Biztosan mindenki találkozott már életében legalább egyszer vércsoport-vizsgálattal. Mai cikkünk témája arról szól, hogy milyen módszerek léteznek a vércsoport meghatározására, és ezek közül melyikkel a legjobb egy adott fajhoz való tartozás vizsgálatára.
Miért kell vércsoport-vizsgálatot végezni?
A modern hematológiában vércsoporton a vörösvértestek felszínén elhelyezkedő, specifikus antigének készletét értjük, amely meghatározza azok specifitását. Rengeteg ilyen antigén létezik (általában mindenféle antigént tartalmazó csoporttáblázatot használnak), azonban a vér ABO-rendszer és az Rh-faktor szerinti osztályozását világszerte elismerik.
A vércsoportot minden műtétre való felkészülés során meg kell határozni. A vércsoport-meghatározás kötelező kontingense a katonaság, a rendvédelmi tisztek és a belügyi tisztek. Erre az intézkedésre azért van szükség, mert sürgős (életveszélyes) állapot kialakulása esetén szükség lehet transzfúzióra, amikor nincs idő az elemzés elvégzésére és a donorral való kompatibilitás tesztelésére.
Vércsoportok meghatározása standard módszerekkel
Számos különböző technika létezik, de a klinikai laboratóriumokban leggyakrabban a standard szérumtechnikát alkalmazzák. Hogyan határozzuk meg a vércsoportot standard szérummal?
Ezt a módszert az AB0 rendszer antigénjeinek meghatározására használják. A standard izohemagglutináló szérum specifikus antitesteket tartalmaz a vörösvértestek felszíni molekulái ellen. Egy antigén jelenlétében, amely az antitestek hatásának van kitéve, antigén-antitest komplex képződik, amely immunreakciók kaszkádjának elindítását idézi elő. Eredménye a vörösvértestek agglutinációja az agglutináció jellege alapján, következtetés vonható le a minta adott vércsoportba való besorolására.
A standard szérumokat donorvérből egy bizonyos rendszer szerint állítják elő - a plazmát a benne lévő antitestekkel izolálják, majd hígítják. A hígítást izotóniás nátrium-klorid-oldattal végezzük.
A hígítást a következőképpen végezzük: adjunk 1 ml plazmát egy kémcsőbe 1 ml 0,9 százalékos konyhasó-oldattal, és alaposan keverjük össze az oldatot. Ezután a kapott plazmaoldatból pipettával 1 ml-t veszünk, és egy izotóniás oldatot tartalmazó második kémcsőbe adjuk. Így 1:256 plazmahígítás érhető el. Más hígítások használata diagnosztikai hibákhoz vezethet.
A kutatási technika a következő - a vércsoport meghatározásához egy speciális tányérra minden szérumból egy cseppet (teljes térfogat kb. 0,1 ml) helyezünk a megfelelő jelzéssel ellátott területre (két mintából származó szérumot használunk, amelyek közül az egyik a kontroll, a második pedig a vizsgálathoz használható). Ezt követően a tesztmintát (0,01 ml) minden csepp szérum közelébe helyezzük, majd az egyes diagnosztikai típusokkal külön-külön összekeverjük.
Egy idő után (átlagosan körülbelül 5 perc) az eredményeket elemzik a bekövetkezett reakció jellegének leírásával:
- ha agglutináció lép fel a vizsgált mintában, a teszt pozitív;
- ha nincs agglutináció, akkor a reakció negatív.
Egyszerűen fogalmazva, az agglutináció jelenléte azt jelzi, hogy a vér tartalmazza a szükséges agglutinogén készletet, és ha ez előfordul, akkor a vér abba a csoportba tartozik, amelyhez a szérum antitesteket tartalmaz. A kapott eredmények alapján egy táblázat vagy diagram készül, amely vizuálisan megjeleníti az eredményeket.
Keresztreakciós módszer
Ez a technika az agglutinogének meghatározásából áll kollikonok vagy standard szérumok felhasználásával, az agglutininok párhuzamos kimutatásával standard eritrociták segítségével.
A módszertan gyakorlatilag nem különbözik a vércsoport szérum segítségével történő meghatározásától, azonban van néhány kiegészítés.
Egy kis csepp standard vörösvértestet adunk az alkalmazott szérum alatti lemezre. Ezt követően a páciens vérét tartalmazó kémcsőből pipettával kivonják a plazmát, amelyet a standard vörösvértestekhez, az alján lévő vörösvértesteket pedig a standard szérumhoz adják.
A standard szérummódszerhez hasonlóan a kapott eredményeket néhány perccel a reakció megkezdése után értékeljük. A standard szérumokban agglutináció jelenlétében az AB0 rendszer agglutininjeinek, a plazma és a standard eritrociták reakciójának kialakulásakor pedig az agglutinogének jelenlétét ítélik meg.
A keresztezési módszer azért vált széles körben elterjedtté, mert megakadályozza a nagyobb diagnosztikai hibákat a standard módszerekkel végzett vér meghatározásánál.
A csoport meghatározása zoliklonokkal
A koliklonokat akkor alkalmazzák, ha az AB0 rendszer antigénjeit standard szérummal nem lehet meghatározni.
A tsoliklonok specifikus antitestek, amelyeket élő szervezetben történő hibridizálással nyernek (általában egerekből B-limfociták módosításával nyert tsoliklonokat használnak). Jellemző tulajdonságuk az immunreakció kialakulása a coliclone és az eritrocita membrán felszínén található A vagy B antigén között.
A monoklonális antitestek alkalmazásának algoritmusa a következő: egy nagy csepp tsoliclon oldatot kell a tablettára felvinni (meg kell jelölni, hogy hol és mely tsoliclonok találhatók). Ezt követően egy csepp tesztvért adunk a szérumhoz, és néhány perc múlva értékeljük az eredményeket.
A vizsgálatot speciálisan kialakított körülmények között kell elvégezni a hőmérsékletnek és a páratartalomnak megfelelően (az elemzés elvégzése előtt meg kell győződnie a zoliklonok alkalmasságáról).
A teszt akkor tekinthető pozitívnak, ha a vizsgált mintában vörösvértestek agglutinációja történt (azaz az antitest és az antigén között reakció ment végbe). Ha két cseppben pozitív eredményt észlelünk, a mintát a IV. csoportba tartozónak ítéljük. Ha éppen ellenkezőleg, a reakció egyetlen mintában sem következett be, akkor a vércsoport feltehetően I. A vér meghatározásánál ezzel a módszerrel ritkán hibáznak.
Express módszer "Erythrotest"
Annak ellenére, hogy a vércsoport meghatározására általánosan elfogadott módszerek széles körben elterjedtek, jelenleg az expressz vércsoport-meghatározási módszereket széles körben bevezetik az orvosi és laboratóriumi gyakorlatba. Az egyik az „Erythrotest”.
Az „Erythrotest-Groupcard” vércsoport meghatározására szolgáló készlet a következő összetevőket tartalmazza:
- egy univerzális tabletta öt lyukkal az AB0 rendszer szerinti csoport és annak Rh-hovatartozása szerinti meghatározásához;
- súroló a minta beszerzéséhez kutatáshoz;
- tiszta pipetta, amellyel egy sor oldatot készítenek;
- minták keverésére használt üvegrudak.
A fenti berendezések mindegyike szükséges a helyes expressz diagnosztikához.
Ez a technika lehetővé teszi a vércsoport és az Rh-faktor meghatározását bármilyen körülmények között, különösen akkor, ha nem lehetséges a klasszikus módszerek alkalmazása.
Az elemzés folyamata az Erythrotest módszerrel
A tabletta üregei a felületi antigénekhez (tsoliklone anti-A, anti-B, anti-AB), valamint az Rh-faktor öröklődését meghatározó fő antigénhez (tsoliklon anti-D) szoliklonokat tartalmaznak. Az ötödik lyuk egy kontrollreagenst tartalmaz, amely lehetővé teszi a hibák megelőzését és a csoporttagság elemzésének helyes elvégzését.
A kapott eredmények értékeléséhez egy speciális táblázatot használnak, amely felsorolja az összes lehetséges kutatási eredményt.
Napjainkban az orvostudomány nagy magasságokat ért el. Az orvosok képesek hosszú műtéteket végrehajtani, és megmenteni az embereket a túlélés szempontjából a legreménytelenebbnek tűnő helyzetektől is. Ilyen esetekben azonban szembe kell nézni a vérátömlesztés szükségességének problémájával. Hosszú ideig ez nem volt megvalósítható, mivel a betegek nagyon gyorsan meghaltak. De ezt a kérdést megoldották a vércsoportok fogalmának felfedezése, vagy inkább az antigének kimutatása az eritrocitákon, és viszont a vérplazmában lévő antitestek.
Vércsoport meghatározása standard szérummal
Mi a vércsoport
A huszadik század elején K. Landsteiner ausztrál orvos és részmunkaidős tudós felfedezte antigének és antitestek jelenlétét a vérben. Az antigének a vörösvértestek felszínén találhatók. 2 fajta van belőlük. Az egyszerűség kedvéért a biológusok A-nak és B-nek nevezték őket. Az antitesteket viszont a vérplazma tartalmazza, és α-nak és β-nak nevezik. Ha A-t α-hoz, B-t β-hoz kötjük, akkor megindul a véralvadási folyamat. Ezt a reakciót hemagglutinációnak nevezik.
Így a rendelkezésre álló antigének és antitestek készleteiből 4 típusú vért lehet létrehozni, amelyeket az alábbi táblázat mutat be:
Vércsoportok és karakter
Fontos! Attól függően, hogy milyen típusú donor vért biztosítanak transzfúzióhoz, a beteg vére vagy megalvad, vagy nem. Az első eset végzetes.
Szérum a reakcióhoz
Jelenleg meglehetősen sok módszer létezik a vércsoport meghatározására. De legtöbbjüket nagy laboratóriumokban történő elemzésre tervezték. Azonban még ha egy kis faluban vagy olyan helyen tartózkodik, ahol nem lehet kapcsolatba lépni ilyen intézményekkel, a vércsoportszám azonosításának lehetősége továbbra is fennáll.
A vércsoport meghatározását négy speciális standard szérum segítségével végzik, amelyek emberi vérből készülnek. 2-5 ml-es palackokban vagy ampullákban kaphatók, és különböző vércsoportoknak felelnek meg:
- 0. Fehér címkével és átlátszó színű.
- A. Kék folyadék. Két kék csíkot helyeznek a palackra.
- B. Halvány rózsaszín folyadék. Az üvegen három azonos színű csík található.
- AB. Sárga folyadék. Az üvegen 4 azonos színű csík található.
Szérumok vércsoport-vizsgálathoz
Fontos! Valójában ezek a reagensek színtelenek a gyártás során. Speciálisan festettek, hogy használatuk során ne lehessen őket összetéveszteni.
A címkéken is szerepel:
- titer;
- Gyártás dátuma;
- minőségmegőrzési dátum;
- gyártói információk;
- sorozatszám.
Hogyan határozzák meg a vércsoportot?
A vércsoport meghatározásához a következőkre lesz szüksége:
- lapos lemez 8 bemélyedéssel;
- üvegrudak vagy pipetták - 8 darab;
- 2 különböző sorozatú szérumkészlet a hibák lehetőségének kiküszöbölésére;
- rendes vagy homokóra.
Eszközök a vér meghatározásához standard szérum használatával
A szérumokat 2 sorban egy lapos tányérra helyezzük, majd üvegrudakat veszünk. Segítségükkel a vizsgált vér bekerül a sorokba. Ezekkel a pálcákkal keveri, majd a tányér ringatózni kezd. Szerencsés esetben a folyamat 10-30 másodperc alatt nyomon követhető, de jobb, ha ezt legfeljebb 5 percig csinálja, hogy elkerülje a lassú reakció lehetőségét. Ezután a kapott eredményeket tanulmányozzák és megfejtik.
Figyelem! Mindenekelőtt figyelni kell a bögrékre, amelyekbe a II-es és III-as vércsoportú szérumot öntötték. Érdekes a kis pelyhek jelenléte, amelyek az agglutináció - a vörösvérsejtek csomósodása - eredményeként jelennek meg.
- Ha sem a II-ben, sem a III-ban nincsenek pelyhek, és egy további ellenőrzés során sem az I-ben, sem a IV-ben nem koagulált semmi, akkor van első vércsoport.
- Ha ennek eredményeként a II. csoportú szérum kivételével mindenhol véralvadás figyelhető meg, akkor a vizsgált vér a második csoportba tartozik.
- Ha a III. csoportú szérum kivételével minden mintában véralvadás figyelhető meg, akkor a vizsgált vér az azonos nevű csoportba tartozik.
- Ha a IV. csoportú szérum kivételével minden mintában véralvadás történt, akkor az azonos nevű vércsoportot elemeztük.
Vércsoport meghatározása
Fontos, hogy a vércsoportot csak 2-es és 3-as vércsoportú szérum alapján határozzuk meg! A módszer lényegéből azonban megállapítható, hogy az emberi tényezőnek nagy befolyása van. Emiatt az I. és IV. vércsoportú szérumokat kiegészítő vizsgálatként használják.
Az eljárás után a használt edényeket meleg vízzel alaposan le kell öblíteni és meg kell szárítani. Ezt követően további kutatásokhoz lehet felhasználni.
Pontatlan eredmények és okaik
Néha előfordul, hogy az összetapadt vörösvértestek rögök nem nagyon láthatók. A tesztelés során gyakran adagolható izotóniás nátrium-klorid oldat. Kiküszöböli a hamis agglutináció lehetőségét, amitől a nem a koagulációs folyamatból származó pelyhek visszamorzsolódnak.
Fontos! Ha az analízis eredménye nem nagyon jól látható, akkor újra kell csinálni, és mikroszkóppal vizsgálni kell a finom agglutinációt.
Egyértelműen azonosított eredmény esetén azonnal pontosan meg tudja mondani a betegnek a vércsoportját. Ellenkező esetben más elemzési módszerekhez kell fordulnia.
Nem szabad megfeledkeznünk a hibák lehetőségéről, amelyek általában a következő okok miatt fordulnak elő:
- lejárt vagy gyenge tejsavó használata;
- túl sok tesztvér használata a szérumtérfogathoz képest;
- a reakció sokkal tovább tart, mint a szabályozás előírja;
- a környezeti hőmérséklet nem felel meg a normálisnak, ami a vörösvértestek hideg agglutinációját eredményezi.
A vércsoport-meghatározási hibák leggyakoribb okai
Ezenkívül érdemes megjegyezni, hogy a szárítási folyamat során szemcsés területek képződhetnek a szérum és a tesztvér keverékének szélei mentén, amelyek nem szolgálhatnak reakció indikátoraiként.
Az eredmény felhasználása a gyakorlatban
Amint már említettük, a vércsoport meghatározását a vérátömlesztés során bekövetkező halál kizárása érdekében végzik. Ideális esetben a vért kapó beteg – a recipiens – a sajátjával azonos típusú vérátömlesztésben részesül. Ez azonban nem mindig van így. Már csak azért is, mert az első vércsoporttal rendelkezők túlnyomó része 50%. Ugyanakkor univerzális donorok, mivel hiányoznak belőlük a véralvadási folyamatot serkentő agglutinogének.
Figyelem! Ami a IV-es vércsoportú betegeket illeti, univerzális recipienseknek nevezhetők, mivel szervezetük bármely csoport vérét képes befogadni. Ugyanakkor vérüket nem lehet átjuttatni egy másik csoport képviselőinek.
A donorok és a recipiensek kompatibilitásának szemléltetésére egy táblázatot mutatunk be:
Vércsoport-kompatibilitás
A modern világban a vércsoport ismerete létfontosságú. Az orvosok szempontjából ettől függ majd a betegek túlélési aránya. A hétköznapi emberek szemszögéből ez egy esély arra, hogy vészhelyzetben megmentsék az életüket. Ebben a tekintetben nem lesz felesleges tudnia a vércsoportját, és ha lehetséges, írja be az útlevelébe vagy más okmányaiba, mivel bármikor veszélybe kerülhet az egészség és az élet.
Videó - Vércsoport meghatározás
Videó - A vércsoport és az Rh-faktor meghatározása
Napjainkban az orvostudomány nagy magasságokat ért el. Az orvosok képesek hosszú műtéteket végrehajtani, és megmenteni az embereket a túlélés szempontjából a legreménytelenebbnek tűnő helyzetektől is. Ilyen esetekben azonban szembe kell nézni a vérátömlesztés szükségességének problémájával. Hosszú ideig ez nem volt megvalósítható, mivel a betegek nagyon gyorsan meghaltak. De ezt a kérdést megoldották a vércsoportok fogalmának felfedezése, vagy inkább az antigének kimutatása az eritrocitákon, és viszont a vérplazmában lévő antitestek.
A huszadik század elején K. Landsteiner ausztrál orvos és részmunkaidős tudós felfedezte antigének és antitestek jelenlétét a vérben. Az antigének a vörösvértestek felszínén találhatók. 2 fajta van belőlük. Az egyszerűség kedvéért a biológusok A-nak és B-nek nevezték őket. Az antitesteket viszont a vérplazma tartalmazza, és α-nak és β-nak nevezik. Ha A-t α-hoz, B-t β-hoz kötjük, akkor megindul a véralvadási folyamat. Ezt a reakciót hemagglutinációnak nevezik.
Így a rendelkezésre álló antigének és antitestek készleteiből 4 típusú vért lehet létrehozni, amelyeket az alábbi táblázat mutat be:
| Csoportszám | Világ megjelölés | Antigének | Antitestek |
|---|---|---|---|
| én | 0 | Egyik sem | α és β |
| II | A | A | β |
| III | B | B | α |
| IV | AB | A és B | Egyik sem |
Fontos! Attól függően, hogy milyen típusú donor vért biztosítanak transzfúzióhoz, a beteg vére vagy megalvad, vagy nem. Az első eset végzetes.
Szérum a reakcióhoz
Jelenleg meglehetősen sok módszer létezik a vércsoport meghatározására. De legtöbbjüket nagy laboratóriumokban történő elemzésre tervezték. Azonban még ha egy kis faluban vagy olyan helyen tartózkodik, ahol nem lehet kapcsolatba lépni ilyen intézményekkel, a vércsoportszám azonosításának lehetősége továbbra is fennáll.
A vércsoport meghatározását négy speciális standard szérum segítségével végzik, amelyek emberi vérből készülnek. 2-5 ml-es palackokban vagy ampullákban kaphatók, és különböző vércsoportoknak felelnek meg:
- 0. Fehér címkével és átlátszó színű.
- A. Kék folyadék. Két kék csíkot helyeznek a palackra.
- B. Halvány rózsaszín folyadék. Az üvegen három azonos színű csík található.
- AB. Sárga folyadék. Az üvegen 4 azonos színű csík található.
Fontos! Valójában ezek a reagensek színtelenek a gyártás során. Speciálisan festettek, hogy használatuk során ne lehessen őket összetéveszteni.
A címkéken is szerepel:
- titer;
- Gyártás dátuma;
- minőségmegőrzési dátum;
- gyártói információk;
- sorozatszám.
Hogyan határozzák meg a vércsoportot?
A vércsoport meghatározásához a következőkre lesz szüksége:
- lapos lemez 8 bemélyedéssel;
- üvegrudak vagy pipetták - 8 darab;
- 2 különböző sorozatú szérumkészlet a hibák lehetőségének kiküszöbölésére;
- rendes vagy homokóra.
A szérumokat 2 sorban egy lapos tányérra helyezzük, majd üvegrudakat veszünk. Segítségükkel a vizsgált vér bekerül a sorokba. Ezekkel a pálcákkal keveri, majd a tányér ringatózni kezd. Szerencsés esetben a folyamat 10-30 másodperc alatt nyomon követhető, de jobb, ha ezt legfeljebb 5 percig csinálja, hogy elkerülje a lassú reakció lehetőségét. Ezután a kapott eredményeket tanulmányozzák és megfejtik.
Figyelem! Mindenekelőtt figyelni kell a bögrékre, amelyekbe a II-es és III-as vércsoportú szérumot öntötték. Érdekes a kis pelyhek jelenléte, amelyek az agglutináció - a vörösvérsejtek csomósodása - eredményeként jelennek meg.
- Ha sem a II-ben, sem a III-ban nincsenek pelyhek, és egy további ellenőrzés során sem az I-ben, sem a IV-ben nem koagulált semmi, akkor van első vércsoport.
- Ha ennek eredményeként a II. csoportú szérum kivételével mindenhol véralvadás figyelhető meg, akkor a vizsgált vér a második csoportba tartozik.
- Ha a III. csoportú szérum kivételével minden mintában véralvadás figyelhető meg, akkor a vizsgált vér az azonos nevű csoportba tartozik.
- Ha a IV. csoportú szérum kivételével minden mintában véralvadás történt, akkor az azonos nevű vércsoportot elemeztük.
Fontos! Szigorúan véve a vércsoportot úgy lehet meghatározni, hogy csak 2-es és 3-as vércsoportú szérumok vannak. A módszer lényegéből azonban megállapítható, hogy az emberi tényezőnek nagy befolyása van. Emiatt az I. és IV. vércsoportú szérumokat kiegészítő vizsgálatként használják.
Az eljárás után a használt edényeket meleg vízzel alaposan le kell öblíteni és meg kell szárítani. Ezt követően további kutatásokhoz lehet felhasználni.
Pontatlan eredmények és okaik
Néha előfordul, hogy az összetapadt vörösvértestek rögök nem nagyon láthatók. A tesztelés során gyakran adagolható izotóniás nátrium-klorid oldat. Kiküszöböli a hamis agglutináció lehetőségét, amitől a nem a koagulációs folyamatból származó pelyhek visszamorzsolódnak.
Fontos! Ha az analízis eredménye nem nagyon jól látható, akkor újra kell csinálni, és mikroszkóppal vizsgálni kell a finom agglutinációt.
Egyértelműen azonosított eredmény esetén azonnal pontosan meg tudja mondani a betegnek a vércsoportját. Ellenkező esetben más elemzési módszerekhez kell fordulnia.
Nem szabad megfeledkeznünk a hibák lehetőségéről, amelyek általában a következő okok miatt fordulnak elő:
- lejárt vagy gyenge tejsavó használata;
- túl sok tesztvér használata a szérumtérfogathoz képest;
- a reakció sokkal tovább tart, mint a szabályozás előírja;
- a környezeti hőmérséklet nem felel meg a normálisnak, ami a vörösvértestek hideg agglutinációját eredményezi.
Ezenkívül érdemes megjegyezni, hogy a szárítási folyamat során szemcsés területek képződhetnek a szérum és a tesztvér keverékének szélei mentén, amelyek nem szolgálhatnak reakció indikátoraiként.
Az eredmény felhasználása a gyakorlatban
Amint már említettük, a vércsoport meghatározását a vérátömlesztés során bekövetkező halál kizárása érdekében végzik. Ideális esetben a vért kapó beteg – a recipiens – a sajátjával azonos típusú vérátömlesztésben részesül. Ez azonban nem mindig van így. Már csak azért is, mert az első vércsoporttal rendelkezők túlnyomó része 50%. Ugyanakkor univerzális donorok, mivel hiányoznak belőlük a véralvadási folyamatot serkentő agglutinogének.
Figyelem! Ami a IV-es vércsoportú betegeket illeti, univerzális recipienseknek nevezhetők, mivel szervezetük bármely csoport vérét képes befogadni. Ugyanakkor vérüket nem lehet átjuttatni egy másik csoport képviselőinek.
A donorok és a recipiensek kompatibilitásának szemléltetésére egy táblázatot mutatunk be:
Csoportszám Mely csoportok számára lesz donor? Mely csoportok számára válik címzetté? én I, II, III, IV én II II, IV I, II III III, IV I, III IV IV I, II, III, IV
A modern világban a vércsoport ismerete létfontosságú. Az orvosok szempontjából ettől függ majd a betegek túlélési aránya. A hétköznapi emberek szemszögéből ez egy esély arra, hogy vészhelyzetben megmentsék az életüket. Ebben a tekintetben nem lesz felesleges tudnia a vércsoportját, és ha lehetséges, írja be az útlevelébe vagy más okmányaiba, mivel bármikor veszélybe kerülhet az egészség és az élet.
Videó - Vércsoport meghatározás
Videó - A vércsoport és az Rh-faktor meghatározása
Az ABO-rendszerrel végzett vércsoport-meghatározási eljárás abból áll, hogy az eritrocitákban található A- és B-antigéneket azonosítják standard antitestek segítségével, és agglutinineket használnak a vizsgált vér plazmájában vagy szérumában standard eritrocitákkal. A technikát a 20. század elején fejlesztették ki, és még mindig aktívan használják az orvostudományban. Az A és B antigének meghatározása anti-A és anti-B ciklonoknak köszönhetően történik.
Alapfogalmak
A donoroknál nemcsak az eritrociták antigénjeit határozzák meg, hanem a szérumban (plazmában) lévő agglutinineket is standard eritrociták segítségével. A vénás vért bioanyagként használják. A vizsgálat előtt egy nappal a vizsgálat előtt fel kell adnia a zsíros ételeket, és fél órával a vizsgálat előtt nem dohányozhat. A vércsoportokat kétszer határozzák meg: először az orvosi osztályon, ahol elkészítik az anyagot, majd laboratóriumi kutatással igazolják.
A transzfuziológiában alkalmazott fő vizsgálat az ABO rendszerrel végzett vércsoport-meghatározás. Néhány állatnak is hasonló a vércsoport-rendszere, mint például a csimpánzok, gorillák és bonobók.
A felfedezés története
A tudományban általánosan elfogadott vélemény, hogy az ABO-rendszerrel végzett vércsoport-meghatározás módszerét először Karl Landsteiner osztrák tudós azonosította 1900-ban. Majd munkájában háromféle antigént írt le. Ezért harminc évvel később orvosi és élettani Nobel-díjat kapott. Mivel korábban nem volt szoros kapcsolat a tudósok között, később kiderült, hogy K. Landsteiner kutatásaitól függetlenül a cseh szerológus, Jan Jansky volt az első, aki leírta a négy emberi vércsoportot, de kutatásai nem. széles közönség számára ismert. Jelenleg a J. Jansky által kidolgozott osztályozást használják Oroszországban és a volt Szovjetunió köztársaságaiban. Az Egyesült Államokban W. L. Moss 1910-ben készítette el hasonló munkáját.
Vércsoport-meghatározási módszer az ABO rendszer szerint zoliklonokkal
A vércsoportot jó megvilágítású helyiségben kell meghatározni, 15-25 Celsius fokos hőmérséklet-tartományban, mivel az ettől a normától való eltérések befolyásolhatják a vizsgálat eredményeit. A beteg kezdőbetűi és vezetékneve fel vannak írva a táblára vagy táblára. Balról jobbra vagy körben a szabványos csoportjelöléseket alkalmazzuk (O(I), A(II), B(III)). A megfelelő szérumokat cseppenként helyezzük alájuk, minden típushoz külön pipettával. Ezután hozzáadják a beteg vérét. A tanulmány anyagát a fülcimpából vagy az ujjból veszik. Ezt megköveteli az ABO rendszerrel végzett vércsoport-meghatározás technikája.
Az is törvényes, hogy a vérrög kialakulása után kémcsőben lévő vörösvértesteket használjunk. Szükséges, hogy a szérum mennyisége tízszer nagyobb legyen, mint a hozzáadott vér mennyisége. Ezt követően a cseppeket üvegrudakkal összekeverjük (mindegyikhez külön). Öt percig óvatosan rázza a lemezt, és figyelje a hemagglutinációs reakció megjelenését. Kis vörös csomók megjelenésével derül ki, amelyek aztán nagyobbakká egyesülnek. A szérum ekkor szinte teljesen elveszíti színét.
A vörösvértestek egyszerű tapadásának hamis hemagglutinációjának kiküszöbölése érdekében három perc múlva egy csepp sóoldatot kell hozzáadni, és ellenőrizni kell, hogy az agglutináció továbbra is fennáll-e. Ha igen, akkor ez igaz. Ezzel elkészült az ABO rendszer szerinti vércsoportok meghatározása.
Az eredmények értelmezése
Ennek eredményeként négy reakció figyelhető meg:
- agglutináció nem fordul elő egyik szérummal sem - első csoport O(I);
- a reakció megjelent az I(ab) és III(a) szérummal - a második csoport A(II);
- agglutináció történik az I(ab) és II(b) szérummal - harmadik csoport B(III);
- ha a reakció három szérummal megy végbe, további eljárást kell végrehajtania az AB (IV) csoportba tartozó reagensekkel, amelyek szabványosak; ha egy ilyen cseppben nincs agglutináció, akkor feltételezhetjük, hogy ez a 4. AB (IV) vércsoport.
Expressz módszer az Rh-faktorhoz
A vércsoportok ABO rendszerrel történő meghatározásának módszere magában foglalja az Rh-faktor (Rh) egyidejű kimutatását.
A lemez felületét előzetesen megnedvesítjük, és „kontroll szérum” és „anti-rhesus szérum” van ráírva. Ezután a szükséges reagensekből egy-két cseppet a feliratok alá helyezünk, és hozzáadjuk az elemzett anyagot. Ehhez használhat ujjból vett vért (a szérum térfogatával megegyező mennyiségben) vagy a cső alján a vérrög megjelenése után visszamaradt vörösvértesteket (a szérum térfogatának fele). Az anyagválasztás nem befolyásolja a végeredményt. Ezután a vért és a szérumot száraz üvegrúddal összekeverjük, majd öt percig várjuk a reakciót. A hamis mérések kiküszöbölése érdekében 3-4 perc elteltével izotóniás nátrium-klorid oldatot (csak néhány csepp) adnak hozzá. A vércsoport ABO és Rh rendszer szerinti meghatározását nagyon gyakran végzik.
Ha egy csepp szérumban a vörösvértestek agglutinációja következik be, ez pozitív Rh vért jelez. A statisztikák szerint az Rh+ a világ népességének 85%-ában fordul elő. Hiánya lehetővé teszi, hogy Rh-negatív hovatartozásról beszéljünk. Ha agglutináció jelenik meg a kontrollszérumban, az azt jelenti, hogy használhatatlanná vált. Sajnos az ABO rendszerrel végzett vércsoport meghatározásának algoritmusa nem mindig működik tökéletesen.
Milyen hibákat lehet elkövetni ezzel a technikával?
A pontatlanságok annak meghatározásában, hogy a vér egy adott csoporthoz tartozik-e, a következő okoktól függ:
- Műszaki.
- A vizsgált vér biológiai specifitása.
- A standard szérumok és eritrociták alsóbbrendűsége.
Műszaki hibák
Lehetséges hibák az ABO vércsoport keresztmódszerrel történő meghatározásakor:
A biológiai specifitás hibái
Az elemzett vér biológiai specifitásával kapcsolatos hibák két típusra oszthatók.
- A vörösvértestek jellemzőitől függően.
- A szérum biológiai jellemzői által okozott hibák.
Nézzük meg részletesebben az egyes típusokat.
A vörösvértestek jellemzőitől függően
- Késői agglutináció, amelyet a vörösvértestek és antigének „gyenge” formái magyaráznak. A hibák elkerülése érdekében standard vörösvértestek segítségével meg kell határozni a donorok és a recipiensek vércsoportját. Az agglutinogén A2-t úgy kell azonosítani, hogy a vizsgálatot más típusú reagensekkel és egyéb üvegedényekkel megismételjük, növelve a reakció regisztrációs idejét.
- A „panagglutináció” („autoagglutináció”) a vér azon képessége, hogy ugyanazt, nem specifikus reakciót mutasson ki minden szérummal, beleértve a sajátját is. Öt perc elteltével az ilyen agglutináció súlyossága gyengül, bár növekednie kell. Hasonló eseteket figyeltek meg rákos betegeknél, égési betegeknél stb. Kontrollként értékelni kell az elemzett vörösvérsejtek agglutinációjának megnyilvánulását a negyedik csoport standard szérumában és a sóoldatban. A „panagglutináció” esetén a vércsoportot a vörösvértestek háromszoros mosása eredményeként határozzák meg. Ha nem hozza meg a kívánt eredményt, érdemes a beavatkozás előtt felmelegített kémcsőbe ismét vérmintát venni, és a mintát egy termikus edénybe helyezni, ezzel segítve a 37 Celsius fokos vagy magasabb hőmérséklet fenntartását. Ezután a laboratóriumba kell vinni, ahol a fenti hőmérsékletet tartják, és felmelegített sóoldatot, lemezt és reagenseket használnak.
- Néha az elemzett vér vörösvérsejtjei „érmeoszlopokként” vannak elrendezve, és összetéveszthetők agglutinátumokkal. Ha két csepp izotóniás oldatot ad hozzá, és finoman ringatja a lemezt, a vörösvértestek a megfelelő pozícióba kerülnek.
- Inkomplett vagy kevert agglutináció, amely a második, harmadik és negyedik csoportba tartozó betegeknél fordul elő csontvelő-transzplantáció eredményeként vagy a vérátömlesztést követő első három hónapban 0(I).
A szérum biológiai tulajdonságai miatt
Hibás standard vörösvértestek és szérumok használatával kapcsolatos hibák
Azok a gyenge szérumok, amelyek lejártak a lejárati idejükön, vagy amelyek titere 1:32-nél kisebb, gyenge és késői agglutinációt képesek generálni. Az ilyen reagensek használata elfogadhatatlan.
A nem steril körülmények között előállított és nem kellően tartósított, használhatatlan standard eritrociták vagy szérumok használata „bakteriális” agglutináció megjelenéséhez vezet, amely nem specifikus.
Az ABO vércsoportokkal kapcsolatban számos népszerű feltevés létezik, amelyek közvetlenül a felfedezés után jelentek meg a különböző világkultúrákban. Például a múlt század 30-as éveiben Japánban és néhány más országban népszerűvé vált a vércsoportot az egyik vagy másik személyiségtípussal összekapcsoló elmélet. A hasonló elméletek ma is népszerűek.
Van olyan vélemény is, hogy az A csoportba tartozók hajlamosak a súlyos másnaposságra, az O a jó fogazattal, az A2 csoport pedig a legmagasabb IQ-szinttel. De az ilyen állításokat tudományosan nem igazolták.
A vércsoportok ABO rendszer szerinti meghatározását standard szérummal vizsgáltuk.
Javallatok: vérátömlesztés szükségessége, műtéti előkészítés.
Készít: szabványos lemez mélyedésekkel; üvegrudak készlete; izotóniás nátrium-klorid oldat; két sorozat 1., 2., 3., 4. csoportjába tartozó hemagglutináló szérumok sorozata; pipetták; vénából vagy ujjból vett vér; néz; tálcák; kesztyűk; konténerek hulladék anyagok számára; tartályok fertőtlenítő oldatokkal.
Felkészülés a manipulációra:
- A nővér teljesen felkészült a beavatkozás elvégzésére: öltönyben (köpenyben), maszkban, kesztyűben, sapkában és cserecipőben.
- Ellenőrizze a standard hemagglutináló szérumok minőségét: színjelölés, megjelenés (világos, átlátszó); a csomagolás biztonságossága, a megfelelően kialakított címke megléte.
- Készítsen elő mindent, ami a manipuláció végrehajtásához szükséges.
A manipuláció végrehajtása:
Egy fehér tányérra, a megjelölésnek megfelelően, egymás után vigyen fel egy csepp szérumot két sorozat 1., 2., 3. csoportjából. Azonnal engedje le az egyes pipettákat ugyanabba az ampullába (fiola), amelyből azokat vették;
Üvegrúd segítségével cseppentsen egy cseppet a vizsgált vérből a bemélyedések mellé (6 bemélyedés). Egy csepp vérnek 10-szer kisebbnek kell lennie, mint egy csepp szérumnak;
Jelölje be az időt, és tiszta, száraz üvegrúddal keverje össze a vért 1 g szérummal, majd egy másik pálcikával 2 g-ot. stb. minden mélyedésben;
Amikor az agglutináció megtörténik, de legkorábban 3 perccel, adjon egy csepp izotóniás nátrium-klorid oldatot azokhoz a cseppekhez, amelyekben az agglutinációs reakció bekövetkezett, hogy kizárja a hamis agglutinációt, és folytassa a megfigyelést 5 percig.
Az eredmények értékelése:
a) pozitív reakció esetén szemmel látható apró szemcsék jelennek meg a keverékben, amelyek ragacsos vörösvértestekből állnak. A kis szemek nagy szemekké, néha pelyhekké egyesülnek, és a savó elszíneződik;
b) negatív reakció esetén a folyadék egyenletesen rózsaszínű marad;
c) A pozitív és negatív reakciók 4 kombinációja lehetséges:
1. Ha egyik sejtben sincs agglutináció, akkor a vér I. csoportba tartozik (0).
2. Ha az első és a harmadik sejtben agglutináció van, akkor a vér II (A) csoportba tartozik.
3. Ha az agglutináció az első és a második csoportba tartozik, akkor a vér III (B) csoportba tartozik.
4. Ha az agglutináció az első, második, harmadik sejtben van, akkor a vér IV (AB) csoportba tartozik.
A hibák kizárása érdekében a vért 4-es csoportba tartozó szérummal vizsgálják, ahol nem lehet agglutináció.
A manipuláció vége:
- Vegye le a kesztyűt és helyezze fertőtlenítő oldatba.
- Mossa meg a kezét, és törölközővel szárítsa meg.
Jegyzet: A vércsoport meghatározását jó megvilágítású helyiségben, 15-25 0 C hőmérsékleten végezzük.
