Vér az rsk-n. Szerológiai diagnosztika - fertőzések elemzési módszerei. Mi befolyásolhatja az elemzés eredményét?

A szerológiai diagnosztikai módszer 2 kutatási terület felhasználását foglalja magában: szerodiagnosztika (specifikus antitestek kimutatása az alanyok vérszérumában) és szeroidentifikáció (az izolált kórokozó antigén tulajdonságainak meghatározása a típus és típus megállapítása érdekében).

A szerodiagnózishoz agglutinációt, precipitációt, lízist, RSC-reakciókat, valamint jelölt antigéneket vagy antitesteket használó reakciókat használnak. Ezen reakciók összetevői: a vizsgált betegek vérszéruma és standard antigénkészítmények. A kutatás célja a fertőző betegségek kórokozói elleni antitestek titerének meghatározása a tesztszérumokban.

A specifikus antitestek magas titerének kimutatása, különösen, ha azok elérik az úgynevezett „diagnosztikai” titerek szintjét, megerősíti a feltételezett diagnózist. Nagy jelentőséget tulajdonítanak a páros szérumok vizsgálatának, amikor a betegség legelején (3-4. napon) vett szérumokat és a betegség 7-10. napján kapott szérumokat egyidejűleg titrálják. Az antitesttiterek 4-szeres növekedése diagnosztikus értékű.

A szeridentifikációhoz leggyakrabban az üvegagglutinációs reakciót alkalmazzák. A reakció komponensei: a kórokozó (antigén) termesztett tiszta tenyészete és standard diagnosztikai immunnyúlszérum (antitestek).

A szerológiai módszer előnye- egyszerűség, hozzáférhetőség, nagy érzékenység, specifikusság, kifejezettség.

Hibák: drága standard gyógyszerek és berendezések szükségessége.

Allergológiai módszer

Ez a módszer magában foglalja a szervezet egy adott fertőző ágenssel szembeni érzékenységének azonosítását, ami nagy diagnosztikai jelentőséggel bír. Ismeretes, hogy egyes fertőző betegségek lefolyását késleltetett típusú túlérzékenység kialakulása kíséri. Ebben a tekintetben az allergén kis dózisainak intradermális beadása ilyen betegeknek megfelelő reakciót vált ki a test részéről, amelyet az allergénnel való ismételt találkozás okoz. A reakció késleltetetten megy végbe, és 48-72 óra elteltével bőrpír, duzzanat, néha beszűrődés (pozitív reakció) jelenik meg az allergén injekció helyén. Ha a szervezet nincs szenzibilizálva, az intradermális adagolás nem okoz semmilyen reakciót a szervezetből (negatív reakció). Az ipar speciális készítményeket állít elő bőrallergiás vizsgálatokhoz: tuberkulin, dysenterin, brucellin, tularin stb.

Az allergológiai módszer különösen fontos olyan esetekben, amikor egy fertőző betegség kórokozójának azonosítása nehéz vagy lehetetlen (például lepra esetén), vagy ha ez sok időt vesz igénybe (például brucellózis esetén). A tuberkulin tesztet a gyakorlatban nemcsak diagnosztikai célokra használják, hanem a gyermekek BCG vakcinával történő újraoltásának időpontjának meghatározására, valamint a kollektív tuberkulózis elleni immunitás tanulmányozására is.

Az allergológiai módszer előnyei - egyszerűsége, megbízhatósága, kifejezőkészsége.

Hiba - korlátozott felhasználás, mivel nem minden fertőző betegségben alakul ki késleltetett típusú túlérzékenység.

SZEROLÓGIAI REAKCIÓK A DIAGNOSZTIKÁBAN

FERTŐZŐ BETEGSÉGEK

Jelenleg az immunológiai kutatási módszereket széles körben alkalmazzák a fertőző és nem fertőző betegségek laboratóriumi diagnosztizálására.

Az antigének és antitestek közötti interakciós reakciókat szerológiainak nevezik (szérum - szérum, logók - tanítás).

Valamennyi szerológiai reakció lényege az antigének és a hozzájuk tartozó antitestek specifikus kombinációja, hogy komplexet képezzenek. Szerológiai reakció lehetséges, ha a fő összetevők - antigének és antitestek - immunológiai egyezése (homológia) van. Az immunológiai specificitás alapja az antigén és az antitest szerkezeti komplementaritása.

Az antigének és antitestek közötti kölcsönhatás két fázisban zajlik - specifikus és nem specifikus. Az első szakasz gyorsan fejlődik. Ez az ellenanyag aktív központjának specifikus kapcsolatából áll a megfelelő (homológ) antigén determináns csoportjaival. A következő fázis lassabban, nem specifikusan fejlődik - ez az antigén-antitest reakció külső megnyilvánulása (pelyhek elvesztése, a táptalaj zavarossága stb.)

A szerológiai reakciókat két célra használják:

1) antitestek kimutatása a tesztszérumban ismert antigének felhasználásával (szerodiagnosztika);

2) ismeretlen antigén azonosítása ismert szérumok segítségével (szerazonosítás).

A mikrobiológiai vizsgálatok során ismeretlen antigén meghatározását az alanyból izolált kórokozók generikus, fajának és típusának megállapítása érdekében végzik. Ilyen esetekben a reakció két fő komponense (antitest, antigén) közül az ismeretlen az antigén, a reakciót ismert antitestekkel kell végrehajtani. Ebben az esetben az antigén a vizsgált anyagból izolált mikroorganizmusok tiszta kultúrája. Az immundiagnosztikai szérumokat ismert antitestekként használják. Ez utóbbiakat állatok (leggyakrabban nyulak) véréből nyerik, amelyeket előzőleg megfelelő bakteriális antigénekkel immunizáltak. Az immunszérumoknak nagy mennyiségű specifikus antitestet kell tartalmazniuk.

Emellett szerológiai reakciók segítségével meghatározhatók a különféle nem bakteriális antigének: vércsoportok, szöveti antigének, daganatok megállapítása, donor-recipiens párok kiválasztása szerv- és szövetátültetésre stb.

A szerológiai tesztek a vérszérumban lévő antitestek kimutatására is használhatók. Ilyen esetekben ismert antigén (diagnosticum) szükséges. Élő vagy elpusztult mikrobák szuszpenziói, kivonatok vagy izolált kémiai frakciók használhatók antigénként.

Számos, az egészségügyi gyakorlatban jelenleg használt szerológiai vizsgálat különbözik abban a jelenségben, amely az antigén és az antitest kapcsolatát tárja fel. A reakció látható megnyilvánulása attól függően változik, hogy milyen technikát alkalmazunk, milyen fizikai állapotban használjuk az antigént vagy immunszérumot, és hogy a reakcióban részt vesz-e a komplement. Például, ha korpuszkuláris antigént használnak, akkor az agglutináció jelensége következik be - a részecskék összeragadása (agglutinációs reakció). Mivel a korpuszkuláris antigének viszonylag nagy részecskékből állnak, látható flokkuláló csapadék képződik. Ha a reakcióban oldható antigént használunk, akkor finomszemcsés csapadék képződését figyeljük meg (kicsapási reakció). Ha komplementet is bevezetnek a bakteriális antigének és az immunszérum közötti kölcsönhatásba, bakteriolízis (a bakteriális antigének feloldódása) vagy a vörösvérsejtek lízise (ha antigénként használják őket) megtörténik. A fluorokrómokkal, enzimekkel vagy radioizotópokkal jelölt immunszérumok szerológiai reakciókban történő alkalmazása lehetővé teszi az antigének antitestekhez való specifikus kötődését a megfelelő jelenség (lumineszcencia, a radioizotóp jelölésének színváltozása vagy aktivitása) révén.

A szerológiai reakciók értékeléséhez olyan kritériumokat alkalmaznak, mint a specifitás és az érzékenység. A specifitás az antigének azon képessége, hogy csak homológ antitestekkel reagáljanak. Az érzékenység a specifikus kölcsönhatás képessége minimális mennyiségű antigénnel és antitesttel.

Agglutinációs reakció

Az agglutinációs reakció (RA) az antigének és az antitestek specifikus kölcsönhatása, amely az antigének szérumantitestek hatására történő összeragadásában és elektrolit jelenlétében történő kicsapódásában fejeződik ki. Ez volt az első a javasolt szerológiai reakciók közül.

Az agglutinációs reakció sajátossága, hogy a sejteket vagy más corpuscularis részecskéket antigénként használják fel a termelés során. A reakció a korpuszkuláris antigének azon képességén alapul, hogy specifikusan kombinálódnak az immunszérum homológ antitesteivel, és így szemcsék, pelyhek és csomók formájában csapadékot képeznek. A reakció csak elektrolitok jelenlétében megy végbe. A reakcióban használt antigéneket agglutinogéneknek, az antitesteket agglutinineknek, a keletkező csapadékot agglutinátnak nevezzük.

Az agglutinációs reakcióban antigénként alkalmazható élő tenyészetek szuszpenziója izotóniás nátrium-klorid oldatban, vagy formaldehiddel, alkohollal vagy melegítéssel elpusztított mikrobák, valamint vörösvérsejtek, leukociták vagy más sejtek.

Az antitestek forrása egy ismert agglutináló szérum, amelyet állatok megfelelő antigénekkel történő immunizálásával nyernek, vagy a vizsgált beteg széruma.

Az agglutinációs reakció végrehajtásának különböző módjai vannak. Ezek közül a leggyakrabban használtak: indikatív reakció üvegen, kiterjedt agglutináció kémcsövekben, hemagglutináció és indirekt hemagglutinációs reakciók (IRHA).

Kapcsolódó információ.

Mik azok a szerológiai vizsgálatok, miért végzik el őket, mik a szerológiai diagnózis főbb módszerei?

A szerológiai vizsgálatok bizonyos immunreakciókon alapuló antigének vagy antitestek vizsgálatára szolgáló módszerek a betegek biológiai anyagában. A fertőző ágens elleni antitestek vagy antigének biológiai anyagokban történő kimutatása lehetővé teszi a betegség okának megállapítását.

nem rendelkeznek 100%-os specificitással és érzékenységgel a fertőző betegségek diagnosztizálásában. Ezért eredményeiket a betegség klinikai képének figyelembevételével kell értékelni. Ez magyarázza a fertőzés diagnosztizálásához több teszt alkalmazásának szükségességét, valamint a módszerek alkalmazását Western blot, megerősítve a szűrési módszerek eredményeit.

„Az immunoblot (Western blot) valójában a végső verifikációs (megerősítő) módszer az immunológiai vizsgálatok láncolatában, amely lehetővé teszi számunkra, hogy végső laboratóriumi következtetést vonjunk le. Ez a teszt különösen fontos egy fertőző betegség (például szamárköhögés, borreliosis stb.) megerősítéséhez vagy cáfolatához. A Western blot módszerre általában a fertőző folyamat pozitív IgG antitesteinek kimutatása után van szükség, mert Ebben a kombinációban történik az eredmények pontosabb laboratóriumi értelmezése és a beteg számára további kezelési taktika. A Western blot elvégzéséhez speciális nitrocellulóz csíkokat használnak, amelyekre a fehérjéket vízszintes, majd vertikális immunoforézissel a molekulatömeg növekedése sorrendjében visszük át. A páciens szérumából származó antitestek kölcsönhatásba lépnek a fehérjékkel a csík bizonyos területein, majd az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálathoz (ELISA) hasonlóan reakció megy végbe.- magyarázza az orvostudományok kandidátusa, a SYNEVO Ukraine laboratórium orvosigazgatója, Oksana Vladislavovna Nebyltsova.

Szerológiai kutatásokhoz használt biológiai anyag

• Vérszérum
• Nyál
• Székletanyag

Milyen állapotok diagnosztizálására használnak szerológiai teszteket?

A szerológiai vizsgálatok célja a kezelés hatékonyságának megállapítása a beteg felépülése után, valamint a betegség visszaesésének kimutatása. Ezenkívül a szerológiai módszerekkel kimutathatók olyan betegségek, mint például:

• Amőbiázis
• Giardiasis
• Opisthorchiasis
• Trichinózis
• Toxocariasis
• Cysticercosis
• Echinococcosis

A szerológiai diagnosztikában használt fő módszerek

Immunfluoreszcens reakció (RIF, Koons-módszer)

A módszerek típusai:

Közvetlen: a mikrobákat vagy szöveti antigéneket vagy mikrobákat speciális antitesteket tartalmazó szérumokkal, valamint jelölt fluorokrómokkal kezelik, amelyek UV-sugárzásban világítanak. A baktériumok így zöld szegélyként világítanak a sejt perifériáján. Fluoreszcens mikroszkóp alatt megfigyelhető.

Közvetett: a keneteket antimikrobiális nyúlszérum antitestekkel kezelik. A mikrobiális antigénekhez nem kötődő antitesteket ezután lemossák. Ily módon kimutathatóak a mikrobákon maradó antitestek. Ennek eredményeként mikroba + anti-nyúl antitestek + antimikrobiális nyúl antitestek komplexe képződik, amelyet fluorokrómmal jelöltek. Ezt a komplexet fluoreszcens mikroszkóp alatt figyeljük meg.

Az eredmények értékelésére egy négyfokú skála áll rendelkezésre, amelyet az antigénsejtek felszíni sárga-zöld fényének intenzitása jellemez:

Nagyon halvány sejtfény

A sejt perifériájának halvány fénye

+++/++++ a sejt ragyogó fénye

A reakció titerének a szérum hígítását tekintjük a reakció eredményével +++ vagy ++++.

Közvetett hemagglutinációs reakció (IHR)

A passzív vagy indirekt hemagglutinációs reakciót használják fertőzések diagnosztizálása protozoonok, baktériumok és rickettsia okozta.

A technika több szakaszból áll. Először a vörösvértesteket kezeljük és „mossuk” izotóniás nátrium-klorid oldattal, majd szükség esetén tannin 1: 20 000 oldattal, majd oldható antigénekkel érzékenyítjük. Pufferolt izotóniás nátrium-klorid oldattal végzett kezelés után az antigén használatra kész. A szérumot kémcsövekben izotóniás nátrium-klorid oldattal hígítjuk, majd minden hígított szérumhoz vörösvértest-diagnosztikát adunk.

Az eredményeket az eritrocita üledék természete alapján értékelik:

Alacsony intenzitás

Közepes intenzitású

Intenzív reakció

Élesen intenzív reakció

Az intenzív +++ vagy élesen intenzív reakció ++++ reakció eredménye, amelyben a vörösvértestek a cső teljes alját lefedik, pozitívnak minősül.

Enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat (ELISA)

A módszer specifitása és érzékenysége magas, több mint 90%. A fő előny a lehetőség fertőzés kimutatásaés a folyamat dinamikájának követése, amit az antitestek szintje jelez.

A tesztet a fertőzések széles körének diagnosztizálására használják, beleértve:

• HIV fertőzés
• Vírusos hepatitisz
• Citomegalovírus fertőzés
• Herpes fertőzés
• Toxoplazma fertőzés

Új ajánlások az egészséges táplálkozásra új kutatások alapján

Az antigént vagy antitestet szilárd lemezeken rögzítik, majd enzimjelölő segítségével kimutatják az antigén-antitest komplexeket.

Az ELISA számos előnnyel rendelkezik más szerológiai módszerekkel szemben. A reakció a legérzékenyebb, a tesztekhez univerzális reagenseket használnak. Az elemzés gyors, és képes különféle osztályokba tartozó immunglobulinok tanulmányozására. Jelenleg az ELISA a laboratóriumi diagnosztika egyik fő módszere.

Az ELISA eredmények kiértékelése automatikusan történik speciális eszközökkel. Egyes esetekben a reakció eredményeinek vizuális rögzítése is megengedett. A szerológiai diagnózis megbízhatósága a laboratóriumi ellenőrzés megszervezésétől függ, amely több, az eredmények minőségének értékelésére szolgáló eljárásból áll.

Szerológia(a latin szérumból - „szérum”, logosz - „tudomány”) az immunológia egyik ága, amely a szérum antitestek és antigénekkel való kölcsönhatásának sajátosságait vizsgálja.

A diagnózis alapja a specifikus antitestek kimutatása, amelyek a szervezet specifikus antigénnel való fertőzésére adott reakcióként képződnek. Attól függően, hogy milyen antitestek találhatók a vérben, következtetést vonnak le a fertőzés természetéről, és ezen antitestek száma jelzi a fertőző betegség aktivitásának mértékét.

A szerológiai vérvizsgálat részeként kutatásra vett anyagot más veszélyes betegségek - herpesz, bélfertőzések, rubeola, toxoplazmózis, chlamydia, kanyaró, chlamydia - tekintetében tanulmányozzák. Ezenkívül ez a tanulmány lehetővé teszi a vércsoport megerősítését és a fehérjék specifitásának meghatározását.

Tehát szerológiai vizsgálatokat végeznek:

• ha az előzetes diagnózis felállítása megtörtént és ennek megerősítése most szükséges. A vizsgálat alapja a megfelelő antigén vérszérumhoz való hozzáadása. A válasz lehetővé teszi, hogy következtetést vonjunk le a betegség jelenlétéről vagy hiányáról;
• ha a diagnózist nem lehet felállítani. A vizsgálat részeként antitesteket adnak a vérhez, és meghatározzák az antigének típusát, amely lehetővé teszi egy adott betegség meghatározását;
• ha szükség van rá.

Így a szerológiai vérvizsgálat segít a diagnózis felállításában vagy a leghatékonyabb kezelés előírásában - minimális idő- és anyagi ráfordítással.

A szerológiai vizsgálatok előnyei a következők:

• a patológiás mikroorganizmusok azonosításának képessége a fertőzés korai szakaszában;
• a betegség kialakulásának és a terápia hatékonysági szintjének nyomon követése;
• nincs szükség speciális előkészítésre a bioanyag felvétele előtt;
• hatékonyság. Az eredmény két-három óra múlva lesz elérhető, ami nagyon fontos a kórházi kezelés körülményei között;
• a reagens pénzügyi rendelkezésre állása, amely lehetővé teszi a mintavételezést a szükséges gyakorisággal;
• nincs ellenjavallat.

Hogyan történik a szerológiai vizsgálat?

Az ulnaris vénából vért vesznek. Fontos szempont, hogy a vért nem fecskendővel, hanem gravitációval veszik - egy tűt fecskendő nélkül szúrnak be a vénába, és legfeljebb öt ml vért gyűjtenek egy kémcsőbe. Az eljárást reggel hajtják végre.

A vizsgálat alapjául szolgáló reakcióktól függően többféle eljárást különböztetnek meg:

1. semlegesítési reakció. Az immunszérum antitestek azon tulajdonságán alapul, hogy semlegesítőszerként reagálnak mikroorganizmusokra vagy toxinokra, megelőzve azok szervezetre gyakorolt ​​negatív hatásait;
2. agglutinációs reakció. Lehet közvetlen vagy közvetett. Az első esetben a vérszérum antitestek jelenlétének vizsgálatáról beszélünk (elölt mikrobákat fecskendeznek az anyagba, és értékelik a reakciót - ha pelyhek formájában csapadék van, a reakció pozitív), a közvetett reakció azon alapul, hogy a vörösvértesteket a rajtuk adszorbeált antigénekkel az anyagba juttatják (a kavicsos üledék pozitív reakciót jelez);
3. csapadék reakció. Az antigénoldatot az immunszérumra rétegezik (folyékony közegként működik). Oldható antigént használnak. Ha az antigén-antitest komplex kicsapódik, a reakció pozitívnak tekinthető;
4. komplementet érintő reakció. Alkalmazási terület: fertőző betegségek kimutatása. A komplement aktiválódik, és a reakciókat megvizsgáljuk;
5. reakció jelzett antigénekkel és antitestekkel. Ez azon a tényen alapul, hogy a speciális módon feldolgozott szöveti antigének vagy mikrobák UV-sugarak hatására fényt bocsátanak ki. A módszert széles körben alkalmazzák nemcsak az antigének diagnosztizálására, hanem hormonok, enzimek és gyógyszerek meghatározására is.

Fel kell készülni a vizsgálatra: a betegnek négy nappal korábban abba kell hagynia a szívgyógyszerek szedését, el kell távolítania az alkoholt bármilyen formában, a fűszeres és zsíros ételeket, az édességeket, korlátoznia kell a fizikai erőfeszítést, kerülnie kell a stresszt.

Ha ezeket a szabályokat nem tartják be, megnő a hamis pozitív eredmény kockázata. Az ismételt vizsgálat felírása előtt az orvosnak meg kell találnia, mit csinált a beteg az eljárás előtti napon, és ajánlásokat kell adnia a vizsgálatra való megfelelő felkészüléshez.

Szerológiai elemzés: magyarázat

A szerológiai vérvizsgálat egy olyan vizsgálat, amely lehetővé teszi a fertőző ágens típusának meghatározását/megerősítését, és segít a szakembernek a diagnózis felállításában. Ez nélkülözhetetlen segítség, ha az orvos nem tudja kiválasztani a gyógyszeres terápiát, mivel a különböző betegségek kórokozói eltérő érzékenységben különböznek az egyes gyógyszerek és antibiotikumok hatásától.

Az anyaggyűjtési eljárás befejezése után a laboratóriumi asszisztensek folytatják a következő szakaszt - a mutatók megfejtését. Tehát, ha nem mutatnak ki antitesteket a páciens vérében, akkor arra a következtetésre juthatunk, hogy nincs fertőzés a szervezetben - a teszt eredménye ebben az esetben pozitív.

De ez az állapot inkább kivétel a szabály alól: ha a betegség tünetei vannak, szerológiai vizsgálatok azonosítják és bizonyítják a súlyos patológia jelenlétét a szervezetben.

Először elemzéssel találják meg a kórokozókat a szervezetben, majd felmérik az antitestek mennyiségét, ami alapján következtetést vonnak le a fertőzés súlyosságáról.

Hepatitis, HIV, szifilisz szerológiai vizsgálata: jellemzők

Szifilisz . A szifilisz elemzése során a szakemberek olyan fehérjéket keresnek, amelyek felelősek a fertőző ágens emberi szervezetbe való bejuttatásáért - Treponema pallidumról beszélünk. Ebben az esetben a vérszérum biológiai anyagként működik.

. A vírusos hepatitis súlyos fertőző betegség, amelynek veszélye abban rejlik, hogy meglehetősen hosszú ideig élhet a szervezetben anélkül, hogy megnyilvánulna. A betegség korai szakaszában, amikor már jobban kezelhető, markerek elemzésével kimutatható - a markerek betegség vagy védőoltás beadása után jelennek meg a vérben.

Meg kell érteni hogy a kórokozó azonosítása csak a fertőzés után 1,5-2 hónappal lehetséges. Ha egy terhes nő elvégzi a tesztet, álpozitív eredmény lehetséges.

Javasoljuk, hogy tekintse meg a https://tabletix.ru/ orvosi webhelyet. Az oldalon hasznos információkat és orvosi véleményeket talál.
Ha az alábbiakban felsorolt ​​tünetek közül egyet vagy többet tapasztal, fontolja meg szerológiai vizsgálat elvégzését:

• hányás;
• rossz étvágy vagy annak hiánya;
• a test ok nélküli gyengesége, túlmunka;
• sárgás arcszín;
• a széklet és a vizelet színének megváltozása.

HIV. Ha az eredmény pozitív, ez nem jelenti azt, hogy a beteg AIDS-fertőzött. Ha a fertőzés a közelmúltban történt (legfeljebb két hónapja), az antitestek jelenléte nem teszi lehetővé annak megállapítását, hogy a betegség kialakult-e. Ismételt vizsgálatot rendelnek el.

Szerológiai vérvizsgálat- a legfontosabb kutatási módszer, melynek fő célja a vírusok, fertőzések, mikrobák gyors azonosítása a szervezetben.

Ez az egyedülálló laboratóriumi „eszköz” lehetővé teszi az immunszuppresszió következményeként fellépő betegségek azonosítását, ezért ne lustálkodjon, hanem rendszeresen végezzen vizsgálatot, hogy időben felismerje a betegséget és gyorsan megszabaduljon tőle.

8 057

A pontos diagnózis felállítása érdekében a beteget átfogó vizsgálatnak vetik alá. Az általános vérvizsgálat nem túl informatív, nem használják szexuális úton terjedő fertőzések diagnosztizálására.

A kutatás típusai és az elemzéshez szükséges bioanyagok

A betegség azonosítására különféle technikákat és bioanyagokat használnak. A korai szakaszban a szifiliszt bakterioszkópos teszt segítségével határozzák meg. A mintákat mikroszkóp alatt vizsgálják. A készülék lehetővé teszi a kórokozó törzsek kimutatását. A szerológiai vizsgálatokat később végzik el. Nekik köszönhetően a mintákban kimutatják a betegség antigénjeit és antitesteit.

A szexuális úton terjedő fertőzések meghatározására szolgáló módszerek 2 kategóriába sorolhatók:

• Közvetlen, kórokozó mikroorganizmusok azonosítása. Ezek közé tartozik: sötétmezős mikroszkóp, RIT elemzés (nyulak fertőzése bioanyaggal kutatás céljából), PCR módszer - polimeráz láncreakció (segítségével a kórokozó genetikai elemeit találják meg).
• A közvetett (szerológiai) tesztek lehetővé teszik a kórokozó elleni antitestek kimutatását. Ezeket az immunrendszer termeli a fertőzésre adott válaszként.

A szerológiai technikák két kategóriába sorolhatók: treponemális és nem treponemális.

Nem treponemális, beleértve: toluidin vörös teszt, RSC analízis, RPR teszt, expressz RMP módszerrel végzett vérvizsgálat.

Treponemális, kombinálás: immunoblot, RSK teszt, RIT elemzés, RIF vizsgálat, RPGA teszt, ELISA analízis.

A fertőzésre vonatkozó tesztek információtartalma változó. Leggyakrabban a szifilisz főbb tesztjeit végzik el, amelyek szerológiai módszereket tartalmaznak. A vizsgálatra szoruló betegek esetében az orvos egyedi vizsgálatokat ír elő.

Bioanyag kutatáshoz

A Treponema pallidum, egy spirálszerű kórokozó azonosítására, amely szifiliszt okoz, mintákat vesznek:

• vénás vér;
• cerebrospinális folyadék (váladék a gerinccsatornából);
• nyirokcsomók tartalma;
• fekélyes szövet.

Ha a szifilisz kimutatására teszteket kell végezni, akkor nem csak a cubitalis vénából, hanem az ujjból is vért adnak. A bioanyag megválasztását és a vizsgálat módját a fertőzés súlyossága és a diagnosztikai központ felszereltsége befolyásolja.

Közvetlen kutatás

A szifilisz meggyőző bizonyítéka a fertőző ágensek mikroszkóp alatti azonosítása. Ily módon a kórokozót 10 alanyból 8-nál találják meg.A fennmaradó 2 beteg negatív eredménye nem jelenti azt, hogy nem fertőzött.

A vizsgálatot a betegség elsődleges és másodlagos stádiumában (stádiumában) végzik, amelyet bőrkiütések és szifilómák (fekélyek) megjelenése jellemez a hámszöveteken vagy a nyálkahártyákon. A szexuális úton terjedő betegségeket okozó kórokozók az elváltozások váladékában találhatók.

Pontosabban a RIF nevű komplex teszttel, egy immunfluoreszcens reakcióval lehet kimutatni a treponemákat. A kutatásra szánt mintát fluoreszcens antitestekkel előkezeljük. A fényre képes vegyületek összetapadnak a baktériumokkal. A mintákat mikroszkóp alatt vizsgálva fertőzés esetén sziporkázó kórokozókat lát a laboráns.

A tesztet a betegség korai diagnosztizálására használják. Minél tovább tart a betegség, annál alacsonyabb a kutatási módszerek érzékenysége. Ezenkívül a kiütések és fekélyek antiszeptikumokkal történő kezelése után, valamint kezelésen átesett betegeknél esik. Esetenként a teszt álnegatív és álpozitív eredményeket ad.

A RIT-elemzés rendkívül pontos módszer a szifilisz kimutatására. A teszt elvégzésekor sokáig kell várni az eredményekre. Amíg a fertőzött nyúl a fertőzés jeleit nem mutatja. A tesztet nagyon ritkán használják, annak ellenére, hogy rendkívül pontos.

A szifilisz polimeráz láncreakciójával meghatározzák a kórokozók genetikai elemeit. A PCR egyetlen hátránya a magas költsége.

Nem treponemális vizsgálatok

Az ilyen vérvizsgálatok segítenek azonosítani azokat az antitesteket, amelyek a kórokozók membránjainak általános szerkezetéhez kapcsolódó kardiolipinre adott válaszként jelennek meg.

Wasserman reakció (RW vagy RW)

A szifilisz leghíresebb tesztje a Wasserman-reakció. Az RV a komplementkötési reakciók (CFR) kategóriájába tartozik. Az új RSC módszerek jelentős eltéréseket mutatnak a hagyományos RW-től. De mint korábban, a „Wassermann-reakció” fogalma jelöli őket.

Az immunrendszer a treponemális invázióra válaszul antitesteket (markereket) szintetizál. A szifilisz vérvizsgálatával mutatják ki őket a Wasserman-reakció segítségével. A pozitív RW eredmény megerősíti, hogy az alany fertőzött.

Hemolízis reakció – RT analízis indexe. Két anyag lép kölcsönhatásba vele: hemolitikus szérum és birka vörösvérsejtjei. A szérum úgy készül, hogy nyulat birka vörösvértestekkel immunizálnak. A biológiai folyadék aktivitását hevítés csökkenti.

Az RV indikátorok attól függenek, hogy hemolízis történt-e vagy sem. A markerektől mentes mintában hemolízis lép fel. Ebben az esetben az antigénekre adott reakció lehetetlen. A komplementet a birka vörösvértesteivel való kölcsönhatásra fordítják. Ha vannak markerek a mintában, a kompliment reagál az antigénekkel. Ebben az esetben hemolízis nem következik be.

Az RW összetevőit egyenlő mennyiségben mérik. A szérumot, antigént és komplementet tartalmazó mintát felmelegítjük. Bárány eritrocitákat és szérumot adunk a mintához. Tartsa 37 fokos hőmérsékleten, amíg a hemolízis meg nem történik az antigén helyett sóoldatot tartalmazó kontrollmintában.

Az RT végrehajtásához kész antigéneket használnak. A titerek és a hígítási technológia a csomagoláson fel van tüntetve. A pozitív RW eredményt keresztek jelzik. A kész vizsgálati eredményeket a következőképpen jelzik:

• ++++ – maximum pozitív (késleltetett hemolízis);
• +++ – pozitív (a hemolízis jelentősen késik);
• ++ – gyengén pozitív (a hemolízis részben késett);
• + – kétséges (a hemolízis kissé késik).

Negatív RT esetén a hemolízis teljes mértékben megvalósult minden mintában. De bizonyos esetekben hamis pozitív adatok születnek. Ez akkor történik, amikor a kardiolipin belép a sejtekbe. A védekezési mechanizmusok nem termelnek markereket a „natív” kardiolipinre.

Időnként azonban adódhatnak kivételes helyzetek. A pozitív RW-t nem fertőzött emberekben észlelik. Ez akkor lehetséges, ha a beteg vírusok által okozott súlyos betegségben szenvedett (tüdőgyulladás, malária, tuberkulózis, máj- és vérpatológiák). A pozitív RV terhes nőknél fordul elő. Ez annak a ténynek köszönhető, hogy az immunrendszer túlságosan legyengült.

Ha felmerül a gyanú, hogy a szifilisz teszt eredménye hamis pozitív, a beteget tovább vizsgálják. A probléma az, hogy ezt a fertőzést egyetlen klinikai laboratóriumi vizsgálattal nem lehet kimutatni. Egyes tanulmányok hamis mutatókat adnak, amelyek negatívak és pozitívak is lehetnek.

A szifilisz részletes elemzése segít megbízható adatok megszerzésében. Hála neki, felállítják a valódi diagnózist: a fertőzés bebizonyosodik vagy kizárt. Ezenkívül a kiterjesztett teszt lehetővé teszi a fertőzés kialakulásának megállítását és a szükségtelen terápia megszüntetését.

RSK és RMP

A szifilisz tesztelésekor a hagyományos Wasserman-reakciót rendkívül ritkán alkalmazzák. Ehelyett az RSK módszert használják. A teszt a fertőzés után 2 hónappal pozitív eredményt ad. A betegség másodlagos formájában az esetek közel 100%-ában pozitív.

A mikroprecipitációs módszer (MPM) a Wasserman-reakcióhoz hasonló mechanizmusú vizsgálat. A technika könnyen megvalósítható. Gyorsan végrehajtják. A szifilisz vizsgálatához ebben az esetben az ujjból vért vesznek. A technika pozitív eredményt ad 30 nappal a szifilóma megjelenése után. A kutatás során előforduló hibák nem kizártak. Hamis pozitív adatok a következők hátterében: súlyosbodó fertőzések, tüdőgyulladás, szívroham, stroke, mérgezés.

A következők hibás tesztekhez vezetnek:

Miután felfedezték a szifilisz megkérdőjelezhető tesztjét, treponemális vizsgálatokat végeznek. Segítenek a diagnózis tisztázásában.

RPR és toluidin vörös teszt

A plazma reagin módszer (RPR) a Wasserman-reakció másik analógja. Szükség esetén használják:

• tünetmentes egyének szűrése;
• szifilisz megerősítése;
• megvizsgálja az adományozott vért.

A toluidin vörös tesztet, az RPR-hez hasonlóan, a gyógyszeres terápia dinamikájának értékelésére végzik. Indikátoraik csökkennek, ha a betegség visszahúzódik, és nő, amikor a patológia kiújul.

A nem treponemális tesztek azt mutatják, hogy a beteg mennyire gyógyult. A szifiliszre vonatkozó negatív eredmények azt jelzik, hogy a betegség teljesen visszahúzódott. Az első vizsgálatot 3 hónappal a terápia után végezzük.

Treponemális vizsgálatok

Nagyon produktív teszteket végeznek treponemális antigének használatával. Akkor készülnek el, ha:

• az RMP módszerrel pozitív eredmény született;
• a szűrővizsgálatokból származó hibás adatok felismerése szükséges;
• gyanítja a szifilisz kialakulását;
• rejtett fertőzés diagnosztizálása szükséges;
• retrospektív diagnózist kell végezni.

RIF és RIT tesztek

Sok kezelt betegnél a minták treponemális vizsgálata hosszú ideig pozitív eredményt ad. Nem használhatók fel a kezelés hatékonyságának megítélésére. A RIT és a RIF rendkívül érzékeny tesztek. Nekik köszönhetően megbízható adatokat kapunk. Ezek az elemzések munkaigényesek, jelentős időt és korszerű berendezéseket igényelnek. Ezeket szakképzett egészségügyi dolgozók végezhetik.

A szifilisz RIF-tesztjének elvégzésekor a fertőzés után 2 hónappal pozitív adatok születnek. A negatív paraméterek megerősítik, hogy az alany egészséges. Pozitív - azt sugallja, hogy a személy fertőzött.

A RIT-t akkor hajtják végre, ha a mikroprecipitációs reakció pozitív. Ez a szifilisz vérvizsgálata segít megcáfolni vagy megerősíteni a fertőzés jelenlétét. A teszt ultra-érzékeny, pontosan jelzi, hogy a beteg fertőzött vagy egészséges. De a tanulmány csak 3 hónappal a treponemek szervezetbe jutása után szolgáltat megbízható adatokat.

Immunblot módszer

Az ultraprecíz tesztek közé tartozik az immunblot. Ezt a vérvizsgálatot ritkán végzik el szifiliszre. Újszülöttek vizsgálatakor alkalmazzák. Gyorstesztre nem alkalmas. A pozitív eredményeket késéssel érik el. Mikroprecipitációs módszerrel sokkal korábban nyerik őket.

ELISA és RPGA

Az informatív ultraprecíz kutatási módszerek közé tartozik az ELISA és az RPGA teszt. Segítségükkel gyors diagnosztikát végeznek. A laboratóriumi technikusok rengeteg ilyen vizsgálatot végeznek. Nekik köszönhetően pontos diagnózist lehet felállítani.

A szifilisz RPGA-tesztje a kórokozó szervezetbe kerülése után 30 nappal pozitív. Az elsődleges fertőzés diagnosztizálására szolgál, amikor fekélyek és kiütések jelentkeznek.

Ennek köszönhetően lehetővé válik a patológia előrehaladott, titokban folyamatban lévő, valamint veleszületett formáinak azonosítása. De nem treponemális és treponemális tesztekkel együtt hajtják végre. Az átfogó diagnosztika garantálja az eredmények megbízhatóságát. A háromszoros vizsgálat pontosan bizonyítja a szexuális úton terjedő fertőzés jelenlétét vagy hiányát.

A pozitív reakció hosszú ideig fennáll. Emiatt a vizsgálatot nem használják a kezelés hatékonyságának értékelésére.

Az ELISA teszt a fertőzés után 21 nappal pozitív. A teszt néha hibás eredményeket ad. Szisztémás patológiákban és károsodott anyagcsere-folyamatokban jelennek meg. Hatékonyságuk megkérdőjelezhető egy fertőzött anyától született gyermek esetében.

A szerológiai kutatási módszerekkel kapott hibák váltották ki a progresszív diagnosztikai módszerek felfedezését. A gázkromatográfia és a tömegspektrometria nem ad hamis eredményeket. Tömeges használatuk egyetlen akadálya a magas költségük.

Diagnosztikai algoritmus

• Amikor a szifilisz az elsődleges fázisban van (a fertőzés pillanatától számított 60 napig), a kórokozót sötét háttéren keresik, vagy fluoreszcens antitesteket használnak a kimutatására.
• Ha a patológia primer, másodlagos vagy látens formában van, RMP-t és ELISA-t alkalmaznak. A szifilisz RPGA vérvizsgálata segít megerősíteni az eredményeket.
• A másodlagos fertőzés kiújulása esetén a fekélyek és kiütések váladékozását elemzik. A kórokozókat eltávolítják a mintákból, és mikroszkóppal vizsgálják.
• Amikor a betegség a harmadlagos fázisba lép, a betegek 1/3-ának negatív RMP-je van. Ugyanakkor az ELISA és az RPGA eredményei pozitívak. Ezek azonban nem mindig jelzik a harmadlagos időszakot, hanem megerősítik, hogy az illető korábban fertőzést szenvedett el. A gyengén pozitív teszt a teljes gyógyulást bizonyítja, nem pedig a harmadlagos fázis kialakulását.
• A veleszületett szifilisz megerősítésére vérvizsgálatot vesznek az anyától és a babától. Hasonlítsa össze az RMP-tesztekből származó adatokat. Figyelembe kell venni, hogy a baba ELISA és RPGA értéke pozitív. A diagnózis megerősítése immunblot technikával történik.

A szifilisz, mint minden szisztémás patológia, az egész testet érinti. Ezért a vizsgálatot terhesség alatt, abortusz előtt kell elvégezni. A betegek RMP-n, ELISA-n, RPGA-n mennek keresztül.

Hogyan lehet tesztelni

A venereológus elküldi a betegeket elemzésre. A magánlaboratóriumok az ügyfél kérésére anonim vizsgálatokat végeznek szifiliszre. A vizsgálat elvégzéséhez nincs szükség orvosi beutalóra.

A vizsgálat lefolytatásának szabályai:

• A vért a laboratóriumban reggel éhgyomorra veszik (az eljárás után elfogyasztják). A vizsgálat előtt csak vizet szabad inni.
• 2 nappal a vizsgálat előtt tilos zsíros ételek fogyasztása és alkoholfogyasztás.
• A vért ujjból vagy vénából veszik.
• Mennyi ideig tart a tanulmány? Általában nem több, mint egy nap. A szifiliszre vonatkozó tesztek értelmezését a laboratóriumi technikusok vagy a kezelőorvos kéri.
• Meddig érvényes a teszt? 3 hónap elteltével a vizsgálati eredmények érvénytelenek. Megint bérbe adják.

Ha az elemzés átirata azt mutatja, hogy a teszt pozitív, meg kell látogatnia egy venereológust, aki további vizsgálatot ír elő a diagnózis pontos megerősítéséhez és a szükséges kezelési rend kiválasztásához.

A gerinc tartalmának vizsgálata

A neurosifilisz diagnózisa a cerebrospinális folyadék vizsgálata után történik. Ez az elemzés készül:

• látens fertőzésben szenvedők;
• idegrendszeri betegségek tüneteire;
• tünetmentes, előrehaladott neuroszifilisz;
• felépült betegek pozitív szerológiai reakciókkal.

Az orvos beutalót ad liquorvizsgálatra. A szúrást a gerinccsatornából 2 csőbe veszik. A szúrást jóddal megkenjük és steril szalvétával lefedjük. Az eljárás után a beteg 2 napig ágyban marad.

1 mintában meghatározzák a fehérje mennyiségét, a sejteket és az agyhártyagyulladás nyomait. A második mintában a szifilisz kórokozója elleni antitesteket számítják ki. Ehhez a következő teszteket végzik el: RV, RMP, RIF és RIBT.

Attól függően, hogy hány jogsértést észleltek, 4 típusú cerebrospinális folyadék létezik. Mindegyik az idegrendszer specifikus károsodását jelzi. Az orvos diagnosztizálja:

Ezenkívül a vizsgálati eredményeket a páciens gyógyulásának megítélésére használják.

A tesztek értelmezése az orvos feladata. Csak ő tudja levonni a megfelelő következtetéseket, szükség esetén további vizsgálatokat ír elő, és pontos diagnózist készít. Veszélyes szisztémás patológia esetén nem szabad öndiagnózist végeznie. A diagnózis hibája súlyos következményekkel jár.

Komplement rögzítési reakció (CFR)

A komplementkötési reakciót (FFR) két fázisban hajtják végre: az első fázisban az antigént kombinálják a tesztszérummal, amelyben feltételezik az antitestek jelenlétét, komplementet adnak hozzá, és termosztátban 30 percig inkubálják.

Második fázis: hemolitikus rendszer hozzáadása (birka vörösvérsejtjei + hemolitikus szérum). A termosztátban 30 percig tartó inkubálás után az eredményt figyelembe veszik.

Pozitív RSC esetén a szérum antitestek az antigénnel egyesülve immunkomplexet alkotnak, amely komplementet köt, és nem megy végbe hemolízis. Ha a reakció negatív (nincs antitest a tesztszérumban), a komplement szabad marad, és hemolízis következik be.

Az RSC-t szifilisz, gonorrhoea, tífusz és más betegségek szerológiai diagnosztizálására használják.

A jelölt antigéneket és antitesteket alkalmazó immunreakciók azon alapulnak, hogy a reakcióban részt vevő egyik összetevőt (antigéneket vagy antitesteket) valamilyen könnyen kimutatható jelöléssel kombinálják. Jelölőként fluorokrómokat (RIF), enzimeket (ELISA), radioizotópokat (RIA) és elektronsűrűségű vegyületeket (IEM) használnak.

Az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatot (ELISA), más immuntesztekhez hasonlóan, a következőképpen alkalmazzák: 1) ismeretlen antigén kimutatására ismert antitestek használatával vagy 2) antitestek kimutatására a vérszérumban ismert antigén használatával. A reakció sajátossága, hogy egy ismert reakciókomponenst egy enzimmel (például peroxidázzal) kombinálnak. Az enzim jelenlétét szubsztrát segítségével határozzák meg, amely az enzim működése során elszíneződik. A legszélesebb körben használt szilárd fázisú ELISA.

1) Antigén kimutatás. Az első lépés a specifikus antitestek adszorpciója a szilárd fázison, amelyet a műanyag panelek üregeinek polisztirol vagy polivinil-klorid felületeként használnak. A második szakasz a vizsgálati anyag hozzáadása, amelyben feltételezzük az antigén jelenlétét. Az antigén antitestekhez kötődik. Ezt követően a kutakat kimossák. A harmadik szakasz egy adott antigén elleni antitesteket tartalmazó, enzimmel jelölt specifikus szérum hozzáadása. A jelölt antitesteket az antigénekhez kötik, és a felesleget mosással távolítják el. Így ha a vizsgált anyag antigéneket tartalmaz, akkor a szilárd fázis felületén enzimmel jelölt antitest-antigén-antitest komplex képződik. Az enzim kimutatásához szubsztrátot adunk hozzá. A peroxidáz esetében a szubsztrát pufferoldatban H 2 O 2 -vel kevert ortofenilén-diamin. Az enzim hatására barna színű termékek képződnek.

2) Antitestek kimutatása. Az első szakasz a specifikus antigének adszorpciója a lyukak falán. A kereskedelmi tesztrendszerekben jellemzően az antigének már a lyukak felületén adszorbeálódnak. A második szakasz a tesztszérum hozzáadása. Antitestek jelenlétében antigén-antitest komplex képződik. A harmadik szakasz - mosás után enzimmel jelölt antiglobulin antitesteket (humán globulinok elleni antitesteket) adnak a lyukakba. A reakció eredményeit a fent leírtak szerint értékeljük.

Nyilvánvalóan pozitív és nyilvánvalóan negatív mintákat használnak, amelyek kereskedelmi rendszerekben kaphatók, kontrollként.

Az ELISA-t számos fertőző betegség, különösen a HIV-fertőzés és a vírusos hepatitis diagnosztizálására használják.

Az immunoblot az ELISA egyik típusa (az elektroforézis és az ELISA kombinációja). A biopolimereket, például a humán immundeficiencia vírus antigénjeit gélelektroforézissel választják el. Ezután az elválasztott molekulák ugyanabban a sorrendben kerülnek a nitrocellulóz felületére, mint a gélben. Az átviteli folyamatot blottolásnak nevezik, a kapott nyomat pedig blot. Ezt a lenyomatot a tesztszérum befolyásolja. Ezután peroxidázzal jelölt anti-humán globulin szérumot adnak hozzá, majd a szubsztrátot, amely az enzim hatására barna színűvé válik. Barna csíkok képződnek azokon a helyeken, ahol az antitestek antigénekkel kombinálódnak. A módszer lehetővé teszi az egyes vírusantigének elleni antitestek kimutatását.

Radioimmunoassay (RIA). A módszer lehetővé teszi az antigén mennyiségének meghatározását a vizsgált mintában. Először egy feltételezhetően antigént tartalmazó anyagot adunk az immunszérumhoz, majd egy ismert, radioizotóppal jelölt antigént, például I 125-öt adunk hozzá. Ennek eredményeként a kimutatható (jelöletlen) és az ismert jelölt antigén korlátozott mennyiségű antitesthez kötődik. Mivel a jelölt antigént egy bizonyos dózisban adják hozzá, így meghatározható, hogy melyik része kötődik antitestekhez, és melyik része maradt szabadon a jelöletlen antigénnel való versengés miatt, és eltávolították. Az antitestekhez kötődő jelölt antigén mennyiségét számláló segítségével határozzuk meg. Ez fordítottan arányos a kimutatott antigén mennyiségével.

Immunelektronmikroszkópia (IEM). Egy antigén, például egy influenzavírus, egy elektronsűrű anyaggal jelölt specifikus antiszérumhoz kapcsolódik. Fémtartalmú fehérjéket (ferritin, hemocianin) vagy kolloid aranyat használnak jelölésként. A mikroszkópos vizsgálat során egy elektronmikroszkópban fényképeket készítenek, amelyeken az influenza virionjai láthatók, amelyekhez sötét pontok kapcsolódnak - jelölt antitestek molekulái.

Szerzett immunitás, különbsége az örökletestől (specifikus, veleszületett). A szerzett immunitás típusai.

Feladat. A család hároméves gyermeke, Valerij diftériában megbetegedett. A család többi tagja nem betegedett meg, és az anya gyermekkorában diftériás volt, az apa pedig diftéria toxoiddal volt beoltva. Az ötéves Natasha nővére orvosi ellenjavallatok miatt egy időben nem kapott diftéria toxoid oltást, ezért sürgősségi profilaxist kellett végeznie diftéria elleni antitoxikus szérum segítségével. Az öccse, a három hónapos Vitalij nem lett beteg, bár nem oltották be semmivel. Egy macska és egy kutya van a házban, nem betegek. Minden családtagnál és állatoknál nevezze meg azt az immunitás típusát, amely megakadályozta, hogy megbetegedjenek.

Mi az antigén? Milyen anyagok lehetnek antigének? Teljes értékű antigének és haptének, miben különböznek egymástól? Az antigén szerkezete. Mi a neve az antigénmolekula azon részének, amely meghatározza a specificitását? Nevezze meg azokat az antigéneket, amelyeket ismer. Mik azok az autoantigének? A mikrobiális sejt antigén szerkezete. Flagelláris és szomatikus antigének; lokalizáció, betűjelölés, kémiai jelleg, kapcsolat a hőmérséklettel, elkészítési mód, gyakorlati alkalmazás. Anatoxin, tulajdonságai, alkalmazása, előállítása. Milyen szövet alkotja a szervezet immunrendszerét? Jelölje meg az emberi immunrendszer központi és perifériás szerveit. Ismertesse a humorális és celluláris immunválasz kialakulásának folyamatát! Határozza meg azokat a sejteket, amelyek elfogják és megemésztik az antigént; sejtek, amelyek kölcsönhatásba lépnek a humorális immunitás, a celluláris immunitás kialakulásában; sejtek, amelyek átalakulnak és antitesteket termelő plazmasejtekké válnak; sejtek, amelyek stimulálják ezt a folyamatot; sejtek, amelyek elnyomják az immunválaszt; olyan sejtek, amelyek elpusztítják a tumorsejteket és a vírussal fertőzött sejteket. Mik azok az antitestek? Hogyan lehet immunszérumot szerezni? Hogyan lehet olyan szérumot szerezni, amely semlegesíti a tetanusztoxint? Milyen antigének ellen képződnek antitoxinok, agglutininek és hemolizinek? Milyen antitestek keletkeznek, amikor diftéria toxoidot juttatnak a szervezetbe? diftéria baktérium? Az antitestek kémiai természete és szerkezete. Mi az immunglobulin aktív helye? Sorolja fel az immunglobulinok osztályait és tulajdonságaikat! Jelölje meg azon immunglobulinok osztályát, amelyek áthatolhatnak a placentán. Melyik osztályba tartoznak a szekréciós immunglobulinok? Az antitest-felhalmozódás dinamikája. Miben különbözik a másodlagos immunválasz az elsődlegestől? Hogyan használják fel az immunválasz dinamikájára vonatkozó ismereteket a gyakorlati gyógyászatban? Mik az immunreakciók, mi a mechanizmusuk, a reakció fázisai. Milyen 2 irányban alkalmazzák az immunreakciókat? Sorolja fel az immunreakciókat!

Feladat. Cserélje ki a hiányzó szavakat „anatoxin” vagy „antitoxin” szavakkal: _________ egy antigén, _____________ egy antitest, __________ aktív immunitást hoz létre a szervezetbe juttatva, __________ passzív immunitást hoz létre, amikor bejut a szervezetbe, __________ állatok immunizálásával nyerik, ___________ formalinnak és hőnek kitéve toxinból nyerik, _______________ semlegesíti a méreganyagokat, __________ ellenanyagok képződését okozza a szervezetben.

Agglutinációs reakció: mi az agglutináció, mi az antigén, mi az antitest; beállítási módszerek, milyen vezérlők vannak beállítva és miért; hogy nézzenek ki a kezelőszervek. Agglutináló szérumok, mit tartalmaznak, hogyan nyerik, mire használják; Mi az agglutináló szérum titere? Közvetett (passzív) hemagglutinációs reakció: mi szolgál antigénként ebben a reakcióban, hogyan nyerhető, a reakció mechanizmusa. Mi az eritrocita diagnosztika? Mi az antitest vörösvértest diagnosztika? Kicsapódási reakciók: mi a csapadék, mi szolgál antigénként; Hogyan szerezzünk kicsapó szérumot? Mi a kicsapódó szérumtiter? Beállítási módszerek, gyakorlati alkalmazás.

Komplementrögzítési reakció (CFR): a CFR elve; mi képződik, amikor az immunszérum kölcsönhatásba lép egy specifikus antigénnel; mi történik a komplementtel, ha jelen van az interakció során? Mi a komplement sorsa, ha nincs specifikus affinitás az antigén és az antitestek között? Ha az RSC végeredménye hemolízis, ez pozitív vagy negatív eredményt jelent? Az RSC beállításának módszertana. Miért kell a tesztszérumot inaktiválni? Hemolitikus szérum: mit tartalmaz, hogyan nyerik, mi a titere és hogyan határozzák meg? Komplement: kémiai természet, kapcsolat a magas hőmérséklettel, hol található? Hogyan lehet tönkretenni a kiegészítést? Mit használnak a gyakorlatban kiegészítőként?

Feladat. Egy gyilkossággal vádolt férfi ruháján vérfoltot találtak. Milyen reakcióval lehet megállapítani, hogy emberi vérről van-e szó? mi lesz ebben a reakcióban antigén és mi lesz antitest; Milyen diagnosztikai gyógyszernek kell rendelkezésre állnia a laboratóriumban erre a reakcióra, hogyan kell elkészíteni?

Feladat. Hogyan használjuk a kicsapódási reakciót annak meghatározására, hogy az elemzésre szállított húsminta szarvasmarha- vagy lóhús-e; milyen diagnosztikai gyógyszerekre van szükség?

Kicsapási reakció agar gélben, formulázási módszerek, gyakorlati alkalmazás.

Mit mutat a szerológiai vérvizsgálat?

Mit mutat a szerológiai vérvizsgálat? A diagnosztikai intézkedések a legfontosabb szakasz bármely betegség kezelésében. A kezelés sikere nemcsak a felírt gyógyszerektől függ, hanem nagymértékben attól is, hogy mennyire helyesen állították fel a diagnózist.

Ezenkívül a diagnózis lehetővé teszi a szövődmények és az egyidejű betegségek megelőzését. A páciens vérének szerológiai vizsgálatával kimutatják az antitestek és antigének jelenlétét. A tanulmány segít számos betegség megtalálásában, fázisuk meghatározásában és a kezelés előrehaladásának nyomon követésében.

Mi a szerológia?

A szerológia az immunológia azon ága, amely az antigének antitestekkel szembeni reakcióit vizsgálja. Az orvostudomány ezen ága a vérplazma és immunológiai jellemzőinek vizsgálatával foglalkozik.

Manapság az antitestek szerológiai vérvizsgálata megbízható módszer a humán immunhiány vírus, a hepatitis, a brucellózis, az STD-k és más életveszélyes betegségek kimutatására. Nézzük meg, milyen esetekben írják elő.

Használati javallatok

Szerológiai vérvizsgálat szükséges a betegség kórokozójának azonosításához, ha nehéz a diagnózis felállítása.

A reakció végrehajtásához a kórokozók antigénjeit bejuttatják a plazmába, majd a folyamatban lévő folyamatot egy laboráns tanulmányozza. Vagy a fordított reakciót hajtják végre: antitesteket fecskendeznek a fertőzött vérbe, hogy meghatározzák a kórokozó specifikus azonosítását.

Hatály

Ezt a kutatást az orvostudomány különböző ágaiban használják. Ez a reakció azonosítja a szervezet által termelt specifikus sejteket és antitesteket a fertőzések és vírusok leküzdésére.

Ezenkívül egy személy vércsoportját szerológiai módszerrel határozzák meg.

Hasonló szerológiai vérvizsgálatot alkalmaznak a nőgyógyászatban a nemi úton terjedő betegségek diagnosztizálására. Ezt a módszert terhes nők átfogó vizsgálatára is alkalmazzák (toxoplazmózis, HIV, szifilisz stb. kimutatása). Ennek a tesztnek a teljesítése kötelező, ha jelentkezik egy várandós klinikára.

Gyermekeknél szerológiai reakciót alkalmaznak az úgynevezett „gyermekkori” betegségek (bárányhimlő, kanyaró, rubeola stb.) diagnózisának megerősítésére, ha a tüneteknek nincs kifejezett megnyilvánulása, és a betegséget a klinikai indikációk elemzésével lehetetlen azonosítani. .

A szexuális úton terjedő betegségek kimutatása

A venereológusok számára ez a vizsgálat valóban pótolhatatlan, és lehetővé teszi a nagyon pontos diagnózis felállítását.

Homályos klinikai kép esetén a szifilisz, a giardiasis, az ureaplasmosis, a chlamydia, a herpesz és más betegségek szerológiai vérvizsgálata gyorsan kimutathatja az antitestek jelenlétét.

Vírusos és fertőző betegségek

A szerológiai elemzést a gasztroenterológusok, a hepatológusok és a fertőző betegségek szakemberei aktívan használják a vírusos hepatitis diagnosztizálására.

A szerológiai vérvizsgálat megfejtése lehetővé teszi a betegség stádiumának meghatározását, és megválaszolja azt a kérdést, hogy jelenleg mennyire szükséges a kórházi kezelés. Hogyan kell megfelelően felkészülni?

Felkészülés a tesztre

A szerológiai vérvizsgálatokat mind az állami, mind a kereskedelmi klinikákon végzik. Előnyben kell részesíteni a modern berendezésekkel és szakképzett személyzettel rendelkező laboratóriumot.

A vizsgálatokhoz biológiai minták lehetnek nyál és széklet, de a legtöbb esetben a páciens vénás vérét használják fel. A szerológiai vizsgálathoz a vért a cubitalis vénából laboratóriumban veszik. A teszt elvégzése előtt konzultáljon orvosával az eljárásra való felkészülésről.

A szerológiai vizsgálatra való felkészüléshez be kell tartania néhány egyszerű szabályt.

A vért nyugodt állapotban, étkezés előtt, azaz éhgyomorra adják. Ezt megelőzően ne vegyen részt egyéb vizsgálatokon, például röntgenen, ultrahangon stb.

Néhány héttel a véradás előtt kerülni kell az antibakteriális és néhány egyéb gyógyszer szedését. Bizonyos ajánlások ebben az esetben attól a betegségtől függenek, amelyre a vizsgálatot végzik. Például a hepatitis vizsgálata magában foglalja a zsíros ételek és az alkohol eltávolítását 48 órával az eljárás előtt.

Fluoreszcencia reakció

A szerológiai reakciók típusai között megtalálható a fluoreszcens reakció. Ez a technika olyan reagenst használ, amely megvilágítja az antitesteket a vérszérumban.

A közvetlen szerológiai reakció felállítása magában foglalja a specifikus antitestek fluoreszcens anyaggal való megjelölését. Ez a reakció a leggyorsabb, és egy szakaszban megy végbe.

Egy ilyen elemzés elvégzésének másik lehetőségét indirektnek vagy RNIF-nek nevezik. Két szakaszban hajtják végre. Az első lépésben az antitesteket nem jelölik fluoreszcens címkékkel, a másodikban pedig megfelelően jelölt antitesteket használnak az antigének és antitestek azonosítására. A ragyogás csak egy specifikus antitesthez való kötődés után következik be.

Mit mutat a szerológiai vérvizsgálat? A teljes eljárás eredményét egy speciális készülék értékeli, amely elemzi a sugárzás erősségét, és feltárja a vizsgált tárgy alakját és méretét. A fertőző betegségek kórokozóit eredménnyel mutatják ki, melynek megbízhatósága a patológia típusától és stádiumától függően %.

Kapcsolt immunszorbens vizsgálat

Az ilyen típusú szerológiai vizsgálatok egyedi, stabil reagenseket használnak. Úgy tűnik, hogy a megjelölt anyagok a kívánt antitestekhez tapadnak. Ennek eredményeként minőségi vagy mennyiségi eredményt kapunk.

Ha nem található kifejezett marker, az eredmény negatívnak minősül. Ha egy kvalitatív vizsgálat során a biológiai mintákban antitestek jelenlétét mutatják ki, akkor a teszt eredménye pozitívnak minősül. A sejtek mennyiségi meghatározásával az elemzés pontosabb eredményt ad.

Az elemzési mutatók (például az azonosított sejtek összege) elemzésével a szakember megállapítja, hogy a betegség kezdeti, akut stádiumban van-e, vagy a patológia krónikus formája súlyosbodott. A diagnózis felállításához az orvos nemcsak egy szerológiai vizsgálat adatait veszi figyelembe, hanem a betegség klinikai képét is.

A teszt jellemzői

Ennek az elemzésnek az elvégzése nem mindig képes 100% -os biztonságot nyújtani arra vonatkozóan, hogy egy bizonyos betegséget észleltek. Előfordulhat, hogy az eredmények nem egyértelműek, és más eljárásokra van szükség.

Például a brucellózis vizsgálata során a vérszérumot ellenőrzik az antigén nélküli önmegtartóztatás szempontjából. Ez jelentősen növeli a tesztelés megbízhatóságát. A brucellózisteszt pozitív vagy negatív lehet, és kételyeket is felvethet.

Ha megkérdőjelezhető eredményeket kap, amelyeknek nincs egyértelmű értelmezése, javasoljuk, hogy ismételje meg a tesztet. Emellett a brucellózis kimutatható vérkultúrával, csontvelő- és agy-gerincvelő-vizsgálattal.

A szerológiai vérvizsgálat előnyei

A szerológiai reakciókat alkalmazó diagnosztikai technikákat széles körben alkalmazzák a modern orvosi gyakorlatban. Ez különösen gyakran a vírusos és fertőző patológiák meghatározásakor történik.

Ugyanezeket a teszteket alkalmazzák a földrajzi szűrés és az orvosi vizsgálat során is, hogy megakadályozzák a fertőzés epidemiológiai terjedését.

A módszer előnyei a következők:

• Magas szintű bizalom.
• Gyors reakció és eredmény. Az RSC eredményei 24 órán belül ismertek. Különleges helyzetben, kórházi körülmények között az elemzés néhány órán belül elkészül.
• A betegség kialakulásának és a terápia hatékonyságának nyomon követése.
• Alacsony költség és elérhetőség a betegek számára.

A módszer hátrányai

A szerológiai vizsgálatoknak azonban vannak hátrányai is.

Ezek közé tartozik az a tény, hogy az elemzés során figyelembe kell venni a betegség lappangási idejét, hogy megbízhatóbb képet kapjunk.

Például az 1-es vagy 2-es típusú herpes simplex meghatározása csak a fertőzés után 14 nappal lehetséges. Az immunhiányos vírus jelenlétére vonatkozó elemzést 30 nappal, 90 nappal és hat hónappal a fertőzött személlyel való érintkezés után végezzük.

Az eredmények megbízhatóságát természetesen az emberi tényező is befolyásolhatja: a vérvételre való felkészülés szabályainak figyelmen kívül hagyása vagy a laboráns hibája a reakció végrehajtása során.

A statisztikák szerint az esetek 5% -ában hibás eredmény érhető el. Egy tapasztalt orvos a beteg vizsgálatakor, a klinikai kép tanulmányozása után a legtöbb esetben ki tudja számítani az elkövetett hibát.

Milyen vérvizsgálatokat vesznek szifiliszre: RW, RPGA, ELISA, VDRL, RPR, RIBT, a vizsgálati eredmények értelmezése

A szifilisz a Treponema pallidum spirocheta által okozott fertőző betegség, amely hajlamos a progresszív krónikus lefolyásra, és a klinikai tünetek egyértelműen periodizálódnak.

A szexuális terjedés túlsúlya a kontaktussal és a placentán át történő terjedéssel szemben a szexuális úton terjedő betegségek (STD-k, STI-k) közé sorolja ezt a betegséget. A fertőzés átvitelének ezen módszerei mellett különleges szerepet játszik a mesterséges út (a latin „artificio” szóból - mesterségesen létrehozott).

Gyógyintézetekre jellemző, főként kórházi környezetben valósul meg. A fertőzés vérátömlesztés, különféle sebészeti beavatkozások és invazív diagnosztikai módszerek során következik be.

Az adományozott vér karanténja ellenére továbbra is aktuális a szifilisz azonosításának problémája a donorokban a betegség különböző szakaszaiban.

Ezért a szifilisz diagnosztikai intézkedései szabványosítást, új érzékeny és informatív azonosítási módszerek bevezetését, valamint a hibák és a vizsgálati eredmények helytelen értelmezésének minimalizálását teszik szükségessé.

A laboratóriumi diagnosztikai módszerek osztályozása

A szifilisz diagnózisának van néhány jellemzője, és eltér más bakteriális fertőzések diagnózisától. A Treponema pallidum összetett szerkezete és antigén tulajdonságai hibákat okoznak a szerológiai reakciók eredményeinek értelmezésében.

A betegek 3 fő csoportja van, akiknek vérvizsgálatot ajánlanak fel szifiliszre:

1. 1 Lakossági csoportok szűrése és orvosi vizsgálata (beleértve a terhességet, a terhesgondozói regisztrációt, a foglalkoztatást és a kórlap nyilvántartását stb.).
2. 2 Szűrés kockázati csoportokban (védtelen szex szifilisszel fertőzött személlyel, erőszakos szexuális érintkezést követően, HIV-fertőzöttek stb.).
3. 3 A betegség tüneteit mutató személyek vagy szifilitikus fertőzésre gyanús személyek.

Valamennyi laboratóriumi módszer hagyományosan közvetlen és közvetett módszerre van osztva.

Közvetlen módszerek

1. 1 A Treponema pallidum azonosítása sötét mezőben (sötétmezős mikroszkóp).
2. 2 Kísérleti állatok fertőzése (tenyésztés laboratóriumi állatokban).
3. 3 PCR (polimeráz láncreakció).
4. 4 DNS próba vagy nukleinsav hibridizáció.

Közvetett módszerek

A szerológiai reakciók olyan laboratóriumi diagnosztikai módszerek, amelyek a Treponema pallidum antigének (rövidítve AG) elleni antitestek (rövidítve AT) kimutatásán alapulnak. Ezek elsődleges fontosságúak a diagnózis megerősítésében.

1. 1 Nem treponemális tesztek:
   • Wasserman reakció (WRS);
   • Mikroprecipitációs reakció (MR, RMP) és analógjai, amelyeket alább adunk meg;
   • Gyors plazma reagin teszt (RPR, RPR);
   • Red Toluidine Serum Test (TRUST);
   • Nem treponemális teszt a Nemi Betegség Kutató Laboratóriumban - VDRL.
2. 2 Treponemális teszt:
   • Treponema pallidum immobilizációs oldat – RIBT/RIT;
   • Immunfluoreszcens oldat - RIF, FTA (szérumhígítások RIF-10, RIF-200, RIF-abs);
   • A passzív hemagglutináció R-ciója (RPGA, TRPGA, TPHA);
   • Enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat (ELISA, EIA);
   • Immunblot vizsgálat.

1. ábra – A szifilisz szerodiagnózisának algoritmusa

Hisztomorfológiai módszerek

Ezek a módszerek a szifilitikus megnyilvánulások hisztomorfológiájának jellemzőinek azonosítására vezetnek. Figyelmet fordítanak a chancre szerkezetének finomságaira. A fertőzések szövettani differenciáldiagnózisa azonban nagyon nehéz. A hisztomorfológiát más laboratóriumi és klinikai vizsgálatokkal együtt alkalmazzák.

A Treponema pallidum sötét terepi mikroszkópja

Ez a módszer a treponema pallidum közvetlen kimutatásán alapul a vizsgált anyagban mikroszkóp és speciális eszközök segítségével (leggyakrabban eróziókból és fekélyekből származó váladékok, ritkábban agy-gerincvelői folyadék és egyéb szubsztrátok).

Az eróziókból, fekélyes hibákból szikrázással, kaparással, préseléssel váladékot nyerünk, majd az elkészített készítményt mikroszkóp alatt megvizsgáljuk.

A treponema pallidumot jellemzően chancre-ból, másodlagos friss, másodlagosan visszatérő szifilisz gócaiból, valamint a nyirokcsomók és a placenta pontjaiból mutatják ki.

Azon a jelenségen alapuló, hogy a kis részecskék sötét mezőben világítanak, amikor fénysugár éri őket (Tyndall-jelenség), a módszer tökéletesen lehetővé teszi a szifilisz kórokozójának megkülönböztetését más treponémáktól a morfológiai és a mozgásmódbeli különbségek alapján. baktérium.

A mikroszkópiához speciális, megfelelő optikai felbontású sötét mezős kondenzátort használnak. A drogot zúzott csepp módszerrel állítják elő (egy csepp anyagot tiszta, zsírmentes tárgylemezre helyeznek, és nagyon vékony fedőlemezzel fedik le).

Merítőolajat csepegtetünk a fedőüvegre. A cső elfordításával és a nagyítólencse elforgatásával beállítható a kívánt megvilágítás.

A mikroszkóp sötét mezejében vérsejteket, hámsejteket és a szifilisz kórokozóját észlelik. A Treponema pallidum spirálisnak tűnik, nagyon vékony, ezüstös színű, sima mozdulatokkal.

2. ábra - Sötétmezős mikroszkóp, mint a Treponema pallidum vizualizálásának módja a vizsgált anyagban. Illusztráció forrása - CDC

A Treponema pallidumot meg kell különböztetni más treponémáktól, beleértve a Tr-t is. refringens, amely az oropharynxban és a nemi szervek nyálkahártyáján található. Ez a baktérium kaotikus mozgást végez, széles és aszimmetrikus, meglehetősen durva fürtjei vannak. Ezenkívül a Treponema pallidum megkülönböztethető a Tr. Microdentium, Tr. Buccalis és Tr. vincenti.

A baktériumok sötét mezőben való megjelenítését néha fluoreszcens reakció egészíti ki. Ebből a célból fluoreszcens festékkel jelölt antitreponemális antitesteket adnak a natív anyaghoz. Ebben az esetben antigén-antitest (rövidítve AG-AT) komplex képződik, amely fluoreszcens mikroszkóppal történő vizsgálat tárgya.

Polimeráz láncreakciós (PCR) módszer

A Treponema pallidum dezoxiribonukleinsav (DNS) molekulájának kimutatására 1991-ben kifejlesztett PCR rendkívül érzékeny és specifikus, lehetővé téve a kórokozó DNS-fragmenseinek kimutatását.

Ez az elemzés a meghatározott paramétereknek megfelelő és a mintában jelenlévő, világos spirocheta DNS rövid szakaszainak másolására épül. Mindez mesterséges körülmények között (in vitro) történik. A reakciót egy eszközben hajtják végre - egy hőciklusban, amely biztosítja a hőmérsékleti ciklusok periodizálását. Lehűlés, majd a kémcsövek felmelegítése következik be 0,1˚C hibával.

A DNS-templátot 2 percig 92-98 °C hőmérsékleten melegítjük (a maximális hőmérsékletet akkor használjuk, ha a polimeráz hőstabil). Hevítéskor a DNS-szálak szétválnak a köztük lévő hidrogénkötések felbomlása miatt. Az illesztési lépésben a reakció hőmérsékletét csökkentjük, hogy a primer az egyszálú templáthoz kötődjön.

A lágyítás körülbelül 30 másodpercet vesz igénybe, ezalatt több száz nukleotid szintetizálódik. Az újonnan szintetizált molekulákat a polimeráz másolja, aminek eredményeként a dezoxiribonukleinsav specifikus fragmensei szaporodnak. A fragmensek ezt követő kimutatását agar-gélelektroforézissel végezzük.

A szifilisz PCR diagnosztikája még kísérleti jellegű, de indokolt veleszületett fertőzés kimutatásakor, összetett diagnosztikai esetekben, vagy ha a vizsgálati anyagban minimális a Treponema pallidum tartalom.

DNS hibridizáció

A DNS-hibridizációt in vitro hajtják végre, és két egyszálú DNS-molekula egy molekulává történő teljes vagy részleges összekapcsolásán alapul. A komplementer töredékek teljes megfeleltetése esetén könnyen megtörténik az összeolvadás. Ha a komplementer egyezés részleges, akkor a DNS-szálak kapcsolódása lassan megy végbe. A láncösszeolvadás ideje alapján felmérhető a komplementaritás mértéke.

Amikor a DNS-t pufferoldatban hevítik, a hidrogénkötéseket a komplementer nitrogénbázisok felszakítják, ami a DNS-láncok szétválását okozza. Ezután két denaturált dezoxiribonukleinsavból gyógyszert állítanak elő. Lehűléskor az egyszálú régiók renaturálódnak. Egy úgynevezett DNS-hibrid keletkezik.

A módszer lehetővé teszi az összeillesztési sebesség becslését és elemzését, figyelembe véve a DNS jellemzőit (hasonlóságait és különbségeit) a fajok között vagy egy fajon belül.

A DNS-próba alkalmazása magában foglalja a jelzett DNS-fragmens hibridizálását egy specifikus DNS-régióval a komplementer nukleotidszekvenciák azonosítása érdekében. A szonda jelölésére telítetlen atomok (kromoforok) vagy radioaktív izotópok csoportját használják.

A DNS-próbát nukleinsavak heterogén és homogén kimutatására használják. A szonda szerepe az, hogy azonosítsa azokat a területeket, ahol a cél-szonda egyesülése megtörtént. A homogén rendszerben történő detektálásnak megvan az az előnye, hogy lehetővé teszi a DNS-molekulák hibridizációjának valós időben történő nyomon követését.

A módszer lényege a DNS denaturáció és renaturáció (DNS láncok újraegyesítése). A nukleinsav és a DNS próba renaturációjának folyamata egy „hibrid” képződésével ér véget.

A specifikus nukleinsavszekvenciák hibridizálnak a DNS-próbával, és így kimutathatók, és lehetővé teszik a DNS mennyiségének becslését a vizsgált anyagban.

Laboratóriumi állatok fertőzése

A nyulak nagy érzékenysége a Treponema pallidumra (körülbelül 99,9%) lehetővé teszi a szifilitikus fertőzés diagnosztizálására való alkalmazásukat.

A nyulak fertőzését kutatóközpontokban végzik, és ez az „arany standard” az egyéb módszerek érzékenységének felmérésére.

Térjünk vissza a treponemális és nem treponemális tesztekhez, mivel ezeket használják leggyakrabban. Tekintsük ezek előnyeit és hátrányait, valamint az eredmények értelmezésének hibáit.

Nem treponemális vizsgálatok

Ezek a tesztek egy standardizált kardiolipin antigén elleni IgG és IgM antitestek meghatározására szolgálnak. Jelentős hátrányuk viszonylag alacsony specifitásuk.

Az alacsony költség és a könnyű kivitelezés lehetővé teszi, hogy ezeket a vizsgálatokat a lakosság körében az előzetes diagnózis felállításához és szűréséhez szükséges diagnosztikai vizsgálatok közé soroljuk.

Nem-treponemális teszteket kell elvégezni az orvosi lapra történő jelentkezéskor, állásra jelentkezéskor vagy egy várandós klinikán történő regisztrációkor.

1. 1 Minimális érzékenység az elsődleges szifilisz stádiumában – 70%;
2. 2 Minimális érzékenység a késői szifilisz stádiumában – 30%;
3. 3 Hamis negatív és álpozitív eredmények lehetősége;
4. 4 Az RSK teljesítésének munkaintenzitása.

1. 1 A tesztgyártás viszonylag alacsony költsége;
2. 2 Gyors választ kap;
3. 3 Felhasználásuk lehetősége szűrésre.

Hamis pozitív vagy gyengén pozitív minták vétele a következő esetekben lehetséges:

1. 1 A végrehajtási technológia megsértése az AG-AT komplexum blokkolásakor.
2. 2 A beteg autoimmun betegségben szenved (rheumatoid arthritis, reuma, scleroderma, szisztémás lupus erythematosus, sarcoidosis stb.).
3. 3 Rosszindulatú daganatok.
4. 4 Vírusos és bakteriális fertőzések.
5. 5 Endokrin betegségek (autoimmun pajzsmirigygyulladás, diabetes mellitus).
6. 6 Terhesség.
7. 7 Alkoholfogyasztás.
8. 8 Zsíros ételek fogyasztása.
9. 9 Szenilis kor.

Amint a listából látható, rengeteg oka van a helytelen eredménynek. Ezért nagyon óvatosnak kell lenni vele. Tekintsünk még két mintát az RSC-vel együtt. Ez egy mikroprecipitációs reakció és VDLR (annak módosítása).

Komplement rögzítési reakció (RSK, Wasserman, RW)

Ez egy olyan teszt, amely a komplement AG-AT komplexekhez való kötődési képességén alapul. A képződött komplexet a hemolitikus rendszer segítségével azonosítják. A kardiolipin antigén jelentősen növeli a teszt érzékenységét.

A Kolmer-reakció is érzékeny, ami abból áll, hogy különböző hőmérsékleti körülmények között hajtják végre. Így a Kolmer-reakció első fázisa 20 °C hőmérsékleten fél órán át, a második fázis 4-8 °C hőmérsékleten 20 órán keresztül megy végbe. Ez idő alatt komplement rögzítés történik.

Az RSC végrehajtása során drámaian pozitív eredményeket lehet elérni. Az ok valószínűleg az antitestek magas titere a hígítatlan szérumban. Ebben az esetben a mintákat csökkenő dózisokkal adják be.

A szifilisz stádiumainak megkülönböztetése és a szifilisz elleni kezelés hatékonyságának értékelése érdekében meghatározzák az AT mennyiségét a szérumban.

A minta pozitivitását keresztezéssel értékeljük, a szérum hígítását a Wasserman-, Kolmer- és Kann-reakciók is jelzik.

Mikroprecipitációs reakció

Mivel a fenti vizsgálatok elvégzésének bonyolultsága nagy, ezért a szifilisz szerodiagnózisának gyorsított módszerét, az úgynevezett expressz módszert - mikroprecipitációs reakciót (rövidítve MR, RMP) fejlesztették ki, amely lefedi a különböző populációs csoportok klinikai vizsgálatának széles körét. .

Kardiolipin antigénnel és segédanyagokkal végzik. Előnye a perifériás vér kutatási célú gyűjtése. Ez jelentősen felgyorsítja magát a technikát és a laboránsok munkáját is.

2. ábra - Mikroprecipitációs reakció (séma)

Az MR elvégzéséhez a beteg véréből plazma vagy inaktivált szérum szükséges (antitesteket tartalmaznak). Ezután a plazmát jelölt lyukakba helyezzük. Ezután egy csepp kardiolipin antigént adunk a vizsgált anyaghoz, összekeverjük és összerázzuk. Ennek eredményeként a fertőzött személy szérumában jellegzetes pelyhek jelennek meg, amelyek intenzitása változó.

Ez egy minőségi minta. Kvantitatív értékeléshez 10 hígítású szérumot használunk, amelyeket 10 lyukba helyezünk megfelelő jelöléssel. A kvalitatív MR-nél a választ keresztek (plusz) vagy mínusz formájában jelzik, a kvantitatív MR-nél pedig az antitest-titert (1:2, 1:4 stb.).

A pelyhek jelenléte pozitív vagy gyengén pozitív válasznak minősül. A pelyhesedés megjelenése betegség hiányában is lehetséges, ezért a kapott eredmény végső értékelése kontrollvizsgálat vagy egyéb reakciók (RIBT, RIF, ELISA, RPGA) után történik.

Az Egészségügyi Világszervezet által javasolt módszer a lipoid antigénnel (AG) történő reakció leállítására méltán tekinthető a legjobbnak a többi standard nem treponemális teszt közül. Az USA-ban, Georgiában, a szexuális úton terjedő betegségek laboratóriumában (Venereal Diseases Research Laboratories) fejlesztették ki.

Az intézmény rövidítése szolgált a minta elnevezéseként - VDRL. A VDRL az MR egy módosítása. A szifiliszben szenvedő beteg szérumát inaktiválják, és tárgylemezre helyezik. A felhasznált antigén változó százalékban kardiolipint, koleszterint és lecitint tartalmaz. A válasz szinte azonnal regisztrálásra kerül.

A szérumban antitestek jelenlétében határozott flokkuláció lép fel. A szérum 4 hét fertőzés után válik reaktívvá. Az antitestek mennyiségének meghatározásához a szérumot exponenciálisan előhígítják.

1. 1 viszonylag nagy érzékenység;
2. 2 viszonylag magas specificitás;
3. 3 egyszerű végrehajtás;
4. 4 alacsony költségű reagensek;
5. 5 gyors választ kapok.

A VDRL hátránya a viszonylag magas hamis pozitív arány.

Okai a fent felsorolt ​​betegségek.

A treponemális teszteket specifikus Treponema pallidum antigénekkel végezzük. Ezek szükségesek és kötelezőek a végső diagnózis felállításához. Ezek az immunfluoreszcens reakció (RIF), az indirekt hemagglutinációs reakció (IPHA), az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat (ELISA) stb.

A nem-treponemális teszt (RPR, MP, VDRL) pozitív eredménye után mindig treponemális teszteket kell végezni (általában kombináció - RPGA, ELISA, RIF).

A treponemális tesztek elvégzése bonyolultabb, mint a gyorstesztek, és több pénzt igényelnek.

Ezt a reakciót (rövidítve RIF) használják a szifilisz diagnosztizálására, beleértve a látens formákat is, valamint a pozitív és hamis pozitív minták kétszeri ellenőrzésére.

A RIF a jelölt antitestek izzásán alapul, amikor antigén-antitest komplexszel kombinálják kvarclámpa alatt. A módszert a 60-as években kezdték használni, és az egyszerű kivitelezés és a magas specifitás (amely kissé rosszabb, mint a RIBT) különböztette meg.

Számos módosítása van: RIF-10, RIF-200 és RIF-abs.

A RIF 10-szeres hígítás esetén a legérzékenyebb, a többi pedig specifikusabb. A RIF két fázisban történik. A páciens vérszérumát hozzáadják az AG-hoz. AG-AT komplex képződik, amelyet a következő fázisban vizsgálunk. Ezután a fluorokrómmal jelölt komplexet mikroszkóppal azonosítják. Ha nem észlelünk fényt, ez azt jelzi, hogy a vérszérumban nincsenek specifikus antitestek.

Az összes hígítás közül a RIF-200 a legértékesebb. A módszer a szifilisz különféle formáinak, különösen a látens szifilisz diagnosztizálására és a pozitív minták újraellenőrzésére szolgál.

A Treponema pallidum (rövidítve RIBT, RIT) immobilizációs reakciója a komplex szerológiai vizsgálatok egyike, amely jelentős erőfeszítést és anyagi költségeket igényel. A RIBT-t egyre ritkábban használják, de jelentősége továbbra is fennáll a látens szifilisz diagnózisában.

Nagy jelentősége van a hamis pozitív eredmények felismerésében terhes nőknél, és a baktériumok immobilizinek – késői antitestek – jelenlétében történő immobilizálásán alapul.

Az eredményt az immobilizált treponémek százalékos aránya (%) alapján értékeljük egy speciális táblázat segítségével:

1. 1 0-tól 20-ig - negatív teszt.
2. 2 21-től 50-ig - gyengén pozitív teszt.
3. 3 50 további pozitív reakciótól.

A RIBT használatakor álpozitív eredmények is előfordulhatnak. Így helytelen válasz lehetséges a trópusi trepanematázokkal, valamint tuberkulózissal, májcirrózissal, szarkoidózissal és idős betegekkel való fertőzés során.

Ezt a szifilisz vérvizsgálatát passzív hemagglutinációs tesztnek nevezik (rövidítve: RPHA, THRHA vérvizsgálat).

Az RPHA antigénjét Treponema pallidum fragmentumokkal bevont (fertőzött nyulakból nyert (lásd 4. ábra)) birka vörösvértestekből állítják elő. Az elemzéshez a páciens vénás vérét (plazmáját vagy inaktivált szérumát) használják.

Ha egy szifiliszben szenvedő beteg szérumához antigént adnak, AG-AT komplex képződik, amely a vörösvértestek agglutinációjához vezet. az agglutinációt laboratóriumi technikus szubjektíven határozza meg.

3. ábra – Az RPHA (passzív hemagglutinációs reakció) sémája

A mintát akkor értékeljük pozitívnak, ha egyenletes rózsaszínű agglutinátumok jelennek meg. A csapadék vörös elszíneződése a vörösvértestek kicsapódását jelzi. Az RPHA nagyon érzékeny és nagyon specifikus.

Mikrohemagglutinációs reakció

Ez az RPGA egyszerűsített változata. Abban különbözik a fent leírt teszttől, hogy kevesebb antigént, hígítót és szérumot igényel a reakció végrehajtásához. 4 órával a szérum inkubálása után a minta értékelhető. A szifilisz szűrésére és tömeges vizsgálatára használják.

Kapcsolt immunszorbens vizsgálat

Az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat (rövidítve ELISA) egy specifikus antigén-antitest reakción alapul. A biológiai anyagokat (beteg vérszéruma, agy-gerincvelői folyadék) olyan lyukakba vezetik, amelyek szilárd felületén a treponema pallidum antigéneket rögzítik. A tesztanyagot inkubáljuk, majd az antigénekhez nem kötődő antitesteket lemossuk (lásd 5. ábra).

A kapott komplex azonosítása a fermentációs szakaszban történik az enzimmel jelölt immunszérum felhasználásával. Egy kémiai reakció során az enzim színezi a keletkező komplexeket. A festődés intenzitása a páciens vérében lévő specifikus antitestek mennyiségétől függ, és spektrofotométerrel rögzítik.

4. ábra – Az ELISA (enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat) sémája

Az ELISA érzékenysége több mint 95%. A módszert automatizált módban használják elektív populációs csoportok vizsgálatára: donorok, terhes nők és mások, a pozitív és hamis pozitív nem-treponemális tesztek diagnózisának tisztázására.

Immunblot vizsgálat

Az immunoblot nagyon érzékeny módszer, az egyszerű ELISA módosulata. A reakció a Treponema pallidum antigének elválasztásával végzett elektroforézisen alapul.

Az elválasztott immundeterminánsokat nitrocellulóz papírra visszük, és ELISA-val előhívjuk. Ezután a szérumot inkubáljuk, és a meg nem kötött antitesteket lemossuk. A kapott anyagot enzimmel jelölt immunglobulinokkal (IgM vagy IgG) kezeljük.

A szifilisz laboratóriumi diagnózisának eredményeinek klinikai értékelése

Az alábbi 1. táblázatban megadtuk a lehetséges vizsgálati eredményeket és azok értelmezését. Amint a táblázatból látható, a megfejtés során elsődleges fontosságú a tesztek átfogó értékelése.

1. táblázat - A szerológiai reakciók eredményeinek értelmezése (vérvizsgálatok szifiliszre). Megtekintéshez kattintson a táblázatra

A teszt reakcióképességét „keresztekkel” is értékelik:

1. 1 A maximális választ (élesen pozitív teszt) 4 kereszt jelzi.
2. 2 A pozitív tesztet 3 kereszt jelzi.
3. 3 A gyengén pozitív reakciót két kereszt jelzi.
4. 4 Egy kereszt kétes és negatív eredményt jelöl.
5. 5 A nemleges választ mínuszjellel jelöljük.

A szifilisz laboratóriumi diagnosztikájának optimalizálásának problémája a mai napig nem veszítette el jelentőségét. A modern diagnosztikai módszerek a tudósok azon vágya ellenére, hogy a diagnosztikát a lehető legmagasabb érzékenységi és specifitási szintre hozzák, kontrollvizsgálatot és egyéni megközelítést igényelnek.

A szifilitikus fertőzés egyik jellemzője a szerorezisztencia jelensége, amely soha nem kapott tudományos magyarázatot. A diagnózis a beteg teljes körű vizsgálata után történik epidemiológiai, klinikai és laboratóriumi módszerekkel.

Az orvostudomány gazdasági és technikai fejlődésének hátterében a szifilisz diagnosztizálására vonatkozó új kritériumok kidolgozása terén is haladás figyelhető meg. Mindez lehetővé teszi a betegek gyors, sikeres és pontos kezelését.

Szerológiai kutatás (tesztek)— a páciens biológiai anyagában lévő antitestek vagy antigének kimutatásán alapuló laboratóriumi kutatási módszerek. Leggyakrabban vért használnak az elemzéshez, ritkábban - vizeletet, nyálat, gennyes váladékot vagy biopszia során vett szövetmintákat.

Alkalmazási terület

• A vércsoport meghatározása.
• Specifikus tumorfehérjék azonosítása - tumormarkerek (például petefészek-, prosztata-, húgyhólyag-, gyomorrák stb. gyanúja esetén).
• Vírusos, bakteriális, gombás, protozoonfertőzések (HIV, szifilisz, toxoplazmózis, chlamydia, rubeola, herpesz, helminthiasis, kullancsencephalitis stb.) diagnosztizálása.
• A vizsgált bioanyagban kis koncentrációban (10-10 g/l alatt) lévő hormonok, enzimek és gyógyszerek meghatározása.

A módszer lényege a szerológiai vizsgálatok

A szerológiai tesztek eltérnek az alkalmazott technikától, de mindegyik antigének (idegen vegyületek) és a megfelelő antitestek kölcsönhatásának eredménye. A tanulmány két egymást követő szakaszból áll. Az első fázist az antigének és antitestek közötti kölcsönhatás jellemzi immunkomplexek képződésével (pozitív reakció). A második fázisban külső jelek jelennek meg, amelyek megerősítik ugyanezen komplexek jelenlétét (a reakció típusától függően ez lehet a vizsgálati oldat zavarosodása, színváltozása, pelyhek elvesztése stb.). A látható fizikai jelenségek hiánya negatív vizsgálati eredménynek minősül.

Szerológiai vizsgálatok előkészítése

A kutatás típusától függ. Egy szakorvosnak tájékoztatnia kell Önt egy adott vizsgálat elvégzésének sajátosságairól, amikor bejelentkezik az eljárásra.

A szükséges szerológiai vizsgálatot a Spectra klinikán tudja elvégezni. Az elemzéseket a főváros legjobb, európai szabványok szerint működő laboratóriumaitól rendeljük meg, ami garantálja a gyors és megbízható eredményeket. Orvosaink segítenek megfejteni a következtetést, és javaslatokat tesznek a további diagnózishoz.