Sastojci neophodni za postavljanje RSC-a i njihovo dobijanje. Reakcija fiksacije komplementa (CRF). Postavljanje glavnog eksperimenta RSK Bordet - Zhangou

Posebna prednost RSC-a je u tome što priroda antigena uključenog u njega (korpuskularnog ili rastvorljivog) nije bitna, budući da se komplement vezuje za Fc fragment bilo kog antitela povezanog sa IgG i IgM, bez obzira na njegovu specifičnost antitela. Osim toga, RSA je vrlo osjetljiv: omogućava vam da otkrijete količinu antitijela 10 puta manju nego, na primjer, u reakciji precipitacije. RSC su 1901. predložili J. Bordet i O. Zhang. Zasniva se na dva svojstva komplementa:

1) sposobnost vezivanja za kompleks "antigen + antitelo";

2) liza crvenih krvnih zrnaca koja se koriste za dobijanje hemolitičkog seruma.

RSK se izvodi u dvije faze, a u njega su uključena dva sistema - eksperimentalni, odnosno dijagnostički i indikatorski. Dijagnostički sistem se sastoji od testnog (ili dijagnostičkog) seruma, koji se zagrijava na 56 °C 30 minuta prije nego što se izvrši reakcija za inaktivaciju komplementa i antigena koji su prisutni u njemu.

Ovom sistemu se dodaje standardni dodatak. Njegov izvor je svježa ili sušena surutka zamorca. Smjesa je inkubirana na 37 °C jedan sat. Ako test serum sadrži antitijela, ona će stupiti u interakciju s dodanim antigenom, a rezultirajući kompleksi “antigen + antitijelo” će vezati dodani komplement. Ako u serumu nema antitijela, neće doći do stvaranja kompleksa antigen + antitijelo, a komplement će ostati slobodan.

Obično nema vidljivih manifestacija fiksacije komplementa u ovoj fazi reakcije. Stoga, da bi se razjasnilo pitanje da li je došlo do fiksacije komplementa ili ne, dodaje se drugi indikatorski sistem (inaktivirani hemolitički serum + ovčja crvena krvna zrnca) i mješavina svih RSC komponenti se ponovo inkubira na 37 °C 30-60 minuta. , nakon čega se procjenjuju rezultati reakcije. Pomoću pametnog telefona (kao što je ovaj) možete izračunati tačno vrijeme reakcije. Ako je komplement vezan u prvoj fazi, u dijagnostičkom sistemu, tj. postoje antitela u serumu pacijenta, a komplement je vezan kompleksom „antitelo + antigen“, neće doći do lize crvenih krvnih zrnaca – eritrociti su pozitivni: tečnost je bezbojna, na dnu epruvete se nalazi sediment crvenih krvnih zrnaca

Ako u serumu nema specifičnih antitijela i ne dođe do vezivanja komplementa u dijagnostičkom sistemu, tj. RSC je negativan, tada se komplement nepotrošen u dijagnostičkom sistemu vezuje za kompleks “crvena krvna zrnca + antitijela” indikatorskog sistema i dolazi do hemolize: u epruveti „lakirana krv“ nema sedimenta crvenih krvnih zrnaca. Intenzitet RSC se procjenjuje korištenjem četverostrukog sistema u zavisnosti od stepena kašnjenja hemolize i prisustva sedimenta eritrocita. Reakcija je praćena odgovarajućim kontrolama: kontrola seruma (bez antigena) i kontrola antigena (bez seruma), jer neki serumi i neki antigeni imaju antikomplementarno djelovanje. Prije izvođenja RSC, sve komponente koje su uključene u njega, osim test seruma ili antigena, podliježu pažljivoj titraciji.

Posebno je važno u reakciju uvesti tačnu dozu komplementa, jer njegov nedostatak ili višak može dovesti do lažnih rezultata. Titar komplementa je minimalna količina koja, u prisustvu radne doze hemolitičkog seruma, osigurava potpuno otapanje crvenih krvnih zrnaca. Za izvođenje glavnog eksperimenta uzmite dozu komplementa povećanu za 20-25% u odnosu na utvrđeni titar. Titar hemolitičkog seruma je njegovo maksimalno razrjeđenje, koje, kada se pomiješa sa jednakom zapreminom 10% otopine komplementa, potpuno hemolizira odgovarajuću dozu crvenih krvnih stanica u roku od 1 sata na temperaturi od 37 °C.

Reakcija indirektne hemolize koristi se kao ubrzana metoda za otkrivanje specifičnih antitijela. Crvena krvna zrnca se koriste kao nosioci antigena. Ako u pacijentovom serumu postoje specifična antitijela, senzibilizirana crvena krvna zrnca se liziraju u prisustvu komplementa.

Reakcija fiksacije komplementa (CFR) koristi se za otkrivanje antitijela na određeni antigen ili određivanje tipa antigena korištenjem poznatog antitijela. Ovo je složena serološka reakcija koja uključuje dva sistema i komplementar. Prvi sistem je bakteriološki (osnovni), sastoji se od antigena i antitela (jedno je poznato, drugo nije). Drugi sistem je hemolitički (indikatorski). Uključuje ovčije crvena krvna zrnca (antigen) i odgovarajući hemolitički serum (antitijela). RSC se primjenjuje u dvije faze: prvo se kombinuje antigen sa serumom krvi za ispitivanje, u kojem se traži antitijelo, a zatim se dodaje komplement. Ako se antigen i antitijelo podudaraju, formira se imuni kompleks koji vezuje komplement. U nedostatku antitijela u serumu, imunološki kompleks se ne formira i komplement ostaje slobodan. Pošto je proces adsorpcije komplementa od strane kompleksa vizuelno nevidljiv, dodaje se hem sistem da bi se identifikovao ovaj proces. Reakcija se uzima u obzir na sljedeći način. Ako se komplement vezao u prvom (baksistemu), onda kada se doda hemesistem neće doći do hemolize eritrocita - reakcija je pozitivna. Ako se komplement ne veže u prvom sistemu zbog nedostatka antitela, tada će kontaktirati hem sistem, što će rezultirati hemolizom crvenih krvnih zrnaca – negativnom reakcijom.

Antigeni za RSC se pripremaju od ubijenih i uništenih mikroba, najčešće ekstrakcijom.

RSC se široko koristi za dijagnozu bruceloze, žlijezde, rikecioze, slinavke i šapa i mnogih drugih.

Dugotrajna reakcija fiksacije komplementa (LDCR). Ovo je varijanta uobičajenog RSC-a, ali se razlikuje po tome što prva faza reakcije traje 16-18 sati na hladnom (4°C). U takvim uslovima, u prvom sistemu u kompleksu antigen-antitelo-komplement, kriofilna (hladna) antitela se dodatno vezuju, što povećava osetljivost reakcije. Ova opcija se koristi za dijagnosticiranje bruceloze, kampilobakterioze itd.

Reakciju fiksacije komplementa (CFR) prvi su opisali Bordet i Zhangou (1901). Za razliku od RA i RP, kod CSC se kombinacija antigena sa antitijelom manifestira samo u prisustvu treće komponente – komplementa.

Reakcija formiranja kompleksa, Antigen - antite Lo - dopuna - nevidljiva. Za identifikaciju navedene interakcije reakcionih komponenti koristi se dodatni sistem indikatora, koji svojom jasnoćom ispoljavanja indirektno odražava rezultat interakcije u prvom sistemu. Dakle; U RSC su uključena dva sistema: 1) bakteriolitički (dijagnostički) i 2) hemolitički (pomoćni indikator), koji omogućava da se utvrdi da li je u prvom sistemu došlo do fiksacije komplementa. Ranije se kao antigen koristila suspenzija bakterija, au pozitivnim slučajevima dolazila je do njihove lize (bakteriolize), pa je prvi sistem nazvan bakteriolitički. Shodno tome, RSC se zasniva na dva fenomena - bakteriolizi i hemolizi.

RSC se izvodi u dvije faze. Prvo se priprema bakteriolitički sistem - 0,5 ml testiranog inaktiviranog seruma sa antigenom se pomeša u epruvete, doda se komplement u strogo određenoj količini (titar). Mešavina antigen - antitelo (serum) - komplement (bakteriolitički sistem) stavlja se u vodeno kupatilo (ili termostat) na 37-38°C na 20-40 minuta. Zatim se prelazi na drugu fazu reakcije - komponente drugog hemolitičkog sistema se dodaju u sve epruvete i ponovo stavljaju u vodeno kupatilo na 15-20 minuta. Zatim se uzima u obzir preliminarni rezultat (da li je hemoliza ili ne), ostavlja se na sobnoj temperaturi do sljedećeg dana i vrši se konačno brojanje RSC. Odsustvo hemolize (pozitivan dijagnostički rezultat) ukazuje na to da test serum sadrži antitela specifična za uzeti antigen, da se u prvom sistemu formirao kompleks antigen-antitelo, a komplement se vezao. Dodaju se komponente drugog sistema - hemolizin i eritrociti, koji su jedni u odnosu na druge takođe antigen (eritrociti) i antitelo (hemolizin) i međusobno deluju u prisustvu komplementa. Ako u test serumu nema antitela specifičnih za uzeti antigen, kompleks antigen-antitelo se ne formira i komplement se ne adsorbuje u prvom bakteriolitičkom sistemu i ostaje slobodan u epruveti, onda kada je drugi (hemolitički) sistem Dodatno, komplement stupa u interakciju sa kompleksom antigen-antitijelo (hemolizin – crvena krvna zrnca) i dolazi do hemolize (lize crvenih krvnih zrnaca). Dijagnostički rezultat je negativan. Dakle, u RSC je uključeno 5 komponenti: antigen, antitelo (test serum), komplement, hemolizin, suspenzija eritrocita ovaca. Za razrjeđivanje svih komponenti koristi se medij elektrolita - fiziološki rastvor NaC1.

Za obavljanje RSC u dijagnostičkoj laboratoriji potrebno je sljedeće: uzorci seruma životinja koje je laboratorija primila na ispitivanje; dva seruma za koja se zna da su pozitivna (standardni, hiperimuni, daju pozitivan rezultat - za kontrolu) i dva normalna seruma od zdravih životinja - također za kontrolu (svi serumi u razrjeđenju 1:10 se inaktiviraju kako bi uništili vlastiti komplement zagrijavanjem u vodeno kupatilo na 56–58 ° Od 30 min); antigen razrijeđen prema titru (označen biofabrikom na pakovanju); komplement (serum zamorca) razrijeđen prema utvrđenom titru (tokom titracije); hemolizin u radnom titru; suspenzija ovčijih eritrocita razrijeđena 1:40, fiziološki rastvor, graduirane pipete različitog kapaciteta, epruvete, stalci, vodeno kupatilo, gumene sijalice.

Test fiksacije komplementa (FFR) je serološki test koji je uporediv po osjetljivosti na metode precipitacije, aglutinacije i neutralizacije. RSK je metoda koja koristi dva sistema antigen-antitijelo:

prvi je specifičan;

drugi je indikator (hemolitički).

Za izvođenje RSC potrebno je 5 komponenti: antigen koji se dijagnosticira, dijagnostička antitijela, indikatorski antigen (crvena krvna zrnca ovaca), indikatorska antitijela (hemolizini zeca), komplement.

Specifičnu interakciju antigena i antitijela prati vezivanje komplementa. Dobiveni kompleks se ne pojavljuje vizualno. Hemolitički sistem se koristi kao indikator. Hemolitički serum senzibilizira crvena krvna zrnca na djelovanje komplementa, u čijoj prisutnosti dolazi do lize crvenih krvnih stanica (hemoloze). Ako nema hemolize, tada je komplement vezan prvim sistemom, pa stoga antigen u njemu odgovara antitelu - pozitivan odgovor. Ako se antitijelo ne poklapa s antigenom, kompleks se ne formira i komplement se, ostajući slobodan, spaja sa drugim sistemom, uzrokujući hemolizu - negativnu reakciju.

Za izvođenje RSC, svi sastojci reakcije se pripremaju i titriraju prije glavnog eksperimenta.

Serum (pacijentski ili dijagnostički) uoči reakcije zagrijava se u vodenom kupatilu na temperaturi od 56ºC 30 minuta kako bi se inaktivirao vlastiti komplement. Neki serumi, posebno od imuniziranih životinja, imaju antikomplementarna svojstva, tj. sposobnost fiksiranja komplementa u odsustvu homolognog antigena. Antikomplementarnost se eliminiše tretiranjem ugljičnim dioksidom, zagrijavanjem na temperaturi od 57-58ºC, jednom smrzavanjem na temperaturi od -20ºC ili -70ºC i uklanjanjem sedimenta centrifugiranjem, dodavanjem komplementa serumu u količini od 1: 10 seruma i zagrijavanje nakon inkubacije na hladnom 18-20 sati Da bi se spriječila antikomplementarnost seruma, oni se čuvaju liofilizirani ili zamrznuti na niskim temperaturama.

Antigen za CSC mogu biti kulture različitih ubijenih mikroorganizama, njihovi lizati, komponente bakterija, patološki izmijenjeni i normalni organi, lipidi tkiva, virusi i materijali koji sadrže viruse. Mnogi antigeni iz mikroorganizama se dobijaju industrijski. Antikomplementarnost antigena eliminiše se metodama kao što su termoliza (višestruko zamrzavanje i odmrzavanje), tretman otapalima masti (eter, hloroform, aceton), alkoholima (metanol, etanol) itd.

Serum zamorca uzet neposredno prije eksperimenta se koristi kao dopuna; Može se koristiti i suvi komplementar. Da bi se dobio glavni rastvor za naknadnu titraciju, komplement se razblaži 1:10 sa izotoničnim rastvorom natrijum hlorida.

Ovčja crvena krvna zrnca se koriste kao suspenzija u izotoničnoj otopini natrijum hlorida. Krv (100-150 ml) se uzima iz jugularne vene, stavlja u sterilnu teglu sa staklenim perlama, defibrinira se mućkanjem 10-15 minuta i filtrira kroz 3-4 sloja sterilne gaze da bi se uklonio fibrin. Crvena krvna zrnca se isperu 3 puta izotoničnom otopinom natrijum hlorida, dodajući se sedimentu crvenih krvnih zrnaca do prvobitnog volumena krvi. Crvena krvna zrnca mogu se čuvati 5-6 dana na temperaturi od 4-6ºC. Rok trajanja crvenih krvnih zrnaca se produžava kada se čuvaju formaldehidom.

Hemolitički serum za RSC se dobija na sledeći način: Imunizirati zečeve ubrizgavanjem u ušnu venu sa 50% suspenzijom ispranih crvenih krvnih zrnaca ovaca (1 ml 4-6 puta svaki drugi dan). 7 dana nakon posljednje injekcije, uzima se test serum. Ako titar seruma nije niži od 1:1200, tada se vrši puštanje krvi. Serum se zagrijava 30 minuta na temperaturi od 56ºC. Da bi se spriječio razvoj bakterija, hemolitičkom serumu se dodaje konzervans (mertiolat 1:10000 ili 1 borna kiselina).

Hemolitički sistem se sastoji od pomiješanih u jednakim količinama hemolitičkog seruma (uzetog u trostrukom titru) i 3 suspenzije ovčijih eritrocita. Za senzibilizaciju eritrocita hemolizinima, smjesa se drži u termostatu na temperaturi od 37ºC 30 minuta.

Titracija hemolitičkog seruma. Serum se titrira mešanjem 0,5 ml (u razblaženjima 1:600, 1:1200, 1:1600, 1:3200, itd.) sa 0,5 ml 3 suspenzije crvenih krvnih zrnaca i 0,5 ml svežeg komplementa u razblaživanje 1:10. Volumen reakcione smjese u kontrolnim epruvetama se podešava na 1,5 ml dodavanjem izotonične otopine natrijum hlorida. Rezultati reakcije se uzimaju u obzir nakon 1 sata inkubacije na temperaturi od 37ºC. Smatra se da je titar hemolitičkog seruma njegovo najveće razrjeđenje koje uzrokuje potpunu hemolizu. Serum se čuva u liofilizovanom obliku.

Šema titracije hemolitičkog seruma

Titracija komplementa. Prije eksperimenta, glavni rastvor komplementa (1:10) se sipa u red epruveta od 0,05 do 0,5 ml i u svaku se doda izotonični rastvor natrijum hlorida, čime se volumen tečnosti dovede do 1,5 ml. Epruvete se stavljaju u termostat na temperaturi od 37ºC na 45 minuta, zatim im se dodaje hemolitički sistem i drži u termostatu 30 minuta, nakon čega se određuje titar komplementa.

Za eksperiment uzmite radnu dozu komplementa (sadržanu u zapremini od 0,5 ml), koja je 20-30% veća od titra.

Šema titracije komplementa

Termostat na 37ºC 45 minuta

Termostat na 37ºC 30 minuta

Titracija antigena. Antigeni koji se koriste za RSC mogu adsorbirati određenu količinu komplementa, tj. imaju antikomplementarna svojstva. Stoga se prije izvođenja eksperimenta titriraju antigeni u prisustvu radne doze komplementa. U manjoj mjeri, antikomplementarna svojstva su izražena u specifičnim antigenima proizvedenim industrijski. Njihov titar se određuje ne prije svakog eksperimenta, već jednom mjesečno, uzimajući u obzir mogućnost njegovog smanjenja tokom skladištenja.

Da bi se odredio titar antigena, sipa se u niz epruveta u smanjenim količinama od 0,5 do 0,05 ml, dovodeći volumen do 1 ml dodavanjem rastvora natrijum hlorida. Zatim se u svaku epruvetu doda 0,5 ml radne doze komplementa i stavi u termostat na 1 sat na temperaturi od 37ºC. Nakon toga se u sve epruvete dodaje po 1 ml hemolitičkog sistema, ponovo drži u termostatu 1 sat, a rezultati reakcije se uzimaju u obzir.

Titar antigena se smatra najmanjom količinom pri kojoj dolazi do potpune hemolize. Za RSC se koristi radna doza antigena, koja je približno 1/2-1/3 titra. Antigeni u prisustvu kojih se titar komplementa smanjuje za više od 30% su neprikladni za reakciju.

Šema titracije antigena

Termostat na 37ºC 1 sat

Termostat na 37ºC 1 sat

Provođenje glavnog eksperimenta DSC-a. Ukupna zapremina reakcionih sastojaka je 2,5 ml, zapremina radne doze svakog od njih je 0,5 ml. Serum u odgovarajućem razblaženju, antigen i komplement se dodaju u prvu epruvetu, serum u odgovarajućem razblaženju, komplement i izotonični rastvor natrijum hlorida (kontrola seruma) se dodaju u drugu epruvetu, antigen, komplement i izotonični rastvor natrijum hlorida (kontrola antigena ) se dodaju u treću epruvetu. Istovremeno pripremite hemolitički sistem mešanjem 2 ml hemolitičkog seruma u trostrukom titru (u odnosu na onaj koji je naveden u uputstvu) i 3% suspenzije ovčijih eritrocita (u odnosu na prvobitni volumen krvi). Epruvete se drže u termostatu na temperaturi od 37ºC 1 sat, a zatim se u prve 3 epruvete (prvi sistem) (drugi sistem) dodaje 1 ml hemolitičkog sistema. Nakon temeljnog miješanja sastojaka, epruvete se ponovo stavljaju u termostat na 1 sat na temperaturi od 37ºC.

Šema izvođenja glavnog eksperimenta RSK

Termostat na 37ºC 1 sat

Termostat na 37ºC 1 sat

Rezultati reakcije se uzimaju u obzir preliminarno - nakon vađenja epruveta iz termostata i na kraju - nakon 15-18 sati boravka u frižideru ili na sobnoj temperaturi.

U konačnom obračunu, intenzitet reakcije se izražava plusovima: (++++) - oštro pozitivna reakcija, karakterizirana potpunim kašnjenjem hemolize (tečnost u epruveti je bezbojna, sva crvena krvna zrnca se talože na dno); (+++, ++) – pozitivna reakcija, koja se manifestuje povećanom bojom tečnosti usled hemolize i smanjenjem broja crvenih krvnih zrnaca u sedimentu; (+) – slabo pozitivna reakcija (tečnost je intenzivno obojena, na dnu epruvete je mala količina crvenih krvnih zrnaca). Uz negativnu reakciju (–), uočava se potpuna hemoliza, tekućina u epruveti ima intenzivnu ružičastu boju (lakirana krv).

Predloženo je više modifikacija RSC-a, koje karakterizira povećana osjetljivost i manji volumen korištenih sastojaka. Na primjer, u virološkim studijama, volumen sastojaka za RSC na hladnom je 1 ml. Za kap po kap RSC uzmite 1 kap seruma + 1 kap antigena + 1 kap komplementa + 2 kapi hemolitičkog sistema.

Reakcija vezivanja komplimenta najčešće se koristi u mikrobiološkoj i serološkoj dijagnostici.

Koristeći RSC, antitijela koja fiksiraju komplement otkrivaju se u krvnom serumu pacijenata sa sifilisom, žlijezdom, kroničnom gonorejom, rikeciozom, virusnim oboljenjima itd.

CSC je od posebnog interesa za kliničku imunologiju. Reakcija se koristi za izolaciju različitih subpopulacija limfocita, za detekciju HLA antigena na trombocitima, transplantabilnih limfoblasta, fibroblasta, tumorskih ćelija i trombocit-specifičnih antigena, kao i odgovarajućih antitela.

reakcija fiksacije komplementa , RSK, reakcija BordetZhanga [nazvan po Belgijancu. bakteriolozi J. Bordet i O. Gengou, 1901], vrlo specifična i vrlo osjetljiva serološka reakcija zasnovana na svojstvu kompleksa antigen-antitijelo da fiksira slobodni komplement (), korištena u dijagnostici mnogih bakterijskih i virusnih i nekih protozoa i helmintičke bolesti, kao i za proučavanje procesa praćenih promjenama u količini antigena ili antitijela. RSC teče u 2 faze: 1) interakcija antitela, antigena i komplementa, usled čega se slobodni komplement vezuje za nastali kompleks antigen-antitelo (specifična faza); 2) indikacija reakcije senzibilizirane eritrocitima (nespecifična faza). RSC koristi 2 sistema: specifični bakteriološki sistem, koji se sastoji od antitela (test seruma), antigena i komplementa, kao i nespecifičnog „indikatorskog“ sistema koji sadrži hemolizin (hemolitički serum) i suspenziju eritrocita ovaca. Antigen se kombinuje sa antitelom samo u prisustvu komplementa. Ako test serum sadrži antitijela homologna uzetom antigenu, tada se komplement prisutan u reakcijskoj smjesi adsorbira nastalim kompleksom antigen × antitijelo i gubi sposobnost da lizira senzibilizirana crvena krvna zrnca, odnosno, bez komplementa, hemolizin (hemolitičko antitijelo ) ne uništava crvena krvna zrnca (reakcija je pozitivna). U slučajevima kada ne postoji specifična veza između antigena i antitijela test seruma, kompleks se ne formira i komplement ostaje u slobodnom stanju. Prilikom dodavanja hemolitičkog sistema u ovom slučaju, nevezani komplement izaziva hemolizu senzibiliziranih crvenih krvnih zrnaca (negativna reakcija). Postoje različite opcije za stadijum RSC: klasična metoda stajdžiranja u obliku makro- i mikrovarijanti, reakcija dugotrajne fiksacije komplementa (LDST) na hladnoći, metoda kvantitativne RSC zasnovana na 50% hemolizi senzibiliziranih eritrocita, itd. U veterinarskoj dijagnostičkoj praksi češće se koristi klasična RSC metoda kao makro opcija, u kojoj se uzima 0,5 ili 0,25 ml svake komponente u određenom radnom titru. Komplement se titrira u bakteriološkom sistemu koristeći serume iste vrste životinja čija se krv ispituje. Test serumi se obično testiraju u razrjeđenjima od 1:5 i 1:10 sa antigenom i 1:5 bez antigena (kontrola). Vrijeme fiksacije komplementa u specifičnoj fazi je 20 minuta, vrijeme reakcije hemolize u nespecifičnoj fazi je 20 minuta na t 3738ºC. Za dijagnosticiranje niza bolesti koristi se osjetljivija metoda, DSCT. U ovom slučaju, prva faza reakcije se provodi na t 46ºC tokom 1618 sati, što dovodi do povećane adsorpcije komplementa malim količinama antigena i antitijela. Zatim se dodaje hemolitički sistem i reakcija se nastavlja na t 3738ºC 20 min. Rezultati RSK i RDSC se uzimaju u obzir prema stepenu kašnjenja hemolize, koji je označen križićima ili minusima, što odgovara sljedećim procentima hemolize eritrocita: ++++ od 0 do 10%; +++ od 10 do 40%; ++ od 40 do 70%; + od 70 do 90%; od 90 do 100%. Veterinarsko zakonodavstvo daje posebna uputstva za formulisanje, evidentiranje i evaluaciju RSC i RDSK za svaku bolest posebno.

književnost:
Laboratorijska istraživanja u veterinarskoj medicini, M., 1971;
Vodič za imunologiju, ur. O. E. Vyazova i Sh Khodzhaeva, M., 1973.

Veterinarski enciklopedijski rječnik. - M.: "Sovjetska enciklopedija". Glavni i odgovorni urednik V.P. Shishkov. 1981 .

Pogledajte šta je "" u drugim rječnicima:

Reakcija fiksacije komplementa- (RSK) serol. reakcija koja se koristi za kvantitativno određivanje Abs i Ags koji fiksiraju komplement. Princip RSC-a je da specifični imuni kompleks u potpunosti ili djelomično adsorbira C dodat u sistem. Mikrobiološki rječnik

reakcija fiksacije komplementa- Laboratorijska metoda RSK. [Englesko-ruski pojmovnik osnovnih pojmova u vakcinologiji i imunizaciji. Svjetska zdravstvena organizacija, 2009] Teme vakcinologija, imunizacija Sinonimi RSC EN test fiksacije komplementaCFTCF test ... Vodič za tehnički prevodilac

Reakcija fiksacije komplementa- I Reakcija fiksacije komplementa je serološka reakcija koja se koristi za određivanje antigena ili antitela, na osnovu procene potrošnje (fiksacije) komplementa kompleksima antigen-antitelo, vidi Imunološke metode istraživanja. II...... Medicinska enciklopedija

reakcija fiksacije komplementa- rus reakcija (g) fiksacije komplementa, reakcija (g) Bordet Zhangou; reakcija (g) odbacivanje komplementa; reakcija fiksacije alexina (g) eng test fiksacije komplementa fra réaction (f) de fixation du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) spa… …

reakcija fiksacije komplementa- (RSK), visoko osjetljiva i specifična serološka reakcija koja se koristi za dijagnozu mnogih zaraznih i invazivnih bolesti životinja. Sastoji se od dvije uzastopne faze. U prvoj fazi antigen se pomeša sa test serumom i... ... Poljoprivreda. Veliki enciklopedijski rečnik

reakcija fiksacije komplementa- (RSK; sinonim: Bordet Zhangu reakcija, reakcija odbacivanja komplementa zastarjela, reakcija fiksacije aleksina zastarjela) metoda serološkog istraživanja zasnovana na sposobnosti nastalog kompleksa antigen-antitijelo da veže komplement, što se detektuje... Veliki medicinski rječnik- rus reakcija (g) fiksacije komplementa, reakcija (g) Bordet Zhangou; reakcija (g) odbacivanje komplementa; reakcija fiksacije alexina (g) eng test fiksacije komplementa fra réaction (f) de fixation du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) spa… … Sigurnost i zdravlje na radu. Prevod na engleski, francuski, njemački, španski

Reakcija fiksacije komplementa- vidi reakcija fiksacije komplementa. (

Laboratorijska dijagnoza gotovo svih zaraznih bolesti temelji se na identifikaciji antitijela u krvi pacijenta koja se stvaraju protiv antigena patogena serološkim reakcijama. U medicinsku praksu ušli su od kasnog devetnaestog do početka dvadesetog vijeka.

Razvoj nauke pomogao je da se utvrdi antigena struktura mikroba i hemijske formule njihovih toksina. To je omogućilo stvaranje ne samo terapijskih, već i dijagnostičkih seruma. Dobivaju se ubrizgavanjem oslabljenih patogena u laboratorijske životinje. Nakon nekoliko dana inkubacije, od krvi zečeva ili miševa se pripremaju preparati koji se koriste za identifikaciju mikroba ili njihovih toksina serološkim testovima.

Vanjska manifestacija takve reakcije ovisi o uvjetima njezine proizvodnje i stanju antigena u krvi pacijenta. Ako su mikrobne čestice netopive, one se talože, liziraju, vežu ili imobiliziraju u serumu. Ako su antigeni topljivi, dolazi do pojave neutralizacije ili precipitacije.

Reakcija aglutinacije (RA)

Serološka reakcija aglutinacije je vrlo specifična. Jednostavan je za izvođenje i dovoljno vizualan da brzo utvrdi prisustvo antigena u krvnom serumu pacijenta. Koristi se za izvođenje Widal reakcije (dijagnoza trbušnog tifusa i paratifusa) i Weiglove reakcije (tifusna groznica).

Zasnovan je na specifičnoj interakciji između ljudskih antitijela (ili aglutinina) i mikrobnih ćelija (aglutenogena). Nakon njihove interakcije nastaju čestice koje se talože. Ovo je pozitivan znak. Živi ili ubijeni mikrobni agensi, gljive, protozoe i somatske ćelije mogu se koristiti za insceniranje reakcije.

Hemijski, reakcija je podijeljena u dvije faze:

1. Specifična kombinacija antitijela (AT) sa antigenima (AG).
2. Nespecifično - precipitacija AG-AT konglomerata, odnosno stvaranje aglutinata.

Indirektna reakcija aglutinacije (IAR)

Za njegovo izvođenje koriste se pročišćeni ovčji eritrociti i ljudska crvena krvna zrnca, prethodno tretirana antitijelima ili antigenima (ovo ovisi o tome što laboratorijski tehničar tačno želi pronaći). U nekim slučajevima, ljudska crvena krvna zrnca se liječe imunoglobulinima. Serološke reakcije eritrocita smatraju se uspješnim ako se slegnu na dno epruvete. O pozitivnoj reakciji možemo govoriti kada su ćelije raspoređene u obliku obrnutog kišobrana, koji zauzima cijelo dno. Negativna reakcija se računa ako se crvena krvna zrnca smjeste u stupac ili u obliku dugmeta u sredini dna.

Reakcija precipitacije (RP)

Serološki testovi ovog tipa koriste se za otkrivanje ekstremno malih čestica antigena. To mogu biti, na primjer, proteini (ili njihovi dijelovi), spojevi proteina s lipidima ili ugljikohidratima, dijelovi bakterija i njihovi toksini.

Serumi za reakciju se dobivaju umjetnom zarazom životinja, obično zečeva. Koristeći ovu metodu, možete dobiti apsolutno bilo koji precipitirajući serum. Proizvodnja seroloških reakcija precipitacije je po mehanizmu djelovanja slična reakcijama aglutinacije. Antitijela sadržana u serumu kombinuju se s antigenima i formiraju velike proteinske molekule koje se talože na dnu epruvete ili na supstrat (gel). Ova metoda se smatra vrlo specifičnom i može otkriti čak i male količine supstance.

Koristi se za dijagnostiku kuge, tularemije, antraksa, meningitisa i drugih bolesti. Osim toga, uključen je u sudsko-medicinski pregled.

u gelu

Serološke reakcije se mogu izvesti ne samo u tečnom mediju, već iu agar gelu. Ovo se zove metoda difuzne precipitacije. Uz njegovu pomoć proučava se sastav složenih antigenskih mješavina. Ova metoda se zasniva na hemotaksiji antigena na antitijela i obrnuto. U gelu se kreću jedni prema drugima različitim brzinama i, susrećući se, formiraju linije padavina. Svaka linija je jedan set AG-AT.

Reakcija neutralizacije egzotoksina sa antitoksinom (RN)

Antitoksični serumi mogu neutralizirati djelovanje egzotoksina koji proizvode mikroorganizmi. Ove serološke reakcije se temelje na tome. Mikrobiologija koristi ovu metodu za titriranje seruma, toksina i toksoida, kao i za određivanje njihove terapeutske aktivnosti. Jačina neutralizacije toksina određena je konvencionalnim jedinicama - AE.

Osim toga, zahvaljujući ovoj reakciji moguće je odrediti vrstu ili vrstu egzotoksina. Koristi se za difteriju, botulizam. Studija se može izvesti i "na staklu" i u gelu.

Reakcija lize (RL)

Imuni serum koji ulazi u tijelo pacijenta ima, pored svoje glavne funkcije pasivnog imuniteta, i svojstva lize. Sposoban je da otapa mikrobne agense, strane stanične elemente i viruse koji ulaze u tijelo pacijenta. Ovisno o specifičnosti antitijela sadržanih u serumu izdvajaju se bakteriolizini, citolizini, spirohetolizini, hemolizini i drugi.

Ova specifična antitijela se nazivaju "komplement". Nalazi se u gotovo svim tekućinama ljudskog tijela, ima složenu strukturu proteina i izuzetno je osjetljiv na povišenu temperaturu, tresenje, kiseline i direktnu sunčevu svjetlost. Ali kada se osuši, može zadržati svoja svojstva lize do šest mjeseci.

Postoje sljedeće vrste seroloških reakcija ovog tipa:

Bakterioliza;

Hemoliza.

Bakterioliza se provodi korištenjem krvnog seruma pacijenta i specifičnog imunološkog seruma sa živim mikrobima. Ako je dovoljna količina komplementa prisutna u krvi, istraživač će vidjeti lizu bakterija, a reakcija će se smatrati pozitivnom.

Druga serološka reakcija krvi je da se suspenzija crvenih krvnih stanica pacijenta tretira sa serumom koji sadrži hemolizine, koji se aktiviraju samo u prisustvu određenog komplimenta. Ako postoji, laboratorijski asistent promatra otapanje crvenih krvnih zrnaca. Ova reakcija se široko koristi u modernoj medicini za određivanje titra komplementa (odnosno njegove najmanje količine koja izaziva lizu crvenih krvnih zrnaca) u krvnom serumu i za provođenje testa fiksacije komplementa. Na taj način se provodi serološka reakcija na sifilis -

Reakcija fiksacije komplementa (CFR)

Ova reakcija se koristi za otkrivanje antitijela na infektivni agens u krvnom serumu pacijenta, kao i za identifikaciju patogena po njegovoj antigenskoj strukturi.

Do sada smo opisali jednostavne serološke reakcije. RSC se smatra složenom reakcijom, jer u njoj djeluju ne dva, već tri elementa: antitijelo, antigen i komplement. Njegova suština leži u činjenici da se interakcija između antitijela i antigena događa samo u prisustvu proteina komplementa, koji se adsorbiraju na površini nastalog AG-AT kompleksa.

Sami antigeni, nakon dodavanja komplementa, prolaze kroz značajne promjene, što ukazuje na kvalitet izvedene reakcije. To može biti liza, hemoliza, imobilizacija, baktericidni ili bakteriostatski učinak.

Sama reakcija se odvija u dvije faze:

1. Formiranje kompleksa antigen-antitijelo koje nije vizualno vidljivo istraživaču.
2. Promjena antigena pod utjecajem komplementa. Ova faza se najčešće može posmatrati golim okom. Ako reakcija nije vizualno vidljiva, tada se koristi dodatni sistem indikatora za identifikaciju promjena.

Sistem indikatora

Ova reakcija se zasniva na fiksaciji komplementa. Pročišćeni ovčiji eritrociti i hemolitički serum koji ne sadrži komplement dodaju se u epruvetu sat vremena nakon postavljanja RSC. Ako u epruveti ostane nevezani komplement, on će se pridružiti AG-AT kompleksu formiranom između ovčijih krvnih stanica i hemolizina i uzrokovati njihovo otapanje. To će značiti da je RSC negativan. Ako crvena krvna zrnca ostanu netaknuta, onda je reakcija pozitivna.

Reakcija hemaglutinacije (HRA)

Postoje dvije fundamentalno različite reakcije hemaglutinacije. Jedan od njih je serološki, koristi se za određivanje krvnih grupa. U ovom slučaju, crvena krvna zrnca stupaju u interakciju s antitijelima.

A druga reakcija nije serološka, ​​jer crvena krvna zrnca reagiraju s hemaglutininima koje proizvode virusi. Budući da svaki patogen djeluje samo na određena crvena krvna zrnca (piletina, janjetina, majmun), ova reakcija se može smatrati visoko specifičnom.

Možete reći da li je reakcija pozitivna ili negativna prema lokaciji krvnih stanica na dnu epruvete. Ako njihov uzorak podsjeća na obrnuti kišobran, to znači da je željeni virus prisutan u krvi pacijenta. A ako se sva crvena krvna zrnca formiraju poput stupca novčića, onda željeni patogeni ne postoje.

Reakcija inhibicije hemaglutinacije (HAI)

Ovo je vrlo specifična reakcija koja vam omogućava da odredite vrstu, vrstu virusa ili prisutnost specifičnih antitijela u krvnom serumu pacijenta.

Njegova suština leži u činjenici da antitijela koja se dodaju u epruvetu s materijalom za ispitivanje sprječavaju taloženje antigena na crvenim krvnim zrncima, čime se zaustavlja hemaglutinacija. Ovo je kvalitativni znak prisutnosti u krvi specifičnih antigena za određeni virus koji se traži.

Imunofluorescentna reakcija (RIF)

Reakcija se zasniva na sposobnosti detekcije AG-AT kompleksa nakon što se tretiraju fluorohromnim bojama. Ova metoda je jednostavna za korištenje, ne zahtijeva izolaciju čiste kulture i oduzima malo vremena. Neophodan je za brzu dijagnostiku zaraznih bolesti.

U praksi se ove serološke reakcije dijele na dvije vrste: direktne i indirektne.

Direktni RIF se proizvodi s antigenom koji je prethodno tretiran fluorescentnim serumom. A indirektna je da se lijek prvo tretira konvencionalnim dijagnostikumom koji sadrži antigene na željena antitijela, a zatim se ponovo nanosi luminiscentni serum koji je specifičan za proteine ​​AG-AT kompleksa i mikrobne stanice postaju vidljive pod mikroskopija.