A Coombs-teszt melyik vérszegénységre pozitív. Közvetett Coombs-teszt (antiglobulin teszt, hiányos vörösvértest-ellenes antitestek kimutatása), vér. Coombs-teszt: izoimmun vörösvértest-ellenes antitestek szűrése

Közvetlen Coombs-teszt. Ezt a tesztet a gyermek vörösvérsejtjeiben rögzített blokkoló antitestek jelenlétének bizonyítására használják. A pozitív közvetlen teszt szenzibilizációt jelez, és az újszülött hemolitikus betegségének meggyőző jeleként szolgál még az egyéb klinikai tünetek megjelenése előtt. Kivételként és csak nagyon súlyos esetekben a direkt Coombs-teszt negatív lehet az érzékeny vörösvértestek már bekövetkezett, szinte teljes hemolízise miatt.

A közvetlen Coombs-tesztet a következőképpen végezzük: a gyermek sarkából vett 5 csepp vért egy kémcsőbe helyezzük, és 5 ml sóoldatot adunk hozzá. Jól keverjük össze és centrifugáljuk 10 percig. A vörösvértest-üledék feletti tiszta folyadék elválik. Ezután ismét adjunk hozzá 5 ml sóoldatot, keverjük össze és centrifugáljuk. Sóoldattal háromszori keverés után a vörösvértesteket jól megmossuk. A felülúszó utolsó elválasztása után a 0,1 ml vörösvértest üledéket 0,9 ml fiziológiás oldattal összekeverjük. Vigyen fel 2-3 cseppet ebből a keverékből egy tárgylemezre, és adjon hozzá egy csepp Coombs szérumot. Az agglutináció jelenléte azt jelzi, hogy a reakció pozitív (pozitív közvetlen Coombs-teszt). A vizsgálatot 16°C feletti szobahőmérsékleten kell elvégezni, hogy elkerüljük a hideg agglutininek hatását.

Közvetett Coombs-teszt szabad antitestek jelenlétének bizonyítékaként szolgál az anyai szérumban, és anyai szérummal végezzük.

Az Rh-inkompatibilitással rendelkező újszülött hemolitikus betegsége általában a második terhesség után nyilvánul meg. Az első gyermek egészségesen, a második enyhe vérszegénység jeleivel születik, és csak a harmadik terhesség után születnek a gyermekek hemolitikus betegség nyilvánvaló jeleivel. Csak előzetesen érzékeny nők szülhetnek olyan gyermeket, akinek hemolitikus betegség tünetei vannak az első terhességük során. Egyes esetekben az immunizálás abortuszt és halvaszületést okoz. A betegség kialakulása és súlyossága szempontjából fontos a méhlepény állapota és az anyai agglutininok magzati expozíciójának időtartama. Amikor az agglutininek 10-14 héttel a születés előtt megjelennek, a gyermek általában szubklinikai formákat tapasztal. Az agglutininek korai megjelenése, 15-26 héttel a születés előtt a betegség súlyos formáit okozza. A betegség minden formája esetén a fő folyamat a hemolízis. Az antigén-antitest reakció következménye a hemolízis, a máj és az agyi hajszálerek károsodása. Attól függően, hogy melyik elváltozás dominál, a betegség különböző formái figyelhetők meg. Egyes anafilaxiás jelenségek is veszélyesek. Hisztamin-szerű anyagok képződéséhez vezetnek, súlyos károsodást okozva a májsejtekben és különösen a bazális ganglionok ganglionsejtjeiben, az ammóniás szarvban, a medulla oblongata-ban, sőt az agykéregben is. Amikor a májsejtek károsodnak, a máj sárgasága hozzáadódik az extrahepatikus sárgasághoz. A gyermekek a kernicterus súlyos tünetei miatt halnak meg. Ha túlélik, megmaradnak az idegrendszeri károsodás tünetei (az extrapiramidális rendszer zavarai koreoatetotikus mozgásokkal, sajátos táncos járás, erőltetett fejmozgások, esetenként az akaratlagos mozgások koordinációs zavara gyakori eséssel, fokozott izomtónus, mentális retardáció, azaz az úgynevezett encephalopathia posticteria infantum jeleivel).

Coombs teszt

A direkt Coombs-teszt egy antiglobulin teszt (gélben történő agglutináció, amely lehetővé teszi a komplett kétértékű antitestek kimutatását), amely kimutatja az IgG osztályú antitesteket és a komplement C3 komponensét a vörösvértestek felszínén. A közvetlen Coombs-teszttel kimutatott antitestek jellemzően széles specifitással rendelkeznek, amely nem kapcsolódik egy jól megalapozott antigénhez. A pozitív közvetlen Coombs-teszt egyértelműen azt jelzi, hogy a beteg hemolitikus anémiában szenved, bár nem minden pozitív közvetlen antiglobulin teszttel rendelkező beteg szenved ebben a betegségben. A betegek körülbelül 10%-ánál a vörösvérsejt-membránon lévő antitestek vagy komplement komponensek nem határozhatók meg közvetlen Coombs-teszttel (a teszt negatív), de ennek ellenére autoimmun hemolitikus anémiában szenvednek. Az ilyen esetekben az antitestek specifitásának tisztázására elúciós teszteket alkalmaznak. A közvetlen Coombs-teszt, amely csak komplementre pozitív, általában IgM típusú hideg antitestekre utal. Ebben az esetben az IgM antitestek nincsenek jelen a vörösvértesteken a bazális testhőmérsékleten. Mivel azonban az IgM antitestek aktívan rögzítik a komplementet, és a komplement a vörösvértesteken marad, az autoimmun hemolitikus anémia (hideg aggutinin betegség) ezen formájával a Coombs-teszt csak a komplementre lesz pozitív.

A direkt Coombs-teszt pozitív a meleg antitestek által okozott autoimmun hemolitikus vérszegénységre, autoimmun gyógyszer okozta vérszegénységre (metildopa szedése esetén a betegek legfeljebb 20%-a pozitív reakciót mutat), gyógyszer-adszorpciós típusú hemolitikus anémia, immunkomplex típusú hemolitikus vérszegénység. vérszegénység (a teszt csak a C3-ra pozitív), a hideg antitestek által okozott autoimmun hemolitikus anémia - hideg agglutinin betegség (a teszt csak C3 esetén pozitív). Paroxizmális hideg hemoglobinuria esetén a közvetlen Coombs-teszt negatív.
A betegség akut periódusában a vörösvértestek pusztulása miatt, amelyeken nagyszámú antitestet regisztráltak, hemolitikus krízis során, valamint a betegség krónikus lefolyása során nem elegendő számú antitest esetén negatív közvetlen Coombs-teszt figyelhető meg.

:
  • A laboratóriumi vérvizsgálatok minőségének biztosításának fontos feltétele az anyag éhgyomorra történő felvétele, reggel (12:00 óra előtt).
  • 12 órával a vizsgálat előtt kerülni kell az alkoholfogyasztást, a dohányzást, az evést és a fizikai aktivitás korlátozását.
  • A vérvétel reggelén ihat vizet.
  • Kerülje a gyógyszerek szedését; Ha nem lehetséges abbahagyni a gyógyszer szedését, értesítenie kell a laboratóriumot.
  • Bármilyen orvosi diagnosztikai eljárás elvégzése előtt tanácsos az anyagot átvenni.
  • A nők hormonszintjének értékelésekor fontos figyelembe venni a menstruációs ciklus azon napját, amikor a legoptimálisabb bizonyos hormonok mérése. Ezeket az információkat orvosától szerezheti be.
Index Jellegzetes
Analizátor és tesztrendszer Gél kártyák; DiaMed AG (Svájc)
Referencia értékek Negatív eredmény / Pozitív eredmény
Zavaró tényezők. Gyógyszerek
Pozitív teszt a következő gyógyszerek szedése esetén lehetséges: acetaminofen, szalicilsav, aminopirin, antihisztaminok, karbromál, cefalosporinok, klórpromazin, klórpropamid, ciszplatin, klonidin, dipiron, etosuximid, fenfluramin, fuadin, hidralazin, inzulin, chlorothiazprofen, vízesés, mefenaminsav, melfalán, metadon, metildopa, metil-szergid, nomifenzin, penicillamin, penicillinek, fenacetin, fenilbutazon, probenecid, prokainamid, kinidin, kinin, rifampin, sztreptomicin, tetrahidroxi-ciklil-amidok, triamin-szulfonil-amidok
Használati javallatok
  • Immun hemolitikus anémia, újszülöttek hemolitikus betegsége, gyógyszer által kiváltott immun hemolitikus anémia, hemolitikus transzfúziós reakciók diagnosztizálása
Az eredmények értelmezése

Általában a közvetlen Coombs-teszt negatív.


Pozitív Coombs-teszt:
  • autoimmun hemolitikus anémia;
  • újszülöttek hemolitikus betegségei;
  • gyógyszer által kiváltott immunhemolitikus anémia;
  • hemolitikus transzfúziós reakciók

A Coombs-teszt egy vérvizsgálat, amelyet annak kimutatására végeznek, hogy a vér tartalmaz-e bizonyos, esetleg nem biztonságos antitesteket. Ezek az antitestek a vörösvérsejtekhez tapadnak, és megtámadhatják az immunrendszert, és más módon is károsíthatják. Az orvosi terminológiában ezt a vizsgálatot antiglobulin tesztnek (AGT) is nevezik.

Coombs-minták típusai

Kétféle Coombs-teszt létezik: közvetlen és közvetett.

Közvetlen Coombs-teszt direkt (DAT) néven is ismert, kimutatja a vörösvértestek felszínéhez kötődő autoantitesteket. Ezek az antitestek néha bizonyos betegségek következtében vagy bizonyos gyógyszerek, például prokainamid, metildopa vagy kinidin szedésekor termelődnek a szervezetben.

Ezek az antitestek veszélyesek, mert néha vérszegénységet okoznak a vörösvérsejtek elpusztításával.

Ezt a vizsgálatot néha elrendelik a sárgaság vagy anémia okának diagnosztizálására.

Általában a Coombs-reakció negatív.

Pozitív:

  • újszülöttek hemolitikus betegségei;
  • autoimmun hemolízis;
  • hemolitikus transzfúziós reakciók;
  • gyógyszer által kiváltott immunhemolitikus anémia.

Közvetett Coombs-teszt, más néven , a vérszérumban található vörösvértestek elleni antitestek kimutatására szolgál (a szérum a vér tiszta sárga folyadéka, amely a vörösvértestek és a koaguláns eltávolítása után marad vissza).

A közvetett Coombs-tesztet vérátömlesztés során használják annak meghatározására, hogy a donor vére megegyezik-e a recipiens vérével. Ezt kompatibilitási tesztnek nevezik, és segít megelőzni a donor vérével kapcsolatos bármilyen nemkívánatos reakciót. Ez a vizsgálat terhes nők számára is javasolt. Egyes nőknél IgG antitestek vannak, amelyek átjuthatnak a placentán a magzati vérbe, és károsíthatják az újszülöttet, hemolitikus anémiának nevezett hemolitikus betegséget okozva.

Eljárás

A vért fecskendővel veszik a vénából, általában a kéz hátsó részéből vagy a könyökhajlatból. Ezt megelőzően a szúrás helyét alaposan fertőtlenítik, majd vérvétel után tiszta gézzel vagy vattával kell felvinni.

A kapott vért a laboratóriumban megtisztítják, és a vörösvértesteket elválasztják. A mintát ezután egymás után megvizsgálják különböző szérum- és Coombs-reagensekkel, amelyeket kontraszttal állítanak elő. Ha nincs agglutináció (vörösvértestek csomósodása), ez pozitív eredményt jelent.

Ha azonban a teszt negatív, az azt jelenti, hogy a vérben olyan antitestek vannak, amelyek a vörösvértestek ellen hatnak. Ez különféle betegségekre utalhat, például vérszegénységre (természetes és gyógyszeres eredetű), szifiliszre vagy mycoplasma fertőzésre. Az eredmények kézhezvétele után a kezelőorvos megfelelő kezelést ír elő.

Videó

Antitestek, az eritrociták felszínén található, lehet statikus vagy szabad állapotban ben vérplazma. Az antitestek állapotától függően közvetlen vagy közvetett Coombs-reakciót hajtanak végre. Ha okkal feltételezhető, hogy antitestek rögzülnek a vörösvértestek felületén, közvetlen Coombs-tesztet kell végezni. Ebben az esetben a teszt egy szakaszban történik - hozzáadásban antiglobulin szérum. Ha hiányos antitestek vannak jelen a vörösvértestek felületén, agglutináció vörös vérsejtek

Közvetett reakció

A közvetett Coombs-reakció 2 szakaszban megy végbe. Először mesterségesen kell végrehajtania túlérzékenységet vörös vérsejtek Ennek érdekében a vörösvértesteket és a vizsgált vérszérumot inkubálják, aminek hatására az antitestek a vörösvértestek felületén fixálódnak. Ezt követően a Coombs-teszt második szakaszát hajtják végre - antiglobulin szérum hozzáadása.

Csapadék reakció - Az RP (a latin praecipilo szóból precipitate) az oldható molekuláris antigén komplexének kialakulása és kicsapódása antitestekkel felhősség formájában, ún. kicsapódik. Az antigének és antitestek egyenértékű mennyiségben történő összekeverésével jön létre, amelyek közül az egyik feleslege csökkenti az immunkomplex képződésének szintjét. A kicsapási reakciót kémcsövekben (gyűrűs precipitációs reakció), gélekben, tápközegben stb. hajtják végre. A kicsapási reakció változatai félfolyékony agar- vagy agarózgélben, kettős immundiffúzióval Ouchterlony, radiap immunodiffúzió, immunoektroforezis satöbbi.

Gyűrűs kicsapódási reakció. A reakciót keskeny kicsapócsövekben hajtják végre: egy oldható antigént rétegeznek az immunszérumra. Az antigén és az antitestek optimális aránya esetén e két oldat határán átlátszatlan réteg képződik. csapadékgyűrű. Ha a reakcióban főtt és szűrt szövetkivonatokat használnak antigénként, akkor ezt a reakciót nevezik első hőkicsapási reakciónak (az a reakció, amelyben lépfene haptént mutatnak ki).

Ouchterlony kettős immundiffúziós reakció. A reakció felállításához vékony réteg olvasztott agargélt öntünk egy üveglapra, majd megszilárdulás után üregeket vágunk ki belőle. Az antigének és az immunszérumok külön kerülnek a gél üregeibe, amelyek egymás felé diffundálnak. A találkozási ponton egyenlő arányban fehér csík formájában csapadékot képeznek. A többkomponensű rendszerekben az antigéneket és antitesteket tartalmazó lyukak között több csapadékvonal jelenik meg; azonos AG-kban a csapadékvonalak egyesülnek; nem azonos AG-kban metszik egymást.

Radiális immundiffúziós reakció. Az olvadt agargéllel készült immunszérumot egyenletesen az üvegre öntjük. A gélben való megszilárdulás után lyukakat készítünk, amelyekbe az antigént különféle hígításokban helyezzük. Az antigén a gélbe diffundálva gyűrűs kicsapódási zónákat képez a lyukak körül az antitestekkel. A kicsapógyűrű átmérője arányos az antigénkoncentrációval. A reakciót különböző osztályú immunglobulinok, a komplementrendszer komponenseinek stb. meghatározására használják a vérszérumban.

Immunelektroforézis- az elektroforézis és az immunprecipitáció módszerének kombinációja: a gél üregeibe antigének keverékét vezetjük be, és a gélben elektroforézissel elválasztjuk, majd az elektroforézis zónáival párhuzamos horonyba immunszérumot adunk, amelynek antitestei bediffundálnak. a gélt és kicsapódási vonalakat képeznek az antigénnel való „találkozás” helyén.

Flokkulációs reakció(Ramon szerint) (a latin f1oecus - gyapjú pelyhek) - opálosodás vagy pelyhesedés (immunprecipitáció) megjelenése a kémcsőben a reakció során toxin - antitoxin vagy toxoid - antitoxin. Az antitoxikus szérum vagy toxoid aktivitásának meghatározására szolgál.

HLA gépelés- a humán fő hisztokompatibilitási komplex vizsgálata - HLA komplex. Ez a formáció magában foglalja a 6. kromoszómán lévő génekből álló régiót, amely különböző immunválaszokban részt vevő HLA antigéneket kódol.

Feladatok a HLA gépelés nagyon eltérő lehet - biológiai azonosítás (a HLA típus a szülői génekkel együtt öröklődik), a különböző betegségekre való hajlam meghatározása, a donorok kiválasztása szervátültetésre - ebben az esetben a donor és a recipiens szövetek HLA tipizálásának eredményeit hasonlítják össze. HLA-tipizálás segítségével megállapítható, hogy a házastársak mennyire hasonlóak vagy különbözőek a hisztokompatibilitási antigének tekintetében a meddőségi esetek diagnosztizálása érdekében.

A HLA tipizálás azt sugallja HLA polimorfizmus elemzésés két módszerrel - szerológiai és molekuláris genetikai - hajtják végre. A HLA tipizálás klasszikus szerológiai módszere mikrolimfocitotoxikus teszten alapul, a molekuláris módszer pedig PCR-t (polimeráz láncreakció) alkalmaz.

Szerológiai HLA gépelés izolált sejtpopulációkon végezzük. A fő hisztokompatibilitási komplex antigéneket főként limfociták hordozzák. Ezért a T-limfociták szuszpenzióját használják az I. osztályú antigének fő hordozóiként, és a B-limfociták szuszpenzióját a HLA II. osztályú antigének meghatározására. A szükséges sejtpopulációk teljes vérből történő izolálásához centrifugálást vagy immunmágneses elválasztást alkalmaznak. Úgy gondolják, hogy az első módszer hamis pozitív adatokhoz vezethet, mivel ez egyes sejtek elpusztulásához vezet. A második módszert specifikusabbnak ismerik el - a sejtek több mint 95%-a életképes marad.

De a limfocitotoxikus teszt elvégzésének alapja HLA gépelés egy specifikus szérum, amely a HLA I. és II. osztályú antigének különböző allélváltozatai ellen antitesteket tartalmaz. A szerológiai teszt meghatározhatja a HLA típusát annak vizsgálatával, hogy mely szérumok reagálnak a limfocitákra és melyek nem.

Ha reakció lép fel a sejtek és a szérum között, az eredmény egy antigén-antitest komplex képződése a sejt felszínén. A komplementet tartalmazó oldat hozzáadása után a sejt lízise és elpusztulása következik be. A szerológiai HLA tipizálási tesztet fluoreszcens mikroszkóppal értékelik a pozitív (vörös fluoreszcencia) és negatív (zöld fluoreszcencia) reakciók értékelésére, vagy fáziskontraszt mikroszkóppal az elhalt sejtek magjainak megfestésére. A HLA-tipizálás eredményét a reagált szérumok és az antigének keresztreagáló csoportjainak specifitásának, valamint a citotoxicitási reakció intenzitásának figyelembevételével határozzák meg.

A szerológiai hátrányai HLA gépelés keresztreakciók jelenléte, gyenge antitest-affinitás vagy HLA-antigének alacsony expressziója, fehérjetermékek hiánya számos HLA-génben.

Modernebb, molekuláris módszerek HLA gépelés már szabványosított szintetikus mintákat használnak, amelyek nem a leukociták felszínén lévő antigénekkel, hanem DNS-sel reagálnak, és közvetlenül jelzik, hogy mely antigének vannak jelen a mintában. A molekuláris módszerek nem igényelnek élő fehérvérsejteket, bármilyen emberi sejt tanulmányozható, és néhány mikroliter vér elegendő a működéshez, vagy korlátozódhat a száj nyálkahártyájáról való kaparásra.

Molekuláris genetika HLA gépelés PCR módszert alkalmaz, melynek első lépéseként tiszta genomiális DNS-t nyernek (teljes vérből, leukocita szuszpenzióból, szövetekből).

A DNS-mintát ezután lemásolják – in vitro amplifikálják egy specifikus HLA-lókuszra specifikus primerek (rövid egyszálú DNS) használatával. Az egyes primerpárok végeinek szigorúan komplementereknek kell lenniük az adott allélnak megfelelő egyedi szekvenciával, különben nem történik amplifikáció.

A PCR után az ismételt másolás során nagyszámú DNS-fragmentumot kapunk, amely vizuálisan értékelhető. Ehhez a reakcióelegyeket elektrolízisnek vagy hibridizációnak vetik alá, és egy program vagy táblázat segítségével meghatározzák, hogy történt-e specifikus amplifikáció. A HLA tipizálás eredményét átfogó jelentés formájában mutatjuk be gén- és allélszinten. A felhasznált minták szabványosítása miatt molekuláris HLA gépelés pontosabban szerológiai. Ezen kívül több információt (több új DNS-allélt) és nagyobb részletezést biztosít, mivel nemcsak az antigének azonosítását teszi lehetővé, hanem magukat az allélokat is, amelyek meghatározzák, hogy melyik antigén van jelen a sejten.

Immun lízis reakció. A reakció a specifikus antitestek azon képességén alapul, hogy immunkomplexeket képeznek a sejtekkel, beleértve a vörösvértesteket és a baktériumokat, ami a komplementrendszer aktiválásához vezet a klasszikus útvonal és a sejtlízis mentén. Az immunlízis reakciók közül leggyakrabban a hemolízis reakciót, a bakteriolízis reakciót ritkán alkalmazzák (főleg a kolera és a koleraszerű vibriók differenciálódásában).

Hemolízis reakció. A komplement jelenlétében az antitestekkel való reakció hatására a vörösvértestek zavaros szuszpenziója élénkvörös átlátszó folyadékká - „lakkvérré” alakul a hemoglobin felszabadulása miatt. A diagnosztikus komplementkötési reakció (FFR) felállításakor a hemolízis reakciót indikátorként használják: a szabad komplement jelenlétének vagy hiányának (fixációjának) tesztelésére.

Helyi hemolízis reakció a gélben(Erne reakció) a hemolízis reakció egyik változata. Lehetővé teszi az antitestképző sejtek számának meghatározását. Az antitesteket - hemolizineket - szekretáló sejtek számát a hemolízis plakkok száma határozza meg, amelyek vörösvértesteket, a vizsgált limfoid szövet sejtszuszpenzióját és komplementjét tartalmazó agargélen jelennek meg.

Immunfluoreszcens módszer

(RIF, immunfluoreszcens reakció) egy módszer specifikus Ag-k (Ab-k) kimutatására fluorokrómhoz konjugált Abs-ek (Ags) használatával. Nagy érzékenységgel és specifitással rendelkezik. Fertőzések expressz diagnosztizálására használják. betegségek (a kórokozó azonosítása a kutatási anyagban), valamint a leukociták Ab és felszíni receptorainak, markereinek meghatározására (immunfenotipizálás) és egyéb sejtek. Közvetlen I. m. fluorokrómmal konjugált specifikus Abs-t tartalmazó szövetmetszet vagy kóros anyagból vagy mikrobiális kéregből készült kenet feldolgozása; a készítményt mossuk, hogy megszabadítsuk a kötetlen Abs-től, és fluoreszcens mikroszkóp alatt vizsgáljuk. Pozitív esetekben egy izzó immunkomplex jelenik meg az objektum perifériáján. A szabályozás a nem specifikus lumineszcencia kizárása érdekében szükséges. Nál nél közvetett. Őket. az első szakaszban egy szövetmetszetet vagy kenetet nem fluoreszcens specifikus szerrel kezelnek, a másodikban - az első szakaszban használt állat -globulinjai elleni lumineszcens szerrel. Pozitív esetben egy világító komplexum keletkezik, amely Ar, At to és At ellen At (szendvics módszer) alkotja. A sejtek fenotipizálása során a fluoreszcens mikroszkóp mellett a RIF-et is figyelembe veszik. lézeres sejtválogató .

Áramlási citometria- a sejt paramétereinek, sejtszervecskéi és a benne lejátszódó folyamatok optikai mérésének módszere.

A technika magában foglalja a lézersugárból származó fény szóródásának detektálását, amikor egy sejt folyadékáramban áthalad rajta, és a fény diszperziós foka lehetővé teszi, hogy képet kapjunk a sejt méretéről és szerkezetéről. Ezenkívül az elemzés figyelembe veszi azon kémiai vegyületek fluoreszcenciájának szintjét, amelyek a sejt részét képezik (autofluoreszcencia), vagy amelyeket az áramlási citometria előtt adnak a mintához.

A fluoreszcens monoklonális antitestekkel vagy fluoreszcens festékekkel előre megjelölt sejtszuszpenzió belép az áramlási cellán áthaladó folyadékáramba. A feltételeket úgy választják ki, hogy a sejtek egymás után sorakoznak fel az ún. a sugár hidrodinamikus fókuszálása a sugárban. Abban a pillanatban, amikor egy cella keresztezi a lézersugarat, a detektorok rögzítik:

    fényszórás kis szögben (1°-tól 10°-ig) (ez a jellemző a cellák méretének meghatározására szolgál).

    fényszórás 90°-os szögben (lehetővé teszi a sejtmag/citoplazma arány, valamint a sejtek heterogenitásának és szemcsésségének megítélését).

    fluoreszcencia intenzitása több fluoreszcencia csatornán keresztül (2-től 18-20-ig) - lehetővé teszi a sejtszuszpenzió szubpopulációs összetételének meghatározását stb.

Agglutinációs reakció a Rhesus elleni antitestek meghatározásához (közvetett Coombs-teszt)alkalmaz intravascularis hemolízisben szenvedő betegeknél. E betegek egy részében anti-Rhesus antitesteket mutatnak ki, amelyek nem teljesek és egyértékűek. Kifejezetten kölcsönhatásba lépnek az Rh-pozitív eritrocitákkal, de nem okozzák agglutinációjukat. Az ilyen hiányos antitestek jelenlétét a közvetett Coombs-teszt határozza meg. Ehhez antiglobulin szérumot (humán immunglobulinok elleni antitestek) adnak az anti-Rh antitestek + Rh-pozitív eritrociták rendszeréhez, ami az eritrociták agglutinációját okozza. A Coombs-reakció segítségével immun eredetű eritrociták intravaszkuláris lízisével összefüggő kóros állapotokat diagnosztizálnak, például az újszülött hemolitikus betegségét: az Rh-pozitív magzat eritrocitái a vérben keringő Rh-faktorral szembeni hiányos antitestekkel kombinálódnak, amelyek Rh-negatív anyától jutott át a placentán.

Gépezet. A hiányos (monovalens) antitestek azonosításának nehézsége abból adódik, hogy ezek az antitestek egy specifikus antigén epitópjaihoz kötődve nem alkotnak rácsszerkezetet, és az antigének és antitestek közötti reakciót sem agglutináció, sem kicsapódás, vagy egyéb tesztek. A képződött antigén-antitest komplexek azonosításához további tesztrendszerek alkalmazása szükséges. A nem komplett antitestek kimutatására, például a vörösvértestek Rh-antigénjére egy terhes nő vérszérumában, a reakciót két lépésben hajtják végre: 1) Rh-antigént tartalmazó eritrocitákat adunk a tesztszérum kétszeres hígításaihoz, és tartjuk. 37 ° C-on egy órán át; 2) nyúl anti-humán anti-globulin szérumot (előtitrált munkahígításban) adunk az első lépés után alaposan megmosott eritrocitákhoz. 30 percig 37 °C-on végzett inkubálás után az eredményeket a hemagglutináció jelenléte alapján értékeljük (pozitív reakció). Szükséges ellenőrizni a reakció összetevőit: 1) antiglobulin szérum + vörösvértestek, amelyekről ismert, hogy specifikus antitestekkel érzékenyek; 2) normál szérummal + antiglobulin szérummal kezelt eritrociták; 3) A tesztszérummal kezelt Rh-negatív eritrociták + antiglobulin szérum.

50. Passzív hemagglutinációs reakció. Gépezet. Alkatrészek. Alkalmazás.

Közvetett (passzív) hemagglutinációs reakció(RNGA, RPGA) olyan vörösvértestek (vagy latex) felhasználásán alapul, amelyek felületükön adszorbeált antigéneket vagy antitesteket tartalmaznak, amelyek kölcsönhatása a betegek vérszérumának megfelelő antitesteivel vagy antigénjeivel az eritrociták összetapadását és a véralvadás aljára hullását okozza. kémcső vagy cella csipkézett üledék formájában.

Alkatrészek. Az RNGA végrehajtásához juhok, lovak, nyulak, csirkék, egerek, emberek és mások eritrocitái használhatók, amelyeket későbbi felhasználás céljából formaldehiddel vagy glutáraldehiddel kezelve tárolnak. Az eritrociták adszorpciós kapacitása megnő, ha tannin- vagy króm-klorid oldattal kezelik őket.

Az RNGA antigének mikroorganizmusok poliszacharid antigénjeként, bakteriális vakcinák kivonataként, vírusok és rickettsiák antigénjeként, valamint más anyagokként szolgálhatnak.

A magas vérnyomás által érzékenyített vörösvértesteket vörösvértest-diagnosztikának nevezik. Vörösvérsejt-diagnosztika készítéséhez leggyakrabban olyan birka eritrocitákat használnak, amelyek nagy adszorbeáló aktivitással rendelkeznek.

Alkalmazás. Az RNGA-t fertőző betegségek diagnosztizálására, a gonadotrop hormon meghatározására a vizeletben a terhesség megállapítása során, a gyógyszerekkel, hormonokkal szembeni túlérzékenység azonosítására és néhány más esetben használják.

Gépezet. Az indirekt hemagglutinációs teszt (IRHA) szignifikánsan nagyobb szenzitivitással és specificitással rendelkezik, mint az agglutinációs teszt. A kórokozó azonosítására szolgál antigén szerkezete alapján, vagy bakteriális termékek – toxinok – jelzésére és azonosítására a vizsgált kóros anyagban. Ennek megfelelően a szokásos (kereskedelmi) eritrocita antitest diagnosztikát alkalmazzák, amelyet specifikus antitestek cserzett (tanninnal kezelt) eritrociták felületén történő adszorpciójával nyernek. A vizsgált anyagból sorozathígításokat készítenek a műanyag lemezek üregeiben. Ezután minden üregbe azonos térfogatú, 3%-os antitesttel töltött vörösvértest-szuszpenziót adunk. Ha szükséges, a reakciót párhuzamosan hajtjuk végre több sor üregben, különböző csoportspecifitású antitestekkel töltött eritrocitákkal.

2 órás, 37 °C-on történő inkubálás után az eredményeket figyelembe veszik, értékelve a vörösvérsejt-üledék megjelenését (rázás nélkül): negatív reakció esetén az üledék kompakt lemez vagy gyűrű formájában jelenik meg a kút alján pozitív reakció esetén a vörösvértestek jellegzetes csipkés üledéke jelenik meg, vékony film egyenetlen szélekkel.