Coombs teszt
Coombs teszt– antiglobulin teszt, amelynek célja az Rh-faktorral szembeni hiányos vörösvértest-ellenes antitestek azonosítása Rh-negatív vérben - egy specifikus fehérje, amely az Rh-pozitív vér eritrocitáinak felszínén található. Ennek a tesztnek két típusa van: közvetlen - antitestek kimutatása a vörösvértestek felszínén, közvetett - antitestek kimutatása a vérszérumban. Közvetlen vizsgálatot végeznek a vérbetegségek diagnosztizálásában és kezelésében: hemolitikus anémia, újszülöttek hemolitikus betegsége és mások. Közvetett tesztet végeznek a donor és a recipiens vérének összeegyeztethetőségének felmérésére transzfúzió során, valamint az Rh-konfliktus jelenlétének és kockázatának meghatározására a terhesség tervezése és kezelése során. A Coombs-teszt anyaga vénás vér, a vizsgálatot az agglutinációs reakción alapuló módszerekkel végezzük. Általában mindkét teszt negatív eredményt ad. Az elemzés egy napon belül befejeződik.
A Coombs-teszt az Rh-negatív vér klinikai tesztje, amelynek célja az Rh-faktor elleni antitestek kimutatása. A tesztet az Rh-konfliktus és a hemolitikus reakciók kialakulásának kockázatának azonosítására használják. Minden emberben a vörösvértestek felülete tartalmaz egy bizonyos antigén- vagy agglutinogén-készletet - különféle természetű vegyületeket, amelyek jelenlétét vagy hiányát a vércsoport és az Rh-faktor meghatározására használják. Az orvosi gyakorlatban sokféle antigén létezik, a legnagyobb gyakorlati jelentőséggel bírnak az A és B agglutinogének, amelyek meghatározzák a vércsoportot, valamint az agglutinogén D, az Rh-faktor. Pozitív Rh faktor esetén a D-antigének kimutathatók az eritrociták külső membránján, negatív faktor esetén viszont nem.
A Coombs-teszt, amelyet antiglobulin tesztnek is neveznek, az Rh-faktor rendszerrel szembeni hiányos vörösvértest-ellenanyagok kimutatására irányul a vérben. Az Rh-faktor elleni antitestek specifikus immunglobulinok, amelyek az Rh-negatív vérben képződnek, amikor a vörösvértestek D agglutinogént tartalmaznak. Ez akkor fordulhat elő, ha a magzat és a terhes nő vére keveredik, vérátömlesztés során gépelés. A Coombs-teszt két változatban létezik - közvetlen és közvetett. Közvetlen Coombs-teszt végrehajtásakor a vörösvértestek felületéhez kötődő antitesteket észlelik. A vizsgálatot a hemolitikus reakció okának meghatározására használják. A közvetett Coombs-teszt célja az eritrocita elleni antitestek kimutatása a vérplazmában. Meg kell határozni a vér kompatibilitását a donor és a recipiens vagy az anya és a magzat között, és segít megelőzni az Rh-konfliktus kialakulását és a vörösvértestek későbbi hemolízisét.
A Coombs-teszt mindkét változatához a vért vénából veszik. Az elemzést antiglobulin szérum felhasználásával végzett agglutinációval végezzük. A vizsgálat eredményeit a hematológiában használják fel a hemolitikus reakciók okainak azonosítására, a sebészetben és az újraélesztésben vérátömlesztéskor, a szülészetben és a nőgyógyászatban az Rh-negatív vérű nők terhességének megfigyelésére.
Javallatok
A direkt Coombs-tesztet, amely a vörösvértestek felületéhez kötődő antitesteket detektálja, különböző eredetű hemolitikus reakciókra (a vörösvértestek pusztulása) írják elő. A vizsgálat primer autoimmun hemolitikus anémia, transzfúzió utáni hemolitikus anémia, újszülöttek hemolitikus betegsége, autoimmun, daganatos vagy fertőző betegségek által okozott vörösvértestek hemolízise, valamint gyógyszerek, például kinidin, metildopa, prokainamid esetén javasolt. . Az indirekt Coombs-teszt, amely meghatározza a vérplazmában lévő antitesteket, az Rh-konfliktus kialakulásának megelőzésére szolgál. Vérátömlesztésre készülő betegek, valamint negatív Rh-faktorral rendelkező terhes nők számára javasolt, feltéve, hogy a gyermek leendő apjának pozitív Rh-faktora van.
Az Rh-kompatibilitás meghatározásához a Coombs-tesztet nem írják elő Rh-pozitív vérű betegeknek. Ezekben az esetekben a vörösvértestek felületén már antigének vannak, amelyek nem válthatók ki vérátömlesztéssel vagy magzati vér bejutásával a terhes nő vérkeringésébe. Ezenkívül a vizsgálat nem javasolt terhes nők számára, ha mindkét szülő negatív Rh-faktorral rendelkezik - ez egy öröklött recesszív tulajdonság. Az ilyen párok gyermekének mindig Rh-negatív vére van, az anyával való immunológiai konfliktus lehetetlen. Hemolitikus patológiákban az antiglobulin tesztet nem használják a terápia sikerének ellenőrzésére, mivel az eredmények nem tükrözik a vörösvértestek pusztulási folyamatának aktivitását.
A Coombs-teszt korlátja a kutatási eljárás munkaigényessége - a megbízható eredmények eléréséhez be kell tartani a hőmérsékleti és időbeli feltételeket, a reagensek és a bioanyag előkészítésére vonatkozó szabályokat. A Coombs-teszt előnyei közé tartozik a nagy érzékenység. Hemolitikus vérszegénység esetén ennek a tesztnek az eredménye pozitív marad, még akkor is, ha a hemoglobin, bilirubin és retikulocita szint normális.
Felkészülés az elemzésre és az anyaggyűjtésre
A Coombs-teszt elvégzéséhez használt anyag vénás vér. A vérvétel idejére és a beteg felkészítésére nincs különösebb követelmény. Mint minden vizsgálatnál, evés után legalább 4 órás szünetet javasolt tartani, az utolsó 30 percben pedig abbahagyni a dohányzást, gyakorolni, és kerülni az érzelmi stresszt. Érdemes előre megbeszélni kezelőorvosával a gyógyszerek szedésének abbahagyásának szükségességét – egyes gyógyszerek torzíthatják a Coombs-teszt eredményeit. A vért fecskendővel veszik a cubitalis vénából, vagy ritkábban a kéz hátsó részén található vénából. Néhány órán belül az anyagot a laboratóriumba szállítják.
Közvetlen Coombs-teszt végrehajtásakor antiglobulin szérumot adnak a páciens vérszérumához. Egy idő után a keveréket megvizsgálják az agglutinátok jelenlétére - ezek akkor keletkeznek, ha antitestek vannak a vörösvértesteken. Ha az eredmény pozitív, akkor meghatározzuk az agglutináló titert. A közvetett Coombs-teszt több lépésből áll. Először is, a szérumban jelenlévő antitesteket az injektált vörösvértesteken rögzítik az inkubáció során. Ezután antiglobulin szérumot adunk a mintához, majd bizonyos idő elteltével meghatározzuk az agglutinátok jelenlétét és titerét. Az elemzési időszak 1 nap.
Normális eredmények
Általában a közvetlen Coombs-teszt eredménye negatív (-). Ez azt jelenti, hogy a vérben nincsenek vörösvértestekhez kapcsolódó antitestek, és nem okozhatnak hemolízist. Az indirekt Coombs-teszt normál eredménye is negatív (-), vagyis nincs Rh-faktor elleni antitest a vérplazmában. A recipiens vérátömlesztésére való felkészüléskor ez a donor vérével való kompatibilitást jelenti a terhesség ellenőrzésekor, ez az anya Rh-szenzibilizációjának hiányát, az immunológiai konfliktus kialakulásának alacsony kockázatát jelenti. Fiziológiai tényezők, mint például az étrend vagy a fizikai aktivitás, nem befolyásolhatják a vizsgálat eredményét. Ezért, ha az eredmény pozitív, orvosi konzultációra van szükség.
Az elemzés diagnosztikai értéke
A pozitív Coombs-teszt eredményét minőségileg (+)-tól (++++-ig), vagy mennyiségileg 1:16 és 1:256 közötti titerekkel fejezik ki. A vörösvértesteken és a vérszérumban lévő antitestek koncentrációjának meghatározását mindkét mintatípusban elvégezzük. Ha a közvetlen Coombs-teszt pozitív, akkor a vörösvértestek külső membránján antitesteket mutatnak ki, amelyek ezeknek a vérsejteknek a pusztulásához vezetnek. Oka lehet előzetes tipizálás nélküli vérátömlesztés - transzfúzió utáni hemolitikus reakció, valamint újszülött erythroblastosisa, gyógyszerhasználat miatti hemolitikus reakció, primer vagy másodlagos autoimmun hemolitikus anémia. A vörösvértestek másodlagos pusztulását okozhatja szisztémás lupus erythematosus, Evans-szindróma, Waldenström makroglobulinémia, paroxizmális hideg hemoglobinuria, krónikus limfocitás leukémia, limfóma, fertőző mononucleosis, szifilisz, mycoplasma pneumonia.
Az indirekt Coombs-teszt pozitív eredménye az Rh-faktor elleni antitestek jelenlétét jelzi a plazmában. A gyakorlatban ez azt jelenti, hogy Rh-szenzibilizáció történt, és fennáll a lehetőség Rh-konfliktus kialakulására a donorvér terhesség alatti infúziója után. A terhességi szövődmények megelőzése érdekében a pozitív Coombs-teszt eredményes nőket egy speciális nyilvántartásba helyezik.
Rendellenességek kezelése
A Coombs-teszt izoszerológiai vizsgálatokra vonatkozik. Eredményei lehetővé teszik a hemolitikus reakció azonosítását, valamint a donor és a recipiens, az anya és a magzat vérének kompatibilitásának meghatározását az Rh-konfliktus kialakulásának megelőzése érdekében. Ha a vizsgálat eredménye pozitív, akkor tanácsot kell kérnie kezelőorvosától - szülész-nőgyógyásztól, hematológustól, sebésztől.
Az orvosi gyakorlatban létező számos antigén közül a legnagyobb jelentőséget háromféle véragglutinogénnek tulajdonítják. Ezek közül az egyik az Rh faktor megjelenéséért felelős típus: ha jelen van a vörösvértest membránján, a vércsoport Rh+, hiányában Rh-. Ha az Rh+ agglutinogént tartalmazó eritrociták bejutnak az Rh-negatív vérbe, a szervezet immunválaszt vált ki, és antitesteket kezd termelni az antigén ellen, ami kóros állapotokat okoz.
REFERENCIA! Az Rh-faktor több tucat antigén összetett, többkomponensű rendszere. Ezek közül a leggyakoribb a D típusú agglutinogén (az esetek 85%-a), valamint az E és C.
A Coombs-tesztet csak közvetlen bizonyíték esetén kell elvégezni. A Coombs-teszt felírásának okainak általános listája:
- terhesség tervezése és kezelése (a szülők Rh-értéke eltérő);
- adományozás és vérátömlesztésre való felkészülés (a vér Rh szerinti eltérése nem kevésbé pusztító, mint az AB0 rendszer szerinti eltérés);
- tervezett sebészeti beavatkozás (a vérveszteség vértranszfúzióval történő pótlása esetén);
- hemolitikus betegségek diagnosztizálása.
A konkrétabb indikációk az elvégzett vizsgálat típusától függenek.
Közvetlen Coombs-teszt
A közvetlen teszt a vörösvértestek felszínén lévő antitesteket detektálja. Ez szükséges a meglévő diagnosztizálásához hemolitikus patológiák:
- autoimmun (a vörösvérsejtek és a hemoglobin elpusztulnak a szervezet saját antitesteinek támadása következtében);
- gyógyászati (a kóros folyamatot bizonyos gyógyszerek, például kinidin vagy prokainamid szedése váltja ki);
- transzfúzió után (ha a vércsoport nem egyezik a transzfúzió során), valamint Rh-konfliktus formájában a terhesség alatt (újszülöttek eritroblasztózisa).
REFERENCIA! A hemolitikus vérszegénység olyan betegség, amely a vörösvértestek hemolízis következtében bekövetkező idő előtti pusztulásával jár, ami a vér elégtelen oxigéntelítettségéhez, valamint az agy és/vagy a belső szervek hipoxiájához vezet.
A vérelemek hemolízise az onkológiai, fertőző és reumás betegségekben figyelhető meg, így a közvetlen Coombs-teszt kiegészítő eszközként használható a kóros állapot diagnosztizálására. Érdemes megjegyezni: a negatív tesztérték nem zárja ki a hemolízis lehetőségét, de okot ad további vizsgálatra.
Közvetett Coombs-teszt
A közvetett vizsgálatot gyakrabban alkalmazzák a kóros helyzetek megelőzésére. Segít az antitestek kimutatásában a vérplazmában, ami szükséges a transzfúziós kompatibilitás felméréséhez és a terhesség alatti Rh-konfliktus kockázatának diagnosztizálásához.
Az emberek több mint 80%-a rendelkezik pozitív Rh-faktorral (Rh+), alig 20%-uk Rh-negatív. Ha egy Rh- anyánál Rh+ gyermek fejlődik ki, szervezete antitesteket kezd termelni, amelyek megtámadják a magzat vörösvérsejtjeit, hemolízist okozva.
Figyelembe véve azt a tényt, hogy a „különböző rhesus” házasságok aránya eléri a 12-15%-ot, az újszülöttek hemolitikus megbetegedésének kockázatának magasnak kell lennie, de a valóságban 25 ilyen esetből csak 1-ben tapasztalják a nők a szenzibilizáció jelenségét. (200 sikeres szülésre 1 példa van hemolitikus patológiára). Ez részben annak köszönhető, hogy az első Rh-pozitív gyermek általában nem okoz nyílt agressziót az anya szervezetéből; Az esetek túlnyomó többsége a második és az azt követő gyermekeknél fordul elő. Ugyanaz az elv érvényesül, mint egy adott allergénnel szembeni hagyományos szenzibilizáció esetén.
Az első érintkezésre nincs reakció. A szervezet éppen egy új antigénnel ismerkedik, IgM osztályú antitesteket termel, amelyek felelősek a gyors immunválaszért, de ritkán hatolnak át a placenta gáton a gyermek vérébe. Minden kóros reakció egy második „találkozáskor” nyilvánul meg, amikor a szervezet IgG osztályú antitesteket kezd termelni, amelyek könnyen behatolnak a magzati véráramba, elindítva a hemolízis folyamatát.
Közvetett Coombs teszt terhesség alatt lehetővé teszi az antitestek jelenlétének kimutatását az anya testében, és időben azonosítja az érzékenyítés kezdeti szakaszát. Pozitív válaszhoz regisztráció szükséges havi antitest-titer teszttel és kötelező kórházi kezelés 3-4 héttel a születés előtt.
REFERENCIA! Az Rh-faktor inkompatibilitása semmilyen módon nem befolyásolja az anya állapotát, a hemolitikus betegség csak a gyermekben alakul ki. Súlyos esetekben és időben történő reagálás hiányában a magzat az anyaméhben vagy közvetlenül a születés után meghalhat.
Az eljárás előkészítése és végrehajtása
A diagnózishoz vénás vért használnak. A Coombs-teszthez nincs szükség különösebb hosszú távú felkészülésre. Próbálja meg követni a szokásos szabályokat, mielőtt vért vesz a vénából elemzés céljából:
- 3 nappal korábban hagyja abba az alkoholt és a gyógyszereket (ha lehetséges);
- Tervezze meg az utolsó étkezést 8 óránál későbbre, mielőtt vért vesz analízis céljából;
- 1 órán belül hagyja abba a dohányzást, a fizikai, mentális és érzelmi stresszt;
- Az eljárás előtt igyon egy pohár tiszta szénsavmentes vizet.
A kutatási módszer a hemagglutinációs reakción alapul.
Közvetlen teszt végrehajtásakor a vérmintát előre elkészített antiglobulin szérumnak tesszük ki ismert indikátorokkal, a keveréket egy ideig tartjuk, és ellenőrizzük, hogy vannak-e agglutinátumok, amelyek akkor képződnek, amikor antitestek vannak jelen a vörösvértesteken. Az agglutináció szintjét az agglutináló titer segítségével diagnosztizálják.
Közvetett minta Coombsnak hasonló technikája van, de a műveletek összetettebb sorozata. Az elválasztott vérszérumba antigén eritrocitákat (Rh faktorral) vezetnek be, és csak ezek után a manipulációk után adnak hozzá antiglobulin szérumot a diagnózis és az agglutinációs titer érdekében.
Kutatási eredmények
Általában mind egyenes, mind közvetett Coombs-teszt negatív eredményt kell adnia:
- a negatív közvetlen teszt azt jelzi, hogy a vörösvértestekhez kapcsolódó Rh-faktor specifikus antitestei hiányoznak a vérben, és nem okozhatnak hemolízist
- a negatív közvetett teszt azt mutatja, hogy a vérplazmában sincsenek szabad antitestek az Rh-faktorral szemben; ez a tény jelzi a donor vérének a recipiens vérével (vagy az anya és a gyermek vérével) való kompatibilitást az Rh-faktor szerint.
A pozitív Coombs-teszt a szervezet Rh-szenzibilizációjának tényét jelzi, ami az Rh-konfliktus fő oka vérátömlesztés esetén vagy eltérő Rh-státusú gyermek hordozásakor. Ebben az esetben az eredmények 3 hónapig változatlanok maradnak (a vörösvértestek élettartama). Ha az ok autoimmun hemolitikus anémia, akkor a pozitív teszt több évig (egyes esetekben egész életén át) követheti a beteget.
REFERENCIA! Az antiglobulin teszt nagyon érzékeny, de kevés információval rendelkezik. Nem rögzíti a hemolitikus folyamat aktivitását, nem határozza meg az antitest típusát, és nem képes azonosítani a patológia okát. A teljesebb kép érdekében a kezelőorvosnak további vizsgálatokat kell előírnia (vérmikroszkópia, általános és biokémiai elemzés, reumás vizsgálatok, ESR, vas- és ferritinszint).
Az érzékenység mértéke kifejezhető minőségileg ("+"-tól "++++"-ig) vagy mennyiségileg titer formájában:
- 1:2 - alacsony értékű, nem veszélyes;
- 1:4 - 1:8 - immunológiai reakció kialakulásának kezdete; nem jelent veszélyt, de folyamatos megfigyelést igényel;
- 1:16 -1:1024 - az érzékenyítés erős formája, azonnal intézkedni kell.
A pozitív teszt oka lehet:
- nem típusos vér transzfúziója (vagy gépelési hibával), ha a donor és a recipiens Rh-faktora nem egyezik;
- Rh-konfliktus a terhesség alatt (ha az apa és az anya vérantigének összetétele nem egyezik);
- autoimmun hemolitikus anémia - veleszületett (elsődleges) és másodlagos is, amely bizonyos betegségek következménye (Evans-szindróma, fertőző tüdőgyulladás, szifilisz, hideg hemoglobinuria, limfóma);
- gyógyszeres hemolitikus reakció.
A fenti problémák egyikét sem tudja a beteg orvosi segítség nélkül megoldani. Minden esetben sürgős konzultációra, regisztrációra vagy sürgősségi kórházi kezelésre lesz szükség.
FIGYELEM! Ritka esetekben álpozitív Coombs-teszt lehetséges. Ennek oka lehet a gyakori vérátömlesztés, valamint számos betegség: rheumatoid arthritis, lupus erythematosus, sarcoidosis. Ez a jelenség a lép eltávolítása után is megfigyelhető, valamint a reakció megszakadásakor (a tartalom gyakori rázása, szennyeződések jelenléte).
Coombs reakciója
Coombs reakciója- antiglobulin teszt a hiányos vörösvértest-ellenes antitestek meghatározására. A Coombs-teszt az Rh-faktor elleni antitestek kimutatására szolgál terhes nőknél, valamint az Rh-inkompatibilitással rendelkező újszülöttek hemolitikus anémiájának meghatározására, amely a vörösvértestek pusztulásához vezet. Ezt a módszert Robert Coombs angol orvos javasolta 1945-ben, ezért később „Coombs-reakciónak” nevezték el.
Közvetlen Coombs reakció
A vörösvértestek felszínén található antitestek lehetnek statikusak vagy szabadok a vérplazmában. Az antitestek állapotától függően közvetlen vagy közvetett Coombs-reakciót hajtanak végre. Ha okkal feltételezhető, hogy antitestek rögzülnek a vörösvértestek felületén, közvetlen Coombs-tesztet kell végezni. Ebben az esetben a vizsgálat egy szakaszban történik - antiglobulin szérumot adnak hozzá. Ha a vörösvértestek felületén hiányos antitestek vannak jelen, vörösvértest-agglutináció lép fel.
Közvetett reakció
A közvetett Coombs-reakció 2 szakaszban megy végbe. Először is szükséges a vörösvérsejtek mesterséges érzékenyítése. Ennek érdekében a vörösvértesteket és a vizsgált vérszérumot inkubálják, aminek hatására az antitestek a vörösvértestek felületén fixálódnak. Ezt követően a Coombs-teszt második szakaszát hajtják végre - antiglobulin szérum hozzáadása.
Megjegyzések
Wikimédia Alapítvány. 2010.
Nézze meg, mi a „Coombs-reakció” más szótárakban:
FÉSÜLŐ REAKCIÓ- (Coombs-teszt) a vörösvértestek felszínén lévő reszusantitestek meghatározására szolgáló módszer, amelyek globulinok kicsapódását okozzák a vérszérumban. Ezt a tesztet hemolitikus vérszegénység diagnosztizálására használják Rh-inkompatibilitásban szenvedő csecsemőknél, akik... Orvostudományi magyarázó szótár
Módszer az eritrociták felszínén lévő reszusantitestek meghatározására, amelyek globulinok kicsapódását okozzák a vérszérumban. Ezt a tesztet hemolitikus vérszegénység diagnosztizálására használják Rh-inkompatibilitásban szenvedő csecsemőknél, akiknek... Orvosi kifejezések
- (antiglobulin teszt) a sejtekhez (általában eritrocitákhoz) természetesen vagy mesterségesen kapcsolódó hiányos Abs kimutatására szolgáló módszer antiglobulin ki (A.s.) segítségével. A. s., amely hiányos Abs-t csap ki, hordozó sejteket is bevon ebbe a folyamatba,... ... Mikrobiológiai szótár
FÉSÜLŐ REAKCIÓ- (a brit immunológus, R. R. A. Coombs, 1921-ben született, szinonimája - antiglobulin teszt) - szerológiai reakció, amely az eritrociták hiányos auto- és izoantitestek általi agglutinációján alapul antiglobulin szérum jelenlétében. Nál nél… … Pszichológiai és pedagógiai enciklopédikus szótár
TRANSZFÚZIÓS HEMOLITIKUS REAKCIÓ- édesem A transzfúziós hemolitikus reakció (THR) a recipiens vagy donor (ritkán) vörösvértesteinek hemolízise, amely a vér és annak összetevőinek transzfúziója során következik be. A reakciók lehetnek immunrendszerűek vagy nem immunrendszerűek. Etiológia és patogenezis Immunreakciók... Betegségek jegyzéke
- (R. R. A. Coombs, 1921-ben született, angol immunológus) szerológiai reakció, amely a vörösvérsejtek hiányos auto- és izoantitestek általi agglutinációján alapul antiglobulin szérum jelenlétében; használják a transzfuziológiában, igazságügyi orvostani és... Nagy orvosi szótár
FÉSÜLŐ REAKCIÓ- Coombs-reakció, egy szerológiai reakció, amely lehetővé teszi a vörösvértestek felületén rögzült vagy a vérplazmában lévő hiányos antitestek kimutatását. K.r. hiperimmunizálással nyert antiglobulin szérum felhasználásán alapul... Állatorvosi enciklopédikus szótár
FÉSÜLŐ REAKCIÓ- Monovalens vagy úgynevezett részleges antitestek kimutatására, különösen sertések és más állatok vércsoportjainak elemzésére... A haszonállatok tenyésztésében, genetikájában és szaporításában használt fogalmak és meghatározások
Lásd Coombs reakcióját. (
Normális esetben a vérben nincsenek vörösvértestek elleni antitestek.
A direkt Coombs-teszt egy antiglobulin teszt (gélben történő agglutináció, amely lehetővé teszi a komplett kétértékű antitestek kimutatását), amely kimutatja az IgG osztályú antitesteket és a komplement C3 komponensét a vörösvértestek felszínén. A közvetlen Coombs-teszttel kimutatott antitestek jellemzően széles specifitással rendelkeznek, amely nem kapcsolódik egy jól megalapozott antigénhez. A pozitív közvetlen Coombs-teszt egyértelműen azt jelzi, hogy a beteg hemolitikus anémiában szenved, bár nem minden pozitív közvetlen antiglobulin teszttel rendelkező beteg szenved ebben a betegségben. A betegek körülbelül 10%-ánál a vörösvérsejt-membránon lévő antitestek vagy komplement komponensek nem határozhatók meg közvetlen Coombs-teszttel (a teszt negatív), ennek ellenére autoimmun hemolitikus anémiában szenvednek. Az ilyen esetekben az antitestek specifitásának tisztázására elúciós teszteket alkalmaznak. A közvetlen Coombs-teszt, amely csak komplementre pozitív, általában IgM típusú hideg antitestekre utal. Ebben az esetben az IgM antitestek nincsenek jelen a vörösvértesteken a bazális testhőmérsékleten. Mivel azonban az IgM antitestek aktívan rögzítik a komplementet, és a komplement a vörösvértesteken marad, az autoimmun hemolitikus anémia (hideg aggutinin betegség) ezen formájával a Coombs-teszt csak a komplementre lesz pozitív.
A direkt Coombs-teszt pozitív a meleg antitestek által okozott autoimmun hemolitikus vérszegénységre, autoimmun gyógyszer okozta vérszegénységre (metildopa szedése esetén a betegek legfeljebb 20%-a pozitív reakciót mutat), gyógyszer-adszorpciós típusú hemolitikus anémia, immunkomplex típusú hemolitikus vérszegénység. vérszegénység (a teszt csak a C3-ra pozitív), a hideg antitestek által okozott autoimmun hemolitikus anémia - hideg agglutinin betegség (a teszt csak C3 esetén pozitív). Paroxizmális hideg hemoglobinuria esetén a közvetlen Coombs-teszt negatív.
Közvetett Coombs-teszt - egy közvetett antiglobulin teszt (a hiányos antitesteket észleli) lehetővé teszi az atipikus antitestek azonosítását a vérben, beleértve az idegen eritrocita antigénekkel szembeni alloantitesteket is. Nevét (közvetett) onnan kapta, hogy 2 szakaszban fordul elő. Kezdetben a beteg nem teljes antitesteket tartalmazó vérszéruma látható megnyilvánulások nélkül kölcsönhatásba lép a hozzáadott corpuscularis Ag diagnosticum-mal. A második szakaszban a hozzáadott antiglobulin szérum kölcsönhatásba lép az antigéneken adszorbeált hiányos antitestekkel, látható csapadék megjelenésével. A homológ (allogén) vörösvértestek transzfúziója vagy a terhesség a leggyakoribb oka ezen vörösvérsejt-ellenes antitestek képződésének. A pozitív indirekt Coombs-teszt és a negatív direkt teszt kombinációja nem nyújt semmit az autoimmun hemolitikus anémia diagnózisához. A pozitív közvetett Coombs-teszt bizonyos nehézségeket okoz a transzfúzióra szánt vér kiválasztásakor és a konzervált vérrel való kompatibilitás kereszttesztjének elvégzésekor, de nincs más diagnosztikai értéke.
Coombs, Morant, Reis javasolta 1945-ben egy antiglobulin tesztet, amelyet a nem teljes vörösvértest-ellenes antitestek kimutatására terveztek, és később Coombs-tesztnek nevezték el. Ennek a módszernek az a lényege, hogy a humán immunglobulinok elleni antitesteket tartalmazó antiglobulin szérum a nem komplett antitestekkel szenzitizált vörösvértestekkel reagálva azok agglutinációjához vezet.
Attól függően, hogy az antitestek a vörösvértestek felületén rögzülnek-e, vagy szabad állapotban vannak-e a vérplazmában, közvetlen vagy közvetett Coombs-tesztet alkalmaznak.
Közvetlen Coombs-tesztet végeznek olyan esetekben, amikor okkal feltételezhető, hogy a vizsgált vörösvértestek már jelen vannak in vivo megfelelő antitestekkel érzékenyítették, pl. a reakció első fázisa - az antitestek rögzítése a vörösvértestek felszínén - a szervezetben megtörtént, és az ezt követő antiglobulin szérum hozzáadása az érzékenyített sejtek agglutinációját okozza.
Az indirekt Coombs-teszt segítségével a tesztszérumban jelenlévő hiányos antitestek kimutathatók. Ebben az esetben a reakció két szakaszban megy végbe. Az első szakasz a vizsgált eritrociták inkubálása a tesztszérummal, melynek során a vizsgált szérummintában lévő antitesteket rögzítik a vörösvértest felszínén. A második lépés az antiglobulin szérum hozzáadása.
Eddig a Coombs-tesztet széles körben alkalmazták a laboratóriumi gyakorlatban immunpatológiai állapotok diagnosztizálására, különösen az autoimmun hemolitikus anémiában, amelyet a vörösvértestek pusztulása jellemez a sejtmembrán antitestekhez és (vagy) összetevőihez való kötődése miatt. a komplementrendszer. Az Ig G jelenlétének kimutatására használják a vörösvérsejt membránon (általában Ig G1 és Ig G3), amely képes aktiválni a komplementet, és néha a komplementet (C3d). A betegség akut periódusában azonban a vörösvértestek pusztulása miatt, amelyeken nagyszámú antitestet regisztráltak, hemolitikus krízis során, valamint a betegség krónikus lefolyása során nem elegendő számú antitest esetén, negatív közvetlen Coombs-teszt figyelhető meg.
Hangsúlyozni kell, hogy az indirekt Coombs-teszt továbbra is a legjobb módszer a transzfúziós tápközeg egyéni kiválasztására, mivel ez teszi lehetővé a donor és a recipiens egyéni kompatibilitásának legpontosabb meghatározását az eritrocita antigénekkel szemben.
A transzplantáció előtti időszakban minden szerv és szövet recipiens, illetve a transzplantáció után is vérképző őssejt recipiensek vizsgálatakor további direkt antiglobulin teszt elvégzése javasolt az autoantitestek jelenlétére.
Az immunhematológia és transzfuziológia mellett az antiglobulin teszteket széles körben alkalmazzák számos kóros állapot diagnosztizálásában: hematológiai betegségek, köztük limfoproliferatív betegségek, szisztémás kötőszöveti betegségek, Sjogren-kór, krónikus aktív hepatitis stb.
A Coombs-teszteket aktívan használják az orvosi genetikában és a törvényszéki orvostudományban a felszíni vörösvértest-antigének meghatározására.
A Coombs-teszt meglehetősen munkaigényes kutatási módszer, amelynek megvalósítása különös odafigyelést igényel. Használata során nehézségek merülnek fel, különösen a gyengén pozitív reakciók értelmezésével kapcsolatban. Köztudott, hogy a Coombs-teszt elvégzésekor a hamis, gyengén pozitív vagy negatív reakciók a vörösvértestek elégtelen mosásának, az antiglobulin reagens szérumnyomok általi semlegesítésének, valamint az antiglobulin tartalmú nem zsíros felülettel való érintkezésnek a következményei lehetnek. javítható, ezáltal elveszíti aktivitását. A Coombs-teszt másik hátránya az antiglobulin reagens instabilitása, amelynek előállítása és tárolása bizonyos jellemzőkkel rendelkezik, ami szintén megnehezíti az antiglobulin szérummal történő hemagglutinációs reakció mennyiségi meghatározását.
Ezenkívül A. Holburn, D. Voak és munkatársai által végzett tanulmányok. , kimutatta, hogy az álnegatív eredmények oka a vörösvérsejt-szuszpenzió újraszuszpendálása során fellépő túlzott rázás lehet. Az antiglobulin tesztek végzése során téves eredményeket okozhat az is, ha az antiglobulin reagensben anti-komplementer antitestek keveréke jelen van, különösen a C3d-, C3c-, C4c- és C4d-komplement komponensekkel szemben, amelyek adszorbeálódnak a test felületén. tesztelje a vörösvértesteket az inkubáció során, és pozitív eredményt keltsen.
Ezek a hátrányok könnyen kiküszöbölhetők a vizsgált minták alapos mosásával és a reakciókörülmények figyelemmel kísérésével.
Az elmúlt évtizedben alacsony ionerősségű izotóniás sóoldatot (LISS) alkalmaztak a közvetett Coombs-teszt elvégzéséhez szükséges idő csökkentésére és az érzékenység növelésére.
Az antiglobulin tesztek tagadhatatlan előnye számos szerző szerint nagy érzékenységük, amely jelentősen meghaladja a nem agglutináló antitestek kimutatására használt alternatív kutatási módszerek felbontását.
Összehasonlítottuk a vérszérumok inkomplett antitestek jelenlétének vizsgálatára szolgáló módszerek felbontását poliglucin, zselatin és antiglobulin szérum felhasználásával. A vizsgálat során zselatin, poliglucin és indirekt antiglobulin tesztek segítségével 140, izoimmun donoroktól származó vérszérummintában követték nyomon a nem teljes anti-D antitestek titereit. Ezen módszerek megfogalmazása az általánosan elfogadott módszerek szerint történt.
Megállapítást nyert, hogy felbontásukat tekintve az eritrociták anti-D antitestekkel történő szenzibilizációjának kimutatására szolgáló módszerek a következőképpen vannak elrendezve: a legérzékenyebb az indirekt Coombs-teszt, majd a zselatin-teszt, a legkevésbé informatív a poliglucin-teszt. Az ebben a kísérletsorozatban kapott eredmények teljes mértékben összhangban vannak a szakirodalmi adatokkal, amiből arra következtethetünk, hogy a Coombs-tesztek érzékenysége meglehetősen magas, ami lehetővé teszi számunkra, hogy nagy megbízhatósággal azonosítsuk az anti-eritrocita antitestek jelenlétét a vérben. amelyek nem okozzák a vörösvértestek agglutinációját.
A Coombs-tesztek gyakorlati elvégzése során azonban előfordulhatnak olyan esetek, amikor nem mutatnak ki hiányos antitesteket, bár a betegség klinikai képe vagy a korábbi immunizálás jelzi ezek esetleges jelenlétét. Ilyen esetekben feltételezhető, hogy az antitestek mennyisége nem elegendő ahhoz, hogy az antiglobulin szérum antitestei kicsapják őket.
Ezt a következtetést saját kísérletünk is megerősítette, amelyben a sejtek analitikai mikroelektroforézisének módszerével megállapították a vizsgált eritrocitákon anti-D antitestek jelenlétét, amelyeket az indirekt Coombs-teszt nem mutatott ki. Ebben a kísérletsorozatban antiglobulin szérumot adtunk az immunizált donorok véréből nyert szérummal előinkubált eritrocitákhoz a folyamatban lévő antitestogenezis időszakában, azaz. abban az időszakban, amikor ismert módszerekkel, köztük a Coombs-teszttel nem mutattak ki bennük antitesteket.
Az elvégzett vizsgálatok során a vörösvértestek felszínén hiányos antitestek jelenlétének bizonyítéka a szenzitizált vörösvértestek elektroforetikus mobilitásának statisztikailag szignifikáns változása volt az antiglobulin szérum hozzáadása után. Meg kell jegyezni, hogy az anti-D antitesteket ezt követően minden immunizált donorban meghatározták a vérszérumban végzett közvetett Coombs-teszttel.
Gillerand et al. azt is kimutatta, hogy az antiglobulin teszteket egy bizonyos érzékenységi küszöb jellemzi: csak akkor figyelhető meg pozitív eredmény, ha egy vörösvérsejt felületén legalább 500 Ig G molekulát rögzítenek.
Emellett a szakirodalom bizonyítékokkal szolgál arra vonatkozóan, hogy a Coombs-teszt esetleges negatív eredménye összefüggésbe hozható a vörösvértesteket szenzibilizáló antitestek alacsony affinitásával, aminek következtében azok könnyen eluálódnak a vörösvértestek felületéről a mosási folyamat során. .
A fentiek figyelembevételével megállapíthatjuk, hogy bizonyos esetekben a Coombs-teszt negatív eredménye még nem bizonyítja a vörösvértestek felületén rögzített antitestek hiányát.
Ismeretes, hogy a Coombs-reakciók nagyon specifikusak, és képesek a legtöbb hiányos antitest kimutatására. Azonban amint azt egyes kísérleti adatok mutatják, az antiglobulin tesztek nem immunológiai körülmények között is pozitívak lehetnek. E. Muirhead et al. a fenilhidrazin kutyáknak történő beadása utáni második napon pozitív Coombs-tesztet figyeltek meg. A pozitív reakció ilyen gyors megjelenése ellentmond annak immunológiai természetének, és inkább a fehérje nem specifikus adszorpciójával van összefüggésben az eritrociták felszínén.
M. Williams et al. azt találta, hogy a klavulánsav is okozhat pozitív reakciót, ami a szerzők szerint a plazmafehérjék nem specifikus adszorpciójával függ össze a vörösvértestek felszínén. Hasonló hatást figyeltek meg a cefalosporin antibiotikumokkal végzett kezelés során.
A fenti tanulmányok szerzői hangsúlyozzák a Coombs-teszt pozitív eredményeinek nem immunológiai jellegét, és ragaszkodnak ahhoz, hogy ezek az anyagok képesek a vörösvértestek membránjainak olyan módosulását okozni, aminek következtében a vörösvérsejtek képesek adszorbeálni a fehérjéket (pl. különösen az albumin), amelyek általában jelen vannak a vérplazmában, és nem rendelkeznek antitest-tulajdonságokkal. Emellett lehetséges, hogy a sejtfelszínen adszorbeálódott xenobiotikum összekötőként szolgál a sejtmembrán és a plazmafehérjék között.
Az antiglobulin tesztek eredményeinek helyes értelmezéséhez figyelembe kell venni a fiatal és érett vörösvértestek mennyiségi arányát is a perifériás vérben. Megállapítást nyert, hogy a fokozott eritronregeneráció időszakában a szervezetből izolált retikulocitákat az antiglobulin szérum agglutinálja.
A közvetlen antiglobulin teszt pozitív eredménye Különböző kóros állapotokban is előfordul, amelyeket immunrendszeri rendellenességek kísérnek, gyulladásos folyamatok, amelyek különböző specifitású antitestek nem specifikus adszorpciójához vezetnek az eritrociták membránján. Ez arra utal, hogy az Ig G molekulák nem lépnek kölcsönhatásba az eritrociták specifikus antigénjeivel, hanem csak a vizsgált sejtek felszínén rögzülnek.
Figyelembe kell venni, hogy a dysproteinémia kialakulásával vagy a paraproteinek megjelenésével jellemezhető betegségek esetén a Coombs-teszt elvégzésekor a pozitív eredmény annak köszönhető, hogy az eritrociták felületén olyan fehérjék vannak jelen, amelyek nem rendelkeznek a fehérjék tulajdonságaival. antitestek, ami az antiglobulin tesztek specifitásának hiányát is jelzi a segítségükkel kimutatott fehérje természetét illetően.
Így, amint azt számos tanulmány kimutatta, a direkt és indirekt antiglobulin tesztek pozitív eredményei nem abszolút bizonyítékok az antitestek jelenlétére, mivel pozitív reakciók figyelhetők meg különböző kóros állapotokban is, amelyek nem kapcsolódnak a szervezet izosenzitizációjához vagy autoszenzitizációjához. Ezért csak több immunszerológiai módszer eredményeinek összehasonlítása a betegség klinikai képével teszi lehetővé a kialakuló kóros folyamat teljes körű megítélését.
A pozitív indirekt antiglobulin teszt negatív direkt teszttel általában szabad alloantitestek jelenlétét jelzi a tesztszérumban, ami korábbi vérátömlesztéshez vagy terhességhez kapcsolódik.
A Coombs-teszt gyakran pozitív a paroxizmális éjszakai hemoglobinuria súlyosbodása során; az anti-C3 és anti-C3dg pozitív Coombs-tesztje a hideg agglutinin betegség markere.
Azokban az esetekben, amikor nagy a kockázata az újszülött hemolitikus betegségének kialakulásának, a direkt és indirekt antiglobulin tesztek eredményei nagy jelentőséggel bírnak a diagnózis felállításában (leggyakrabban terhesség alatt), és szükség esetén a megjelenés és a változások dinamikus monitorozásában. antitest titerben. Az újszülöttek hemolitikus betegsége leggyakrabban az anya és a magzat inkompatibilitásával jár a D antigénnel, ritkábban az ABO rendszer antigénjeivel, és még ritkábban más antigénekkel (C, c, K stb.). A folyamat során antitestek képződnek Az La, mivel általában az Ig G osztályba tartozó hiányos antitestek, egyértelműen kimutatható az indirekt antiglobulin tesztben. Ennél a betegségnél az azonosított antitestek helyesen megállapított titere és specificitása nagy jelentőséggel bír, mivel bizonyos összefüggés van a terhes nő vérében található vörösvértest-ellenes antitestek szintje és a hemolitikus betegség súlyosságának lehetséges prognózisa között. betegség.
Az indirekt Coombs-teszt a klinikai gyakorlatban is szükséges a biztonságos transzfúziós terápia biztosítása érdekében. Végrehajtása kötelező eleme a donorok és a recipiensek különböző kategóriáinak immunhematológiai vizsgálatainak, valamint az egészségügyi intézményekben minden olyan beteg rutinvizsgálatának, akiknél vér és annak összetevőinek transzfúziója szükséges.
Az indirekt antiglobulin tesztet a következő esetekben alkalmazzák:
Az Rh-hovatartozás (antigén D) pontosabb meghatározásához, ha az Rh-faktor más módszerekkel (poliglucin, zselatin stb.) történő meghatározásának nem egyértelmű eredménye;
Gyenge eritrocita antigének (Kell, Duffy, Kidd, Lewis stb. rendszerek) és ezen antigének elleni antitestek azonosítása;
Alloimmun anti-eritrocita antitestek kimutatására és azonosítására, beleértve a hemolitikus poszttranszfúziós reakciókat okozó antitesteket;
Az AB0 rendszer immunantitesteinek jelenlétének meghatározása transzfúziós hemolitikus szövődmények során;
Kompatibilitási tesztként a transzfundált vér és összetevői egyéni kiválasztásához.
Így a Coombs-teszt az orvostudomány különböző területein (hematológia, szülészet, reumatológia, transzfuziológia, klinikai és laboratóriumi diagnosztika stb.) alkalmazott fontos diagnosztikai teszt. A Coombs-teszt végrehajtásának sajátosságainak ismerete segít növelni a kapott eredmények megbízhatóságát, és hozzájárul a laboratóriumi adatok helyes értelmezéséhez.
Irodalom
1. Antitestek. Módszerek / szerk. D. Katie. - M.: Mir, 1991.
2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadzhiev A.B.. // Anémia transzfúziós terápiája: tankönyv. kézikönyv orvosoknak. — M.: Prakt. Medicina, 2005. - P. 105-106.
3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transzfuziológia. - 2006. - 2. sz. - P. 39-62.
4. Donskov S.I.// A Rhesus rendszer vércsoportjai: elmélet és gyakorlat. - M.: VINITI RAS, 2005. - P. 180-186, 195.
5.Immunszerológia (szabályozási dokumentumok) / ösz. A.G. Bashlay, S.I. Donskov. - M.: VINITI RAS, 1998.
6.A vérrendszer vizsgálata a klinikai gyakorlatban / szerk. GI. Kozinets, V.A. Makarova. - M.: Triada-X, 1997.
7. Levin V.I.. Az eritrodierézis és erythropoiesis mechanizmusáról az akut poszthemorrhagiás vérszegénység időszakában: absztrakt. dis. ...folypát. édesem. Sci. - Minszk, 1968.
8. Ragimov A.A., Bayramalibeyli I.E.. // A vérszegénység diagnosztizálásának, megelőzésének és kezelésének alapjai. - M.: GOU VUNMC MH RF, 2002. - P. 204-209.
9. Chumakova E.D.. // A hematológia és transzfuziológia aktuális problémái: a Fehérorosz Köztársaság Hematológusai és Transzfuziológusai VI. Kongresszusának előadásai, Minszk, 2007. május 24-25. / szerk. A.I. Szvirnovszkij, M.P. Potapneva. - Minszk: Republikánus Hematológiai és Transzfuziológiai Tudományos és Gyakorlati Központ, 2007. - 50. o.
10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lancet. - 1945. - 1. évf. 2. - 15. o.
11. Freedman J. // J. Clin. Pathol. - 1979. - 1. évf. 32. - P. 1014-1018.
12. Holburn A.M.. Minőség ellenőrzés. Methods in Hematology/szerk. I. Cavill. - Edinburgh: Churchill Livingstone, 1982. - 1. évf. 4. - P. 34-50.
13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - Vol. 175, N 8. - 919. o.
14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (7. melléklet). - P. 719-721.
15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (7. melléklet). — P. 716—718.
16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// New Engl. J. Med. -1976. - Vol. 277. - P. 123-125.
17. Muirhead E.E., GrovesM., Brian S. // J. Lab. Clin. Med. -1954. - Vol. 44. - P. 902-903.
18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.
19. Voak D., Downie D., MooreB. et al. //Biotests Bull. - 1986. - 1. évf. 1. - P. 41-52.
20. Voak D., Haigh T., Downie D. et al. Sejtmosó gépek antiglobulin tesztekhez. Ismételt tesztelés – egy új módszer, amely bemutatja egy széles körben használt gép – a Sorvall CW1-AF2 – hatékonyságát: jelentés a DHSS műszaki részlegének, 1991. február.
21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P.. et al. //Antimikrobiális szerek és kemoterápia. -1985. - P. 125-127.
22. Zarandona J.M., Yazer M.H.. // CMAJ. - 2006. - Vol. 174, N 3. - P. 305-307.
Orvosi hírek. - 2008. - 3. sz. - 33-36.
Figyelem! A cikk szakorvosoknak szól. A cikk vagy töredékeinek újranyomtatása az interneten a forrásra mutató hivatkozás nélkül a szerzői jogok megsértésének minősül.
