie. Aby nedošlo k chybnému záveru, pacient by mal byť zodpovedný za prípravu analýzy. Aby boli výsledky testu spoľahlivé, mali by ste dodržiavať nasledujúce odporúčania:

  • Test sa má vykonať iba na prázdny žalúdok.
  • V deň analýzy môžete piť minerálnu vodu bez plynu v minimálnych množstvách.
  • Pred analýzou by ste nemali fajčiť aspoň 30 minút, ale je lepšie túto dobu predĺžiť na niekoľko hodín.
  • Platí priamy zákaz požívania alkoholických nápojov.
  • Pacienti, ktorí potrebujú pravidelne užívať akékoľvek lieky, musia informovať lekára, ktorý ich posiela na vyšetrenie.
  • Ak sa necítite dobre alebo sa necítite dobre, musíte to oznámiť sestre, ktorá krv odoberá, alebo lekárovi v ambulancii, kde potrebujete urobiť vyšetrenie.
    • Buďte zodpovední nielen za otázku, kde sa testovať, ale aj za prípravu na skúšku.

      Diagnóza iných infekčných chorôb

      Nemali by sme si myslieť, že štúdia, ako je RPGA, môže byť vykonaná iba na identifikáciu pôvodcu syfilisu v tele.

      Rozbor salmonella diagnosticum umožňuje zistiť prítomnosť infekcie v tráviacom systéme - salmonely. Od štvrtého dňa po infekcii telo produkuje protilátky proti antigénom Salmonella, ktoré metóda RPGA pomáha identifikovať. Negatívny výsledok indikuje neprítomnosť infekcie a pozitívny titer zvyšujúci sa od 1:200 do 1:800 v akútnej fáze bude indikovať jej prítomnosť.

      Spôsob vykonávania RPGA s markerom záškrtu umožňuje diagnostikovať záškrt a posúdiť imunitu po očkovaní. Protilátky sa začnú produkovať imunitným systémom hneď na druhý deň po infekcii a zostávajú v tele niekoľko týždňov. Citlivosť tejto analýzy je lepšia ako bakteriologická výskumná metóda. Titer 1:80 potvrdzuje prítomnosť záškrtu v tele.

      Marker úplavice pre RPHA najpresnejšie deteguje shigelózu (bakteriálnu úplavicu), a to aj v porovnaní s laboratórnou diagnostickou metódou prostredníctvom bakteriálnej kultivácie. Ak pacient nedostane kvalitnú liečbu, ochorenie prerastie do chronického procesu, pri ktorom často dochádza k relapsom. Analýza umožňuje diagnostikovať akútnu a chronickú fázu hnačky, identifikovať pôvodcu dyzentérie, rozlíšiť bakteriálnu šigelózu od kolorektálneho karcinómu, endokrinných porúch či zápalu hrubého čreva. Negatívna reakcia indikuje neprítomnosť bacila a jeho prítomnosť je potvrdená titrom 1:80 pre deti alebo 1:320 pre dospelých.

      Vykonanie testu s markerom osýpok vám umožňuje určiť ochorenie osýpok. Takéto vyšetrenie sa môže stať alternatívou k RTGA analýze, ktorá sa často vykonáva na diagnostiku osýpok.

      Takže krvný test RPGA - čo to je? Ak to zhrnieme, môžeme s istotou povedať, že ide o modernú, vysoko citlivú a spoľahlivú metódu diagnostiky rôznych ochorení bakteriologickej etiológie.

      V kontakte s

      DIAGNOSTICUM (grécky, diagnostikos schopný rozpoznať) - suspenzie neutralizovaných mikroorganizmov používané ako antigény pre sérologické reakcie. Nebezpečenstvo práce so živými kultúrami, ich variabilita a prítomnosť širokých antigénnych väzieb dávajú prednosť použitiu D. - štandardnejších a homogénnejších prípravkov obsahujúcich určité antigénne zložky.

      Pomocou D. sa aglutinačné reakcie, pasívna (nepriama) hemaglutinácia (RPHA) a iné používajú na identifikáciu špecifických protilátok v sére ľudí a zvierat na účely stanovenia diagnózy a štúdia imunitného stavu tela.

      D. sa používa najmä v laboratórnych štúdiách črevných infekcií. Spoločná antigénna štruktúra črevných baktérií však určuje prítomnosť krížových reakcií a vyžaduje diferencovanú detekciu protilátok. Na tento účel sa uskutočňuje selektívna supresia jednotlivých antigénov: použitím fenolu alebo formalínu sa potlačí O-aglutinabilita, ako navrhujú Felix a Olitzki (A. Felix, L. Olitzki, 1928). Ošetrením alkoholom podľa metódy Wien a Sontag alebo zahrievaním podľa Kauffmanna sa získajú O-diagnostiky s inaktivovaným bičíkovým antigénom. Ešte perspektívnejšie je použitie monodiagnostik, ktorých princíp rozpracoval F. G. Bernhof (1944). Tieto lieky obsahujú iba jednu antigénnu zložku a interagujú iba s určitými špecifickými protilátkami.

      Ukázala sa možnosť zachovania vlastností bakteriálnych D. ich lyofilizáciou (pozri).

      D., používané na sérodiagnostiku rôznych infekcií, sú v zásade podobné, avšak určité typy týchto liekov majú určité špecifiká.

      Všeobecne sa uznáva, že RPGA je citlivejšia a špecifickejšia ako bakteriálna aglutinácia. Ako antigény v RPGA sa používajú formalizované erytrocyty senzibilizované antigénmi získanými pomocou Boivinovej a Westphalovej metódy.

      Taktiež je možné použiť erytrocyt D. na detekciu antigénu v tkanivách, sekrétoch pacientov, extraktoch rôznych látok a pod. V týchto prípadoch sa používajú erytrocyty senzibilizované protilátkami – „protilátkové diagnosticum“.

      Vírusové D. sa používajú hlavne v reakcii fixácie komplementu (CRF), RTGA a neutralizačných reakciách. Pripravujú sa z kultivačných kvapalín obsahujúcich vírus, ktoré sú rôznymi spôsobmi ošetrené (inaktivované).

      Stručný popis hlavných D. a rozsah ich aplikácie je uvedený v tabuľke.

      Vo vedeckej práci sa využívajú aj experimentálne liečivá: erytrocytové colidiagnosticum, difterický erytrocyt D., hemaglutinačné antigény vírusov mumpsu, hemaglutinačný antigén osýpok atď.

      Tabuľka. Stručný popis hlavných diagnostik a účel ich použitia

      Diagnostika

      stručný popis

      Účel použitia (používa sa sérum subjektu)

      Bakteriálne diagnostiky

      Diagnostika z baktérií črevnej rodiny: Shigella Flexner, Sonne, Newcastle; Salmonella tyfus (OH, O), paratýfus A a B, cholera su, typhimurium, enteritidis

      Mikrobiálna suspenzia (3 miliardy mikrobiálnych teliesok v 1 ml), inaktivovaná 0,4-0,5% roztokom formaldehydu

      Vyhlásenie o aglutinačnej reakcii na objasnenie klinu, diagnostika ochorenia

      Salmonella O-diagnosticum (2, 4, 7, 8, 9 a 3, 10)

      Mikrobiálna suspenzia obsahujúca parciálny O-antigén (3 miliardy mikrobiálnych teliesok v 1 ml), získaná z vybraných kmeňov, inaktivovaná 15% roztokom glycerolu

      Nastavenie aglutinačnej reakcie na detekciu O-protilátok na salmonelózu

      Salmonella H-monodiagnosticums (a, b, c, d, eh, c, k, lv, gm, p, st a antigény druhej fázy - 1, 2, 5, 6, 7)

      Mikrobiálna suspenzia obsahujúca zložky bičíkového antigénu 1. a 2. fázy (3 miliardy mikrobiálnych teliesok v 1 ml), získaná z vybraných kmeňov, inaktivovaná 0,5% roztokom formalínu

      Uskutočnenie aglutinačnej reakcie na detekciu H-protilátok na diagnostické účely a na stanovenie anamnézy ochorenia

      Vi-diagnostika

      Mikrobiálna suspenzia (3 miliardy mikrobiálnych teliesok v 1 ml) z kmeňov obsahujúcich Vi-faktor, ošetrená 0,4 % roztokom formalínu a 0,6 % roztokom chloridu vápenatého

      Nastavenie aglutinačnej reakcie na detekciu prenosu baktérií týfusu

      Jednotná diagnostika brucelózy

      Suspenzia Brucelly v 12 % roztoku chloridu sodného, ​​sfarbená do modra a inaktivovaná 0,5 % roztokom fenolu

      Stanovenie aglutinačnej reakcie (Wrightova reakcia a Huddlesonova reakcia na identifikáciu infikovaných ľudí a zvierat – pozri Brucelóza, metódy výskumu)

      Diagnostika tularémie

      Mikrobiálna suspenzia (25 miliárd mikrobiálnych teliesok v 1 ml) kmeňa vakcíny, inaktivovaná 0,5 % roztokom formaldehydu

      Nastavenie volumetrickej kvapôčkovej aglutinačnej reakcie na skle na sérodiagnostiku a štúdium imunitného stavu očkovaných ľudí

      Diagnostika leptospirózy

      Lyofilizovaná mikrobiálna suspenzia 11 kmeňov najbežnejších sérotypov

      Vyhlásenie RSC na potvrdenie klinu, diagnóza ochorenia

      Rickettsiové diagnostiky

      Korpuskulárne antigény - suspenzia rickettsie pestovanej v žĺtkových vakoch kuracích embryí alebo pľúcnom rickettsiovom materiáli z infikovaných hlodavcov, ošetrená éterom, celitom alebo diferenciálnym odstreďovaním

      Nastavenie aglutinačnej reakcie na diferenciálnu diagnostiku rickettsiových infekcií

      Diagnostika erytrocytov

      Diagnostika erytrocytov od Shigella Flexner - Sonne

      Formalizované erytrocyty senzibilizované antigénmi Boivin, Westphal atď.

      Vyhlásenie RPGA na objasnenie klinickej diagnózy dyzentérie

      Erytrocyt Salmonella Vi-diagnosticum

      Formalizované erytrocyty senzibilizované purifikovaným Vi antigénom

      Vyhlásenie RPGA na detekciu prenosu baktérií týfusu

      Erytrocytová Salmonella O-diagnostika (1, 2, 12; 1, 4, 12; 6, 7; 6, 8; 1, 9, 12; 3, 10 a komplex)

      1% suspenzia formalinizovaných erytrocytov senzibilizovaných antigénmi Boivin, Westphal atď.

      Vyhlásenie RPGA na objasnenie klinickej diagnózy ochorenia

      Diagnostika lyofilizovaných erytrocytov tularémie

      Formalizované lyofilizované červené krvinky senzibilizované antigénom tularémie

      Vyhlásenie RPGA na objasnenie klinickej diagnózy tularémie, ako aj protilátkovej neutralizačnej reakcie na zistenie: antigénu

      Vírusová diagnostika

      Antigén vírusu vakcínie

      Suchá príprava živého vírusu vakcínie kultivovaného na chorion-alantoidnej membráne kuracích embryí

      Vyhlásenie RPGA na detekciu antihemaglutinínov u pacientov a očkovaných ľudí

      Adenovírusový špecifický antigén

      Pripravený kultiváciou vírusu typu 6 v kultúre kontinuálnych buniek A-1 (antigén spoločný pre všetky adenovírusy)

      Testovanie RSC na detekciu protilátok fixujúcich komplement v sére pacienta

      Diagnostika kliešťovej encefalitídy a etiologicky podobných ochorení

      Vyhlásenie RSC a RTG na objasnenie klinu, diagnostika ochorenia

      Ornitózny antigén

      Suchý prípravok z varených žĺtkových vakov kuracích embryí obsahujúcich vírus, extrahovaných éterom, vyzrážaných acetónom a inaktivovaných mertiolátom

      Vyjadrenie RSC pre diagnostiku ornitózy u ľudí, vtákov a zvierat

      Diagnostika suchej chrípky

      Alantoická tekutina z vyvíjajúcich sa kuracích embryí infikovaných jedným z kmeňov vírusu chrípky typu A, B alebo C, inaktivovaných formalínom, mertiolátom. Vzhľadom na variabilitu antigénnej štruktúry vírusu chrípky sú zabezpečené časté zmeny produkčných kmeňov

      Vyjadrenie RTG na objasnenie klinickej diagnózy ochorenia

      Parainfluenza diagnosticum typ 1, 2, 3 pre RTGA, suché

      Kultivačná tekutina (ľudské embryonálne obličky) obsahujúca jeden z kmeňov vírusu parainfluenzy, ošetrená Tween-80, éterom a mertiolátom

      Vyjadrenie RTG na objasnenie klinu, diagnostika ochorenia

      Bibliografia: Zuev A. S. Bacterial vi-diagnosticum na identifikáciu chronických nosičov týfusových baktérií, Zhurn, mikr., epid, i immun., č. 2, s. 51, 1959, bibliogr.; Zuev A. S., Novoselova A. I. a Likina I. V. Vývoj metódy výroby O-diagnostik a N-monodiagnostik a ich využitie v sérodiagnostike salmonelózy, tamže, č. 3, s. 42, 1956; Imunológia a prevencia črevných infekcií, vyd. S. I. Didenko, s. 180, M., 1962; Karalnik B. V. Erythrocyte diagnosticums, M., 1976; Sprievodca mikrobiologickou diagnostikou infekčných chorôb, vyd. K. I. Matveeva, s. 172, M., 1973; Subbotina Yu L. a dr. Sérologická diagnostika salmonelózy a antigénnych spojení v reakciách s erytrocytovými a bakteriálnymi O-diagnostikami, Zhurn, mikr., epid, i imm., č. 3, s. 19, 1970, bibliogr.

      L. B. Bogoyavlenskaya.

      Osvedčenie o evidencii č. RZN 2016/3905 zo dňa 04.04.2016

      Účel

      Súprava reagencií „Diagnosticum erythrocyte salmonella Vi-antigen for RPHA“ (SED-Vi) je určená na detekciu protilátok proti Vi-antigénu pôvodcu brušného týfusu v ľudskom krvnom sére reakciou pasívnej hemaglutinácie (RPHA ).

      Charakteristika súpravy Princíp činnosti

      V prítomnosti protilátok proti pôvodcovi brušného týfusu sa pozoruje hemaglutinácia kuracích erytrocytov senzibilizovaných Vi antigénom, čo vedie k vytvoreniu „dáždnika“ usadených erytrocytov na dne jamiek v tvare U doštičky. . Pri absencii protilátok proti pôvodcovi týfusu tvoria usadené červené krvinky „bodku“.

      Nastavte obsah Názov činidla Popis Množstvo v súprave
      Diagnosticum erytrocytový salmonella Vi-antigén, suchý 6% (EDS) Formalizované kuracie erytrocyty senzibilizované antigénom Vi S. typhi. Suchá hygroskopická hmota hnedej farby. Po rozpustení má suspenzia červenohnedú farbu. 1 fl., od 0,6 ml
      Diagnostické sérum Salmonella adsorbované, Vi receptor, suché (riedené 1:20, (K+)) Králičie sérum Salmonella adsorbované, Vi receptor, zriedené 1:20. Suchá hygroskopická porézna hmota bielej farby. Po rozpustení je to číra, žltkastá alebo bezfarebná kvapalina. 1 fl., od 0,3 ml
      Riedidlo testovacej vzorky (RSD) Transparentná kvapalina modrofialovej farby. 1 fl., 10 ml
      Fosfátový tlmivý roztok (PBS) Priehľadná bezfarebná kvapalina. 1 fl., 10 ml
      Polymérová tableta na jedno použitie na imunologické reakcie Jednorazová polymérová tableta na imunologické reakcie vyrobená z priehľadného bezfarebného polystyrénu. 1 PC.
      Diagnostické charakteristiky

      Diagnostikum sa musí aglutinovať v RPHA s adsorbovaným diagnostickým sérom salmonely, Vi receptor, suché (riedenie 1:20), na titer uvedený na štítku séra. Podmienená úroveň diagnostických charakteristík krvného séra od zdravých ľudí by sa mala považovať za riedenie séra nie vyššie ako 1:20. Čas analýzy je 3040 minút. Súprava je určená na testovanie 42 krvných sér pri skríningovej možnosti alebo 10 krvných sér pri možnosti titrácie.

      Preventívne opatrenia

      Súprava je určená len na diagnostické použitie in vitro. Látky obsiahnuté v súprave sú inaktivované a bezpečné. Pri práci so súpravou by ste mali dodržiavať SP 1.3.2322-08 a SanPiN 2.1.7.2790-10.

      Dodatočné vybavenie a materiály

      Vybavenie, materiály, riešenia:

      • 1-kanálové pipetové dávkovače s variabilným dávkovacím objemom 5 - 40 µl; 40 - 200 ul; 200 - 1000 ul a 1000 - 5000 ul;
      • 8- alebo 12-kanálové pipetové dávkovače s variabilným dávkovacím objemom 5 - 40 µl a 40 - 200 µl;
      • destilovaná voda (GOST 6709-72).
      Analyzované vzorky

      Študované vzorky krvného séra sa uchovávajú pri teplote 2 až 8 °C maximálne 3 dni od momentu odberu krvi. Srvátka sa môže skladovať zmrazená pri teplote nepresahujúcej mínus 18 °C najviac 1 rok. Pred použitím sa vzorky rozmrazia pri teplote 16 až 25 °C a premiešajú sa pretrepaním. Opätovné zmrazenie nie je povolené. Vzorky s rastom baktérií a hemolýzou by sa nemali používať. Pred uskutočnením reakcie sa testovacie séra zahrievajú na 56 °C počas 30 minút.

      Vykonanie analýzy Príprava kontrolného diagnostického séra (K+)

      Pripravte pracovný roztok diagnostického séra Salmonella adsorbovaného, ​​Vi receptor, suchý (riedenie 1:20) z 0,3 ml (K+). K tomu pridajte 0,3 ml fosfátového tlmivého roztoku (PBS) k obsahu fľaštičky s K+. Zostávajúce množstvo séra sa môže rozdeliť na alikvóty a uchovávať zmrazené pri teplote nepresahujúcej mínus 18 °C najviac 6 mesiacov.

      Príprava Salmonella erythrocyte diagnosticum (SED)

      Na prípravu pracovného riedenia suspenzie Salmonella erythrocyte diagnosticum sa k obsahu fľaše so suchým 6 % SED pridá 0,6 ml destilovanej vody a nechá sa hydratovať 2 hodiny pri teplote 16 až 25 °C. Potom sa k roztoku pridá 2,4 ml fosfátového tlmivého roztoku (PBS). Pracovný roztok sa uchováva pri teplote 2 až 8 °C najviac 1 mesiac. Zmrazovanie nie je povolené.

      Stanovenie RPGA počas skríningu krvných sér

      Krvné séra na skríningové štúdie sa zriedia v jamkách tablety nasledovne:

      • V prvých jamkách platne sa pripravia predbežné riedenia 1:20, do ktorých sa najskôr pridá 190 μl RIP roztoku, potom 10 μl testovacieho séra. Každé sérum sa pridáva samostatnou špičkou a opatrne sa pipetuje (farba roztoku v jamkách po pridaní séra by sa mala zmeniť z modrofialovej na zelenú);
      • skríningové riedenia 1:40 sa pripravia v druhých jamkách tak, že sa do nich najprv pridá 25 μl roztoku PBS a potom 25 μl predriedeného séra a opatrne sa pipetuje.

      Zakaždým, keď sa vykoná RPGA, je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K+. Za týmto účelom pridajte 50 μl roztoku PBS do 8 jamiek v dlhom rade. Potom pridajte 50 μl pracovného roztoku K+ (1:20) do prvej jamky, opatrne ju odpipetujte a preneste 50 μl do ďalších jamiek, čím získate dvojnásobné riedenie od 1:40 do 1:5120. Pridajte 50 μl roztoku PBS do ďalších 4 jamiek, aby ste monitorovali EDS na absenciu spontánnej hemaglutinácie.

      25 μl SED sa pridá do všetkých jamiek doštičky so skríningovými riedeniami testovacích sér (okrem prvých obsahujúcich RIP) a kontrol. Suspenziu SED pred použitím premiešajte vo fľaši alebo kúpeli! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa pri teplote 16 až 25 °C 30 - 40 minút, kým sa erytrocyty v kontrole úplne neusadia.

      Stanovenie RPGA počas titrácie testovaného krvného séra

      Titrácia testovacieho séra a pracovného roztoku K+ sa uskutočňuje v krátkych radoch platne. Ďalší krátky riadok sa používa na sledovanie absencie spontánnej hemaglutinácie EDS.

      Do prvých jamiek krátkych radov sa pridá 180 μl RIP roztoku na titráciu testovacieho séra. Do všetkých ostatných jamiek pridajte 50 μl roztoku PBS.

      Do jamiek s RIP roztokom sa pridá 20 μl testovacieho séra (dosiahne sa riedenie 1:10). Každé sérum sa pridá vlastnou špičkou a opatrne sa odpipetuje (farba roztoku v jamkách by sa mala zmeniť z modrofialovej na zelenú). Potom sa 50 μl prenesie z prvých jamiek do ďalších jamiek v radoch, čím sa získajú dvojnásobné riedenia od 1:20 do 1:1280. Na konci titrácie sa z posledných jamiek odoberú roztoky v objeme 50 μl.

      Zakaždým, keď sa vykoná RPGA, je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K+. Za týmto účelom pridajte 50 μl roztoku PBS do 8 jamiek v dlhom rade. Potom pridajte 50 μl pracovného roztoku K+ (1:20) do prvej jamky, opatrne ju odpipetujte a preneste 50 μl do ďalších jamiek, čím získate dvojnásobné riedenie od 1:40 do 1:5120.

      Na kontrolu diagnostiky na neprítomnosť spontánnej hemaglutinácie sa do všetkých jamiek krátkeho radu pridá 50 ul roztoku PBS.

      Do všetkých jamiek sa pridá 25 μl SED (okrem prvých jamiek každého radu pre testovacie séra obsahujúce RIP). Suspenziu SED pred použitím premiešajte vo fľaši alebo kúpeli! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa pri teplote 16 až 25 °C 30 - 40 minút, kým sa erytrocyty v kontrole úplne neusadia.

      Zaznamenávanie a interpretácia výsledkov Zaznamenávanie výsledkov pri skríningu krvného séra

      Výsledky sa berú do úvahy na konvenčnej stupnici štyroch krížikov. Za titer séra sa považuje jeho zriedenie, ktoré poskytuje hemaglutináciu aspoň 3 (+++) kríženiami.

      • ++++ (4+) - aglutinované erytrocyty tvoria na dne otvoru obrátený „dáždnik“, jeho okraje padajú;
      • +++ (3+) - aglutinované erytrocyty tvoria na dne otvoru obrátený „dáždnik“, jeho okraje sú hladké;
      • ++ (2+) - spolu s aglutinovanými erytrocytmi je na dne jamky sediment vo forme malého „krúžku“ neaglutinovaných erytrocytov;
      • + (1+) - väčšina červených krviniek nie je aglutinovaná a usadzuje sa vo forme malého „krúžku“;
      • (-) - neaglutinované červené krvinky tvoria „bodku“ na dne jamky.

      Za pozitívny výsledok sa považuje hemaglutinácia erytrocytov zaťažených Vi-antigénom aspoň 3 kríženiami (+++).

      Kontrolu kvality diagnostika zabezpečujú 4 jamky kontrolného radu, do ktorých sa pridával len roztok PBS a SED. V týchto jamkách by nemalo dôjsť k spontánnej hemaglutinácii - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala zopakovať. Ak sa po opätovnom zaradení do štádia objaví hemaglutinácia, liek sa nepoužíva.

      Séra s negatívnym výsledkom by sa mali považovať za neobsahujúce protilátky proti antigénu Vi s diagnostickým titrom 1:40 alebo nižším.

      Séra, ktoré poskytujú pozitívny výsledok pri riedení 1:40, by sa mali znova otestovať titráciou séra, aby sa stanovil jeho titer.

      Účtovanie výsledkov pri titrácii krvného séra

      Za titer séra sa považuje jeho riedenie, ktoré poskytuje hemaglutináciu aspoň 3 (+++) kríženia.

      Kontrolu kvality diagnostika zabezpečujú studne radu na monitorovanie EDS. V týchto jamkách by nemalo dôjsť k spontánnej hemaglutinácii - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala zopakovať. Ak sa po opätovnom zaradení do štádia objaví hemaglutinácia, liek sa nepoužíva.